尾加压素对新生大鼠心肌细胞一氧化氮合成的影响
1第二军医大学基础部生理学教研室；上海 200433；2北京大学第一医院心血管病研究所；3北京大学医学部生理系；北京 100038 李玲1；袁文俊1*；潘秀颉1；王伟忠1；邱景伟1；唐朝枢2；3
关键词：尿紧张素类；一氧化氮；内皮型一氧化氮合酶；心肌细胞；逆转录-多聚酶链反应
摘要：应用半定量逆转录-多聚酶链反应法, 观察尾加压素(urotensinⅡ, UⅡ)对培养的新生SD大鼠心肌细胞内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase, eNOS) mRNA表达的影响, 并测定UⅡ对心肌细胞内一氧化氮合酶(nitric oxide synthase, NOS)活性和一氧化氮(nitric oxide, NO)释放的影响。结果显示: UⅡ抑制培养的新生大鼠心肌细胞eNOS mRNA表达、 抑制NOS的活性及NO释放; 0.1 μmol/L浓度的UⅡ呈时间依赖性抑制心肌细胞NOS的活性及NO生成。上述实验结果提示UⅡ的心血管作用可能与NO合成系统有关。
, http://www.100md.com
尾加压素(urotensinⅡ, UⅡ)最初是从鱼脊髓尾垂体中分离提纯出来的神经肽, 近年发现在人体脊髓中也有分布[1]。UⅡ是迄今所知最强的缩血管活性肽, 其缩血管作用较内皮素高10倍以上[2]。静脉给予大剂量人UⅡ(hUⅡ)可引起猴血管收缩、心功能抑制等一系列心血管效应[2], hUⅡ还可增加人心肌的收缩力[3], UⅡ在心血管疾病的发生中可能起重要作用[2~4]。一氧化氮(nitric oxide, NO)是已知最强的内源性血管舒张物质, 在体内由L-精氨酸和分子氧在一氧化氮合酶 (nitric oxide synthase, NOS)的催化下产生; NOS主要有3种亚型: 神经型(nNOS)、 诱导型(iNOS)及内皮型(endothelial nitric oxide synthase, eNOS)。心肌细胞主要含有eNOS, 可自身合成NO[5]。NOS抑制剂可增强UⅡ收缩离体人和大鼠肺动脉[4], 表明UⅡ的缩血管作用可能和NO有关[ 4, 6~8]。但 UⅡ对心肌细胞NO合成的影响尚无报道。本文观察了大鼠UⅡ对新生大鼠心肌细胞eNOS mRNA表达、NOS的活性及NO生成的影响, 以探讨UⅡ与心肌细胞NO合成系统之间的关系, 进一步明确UⅡ在心血管调节中的作用机制。
, 百拇医药
1 材料和方法
1.1 材料 新生SD大鼠购自上海毕凯实验动物有限公司; DMEM培养基和TRIzol试剂盒购自Gibco公司; RT试剂盒购自Gene公司; 胰蛋白酶为Amersco公司产品; Tag酶、 dNTP及所有引物为上海生物工程公司产品; 胎牛血清购自杭州四季青生物工程材料研究所; NO和NOS测定试剂盒购自南京建成生物工程公司; Rat UⅡ为日本大阪Peptide公司产品; 紫外分光光度计(美国BioPharm公司); PCR仪(美国Bio-metra公司)。
1.2 心肌细胞的培养 采用1~3 d新生SD大鼠, 无菌条件下取出心室, 剪成1 mm3组织碎块。0.1%胰蛋白酶消化后, 离心收集细胞。加入含10%胎牛血清的DMEM培养液, 接种于6孔板中, 置于37℃、 5% CO2培养箱中培养。用1 h差速贴壁法除去非心肌细胞, 细胞计数, 配成1×106细胞/ml。心肌细胞培养的最初2 d, 培养液中加入0.1 mmol/L的5-溴脱氧尿嘧啶核苷抑制非心肌细胞生长。心肌细胞培养48 h, 换无血清培养基培养24 h后给药。以后每2天换液1次。
, http://www.100md.com
1.3 心肌细胞总RNA提取 收集心肌细胞, 用TRIzol试剂盒提取细胞总RNA, 紫外分光光度计测定RNA浓度和纯度, 重复测定3次, 计算样品总RNA浓度, OD260/OD280比值在1.8~2.0间。
1.4 引物 eNOS寡核苷酸引物: 上游5'-AAC ATG TGT CCT TGC TCG AGG CA-3', 下游5'-TTC CGG CGT CCA CCT GAT CCT AA-3', 该引物可扩增出长度340 bp的eNOS cDNA片段。β-actin寡核苷酸引物: 上游5'-TGG AAT CCT GTG GCA TCC ATG AAA C-3', 下游5'-TAA AAC GCA GCT CAG TAA CAG TCC G-3', 该引物可扩增出长度346 bp的β-actin cDNA片段。
1.5 RT- PCR 取5 μg上述总RNA为模板, 以oligo(dT)18为引物, 按RT试剂盒说明书合成cDNA, 反应总体积为20 μl, 37℃ 60 min, 95℃ 5 min终止反应。 PCR反应体系50 μl, 包括上述5 μl cDNA为模板, 引物1和2各50 pmol, 2.5 mmol/L dNTP 4 μl, 10×PCR缓冲液5 μl, Taq-DNA聚合酶2.5 U, 在PCR仪进行反应: 94℃ 1 min, 60℃ 1 min, 72℃ 1.5 min, 35个循环。
, 百拇医药
1.6 RT-PCR产物的检测和分析 取RT-PCR产物20 μl, 加4 μl上样缓冲液, 在含0.5 μg/ml溴化乙锭的1.5%琼脂糖凝胶上电泳, 60 V 60 min, 用凝胶电泳成像系统扫描定量。
1.7 心肌细胞NOS活性的测定 收集心肌细胞, 用0.1 mmol/L磷酸盐缓冲液(pH 7.4)重悬细胞, 超声波破碎细胞, 12000 g离心10 min, 取上清液作NOS活性测定, 按试剂盒所给步骤进行反应, 计算NOS活性。
1.8 细胞培养液NO浓度的测定 取细胞培养液0.1 ml, 测定NO代谢产物亚硝酸盐的含量来间接反映NO的生成, 按试剂盒所给步骤进行反应, 以亚硝酸钠作标准曲线, 计算NO释放量。
1.9 统计学处理 所有计量资料均用mean±SD表示, 采用t检验, P<0.05被认为有统计学意义。
, 百拇医药
2 结果
2.1 UⅡ对心肌细胞eNOS mRNA表达的影响
用RT-PCR产物琼脂糖凝胶电泳, 可清晰区分eNOS及β-actin扩增条带, 长度分别为340和346 bp, 与理论设计完全相符。经密度扫描仪测定eNOS和β-actin条带各自的峰面积分值, 计算eNOS mRNA/β-actin mRNA的比值。UⅡ(浓度为0.1 μmol/L)给药6、 12和24 h后, 心肌细胞eNOS mRNA水平显著减少, 呈时间依赖性。2.2 UⅡ对心肌细胞NOS活性的影响
UⅡ浓度为0.1和 1 μmol/L时NOS活性明显低于对照组[4.48±0.13 nmol/(min·mg) protein], 分别降低13%和20%(P<0.05,)。UⅡ(浓度为0.1 μmol/L)给药24、 48、 72、 96和120 h后与对照组相比, NOS活性分别降低14%、 21%、 24%、 25%和27%(P<0.05), 呈时间依赖性。2.3 UⅡ对心肌细胞NO生成的影响 UⅡ浓度为0.01、 0.1和 1 μmol/L时NO生成量明显低于对照组(14.33±1.25 nmol/1×106 cells·24 h-1), 分别降低15%、 19%和20%(P<0.05, 图3A)。UⅡ(浓度为0.1 μmol/L)给药24、 48、 72、 96 和 120 h 后与对照组相比, NO 生成量分别降低19%、 21%、 25%、 27%和31%(P<0.05), 呈时间依赖性。
, http://www.100md.com
3 讨论
UⅡ是已知最强的缩血管物质[9], NO是最强的血管舒张物质[5]。NOS抑制剂可减弱虾虎鱼UⅡ对大鼠的降压作用[4], 还可增强离体人和大鼠肺动脉[6]及灌流心脏的冠状动脉[7, 8]对hUⅡ的血管收缩反应, 表明UⅡ可能通过NOS/NO系统调节血管的舒缩活动。hUⅡ引起猴血管收缩时伴随严重的心功能抑制(±dP/dt和心输出量降低)[2], 尽管心电图异常十分明显, 但尚不清楚这是由于UⅡ对心肌的直接电生理作用还是继发于UⅡ引起冠脉缺血后的反应。最近Russell等[3]发现hUⅡ对心肌有直接作用, 而NO对心肌功能有重要的调节作用[10], NO是否参与UⅡ对心肌的直接作用尚不清楚。
本研究应用半定量逆转录-多聚酶链反应法(reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR)观察到UⅡ可抑制培养的新生大鼠心肌细胞eNOS mRNA表达。为避免不同样本间RNA含量的差异, 用看家基因作对照。本实验将不同处理组的eNOS mRNA表达水平相对于β-actin进行比较, 结果显示培养的心肌细胞可表达eNOS mRNA, 大鼠UⅡ可下调eNOS mRNA表达水平, 表明UⅡ呈时间依赖性抑制培养的新生大鼠心肌细胞eNOS mRNA表达。
, 百拇医药
本研究同时观察到UⅡ可直接抑制心肌细胞NOS的活性, 这同eNOS mRNA表达下降方向是一致的。UⅡ可抑制心肌细胞eNOS mRNA表达及NOS的活性, 表明UⅡ对心肌细胞有直接作用, 这也与hUⅡ可直接收缩人心肌条的报道相一致[3], 提示UⅡ与NOS的相互作用呈复杂的解剖及种属特异性。但是, NOS活性的降低是由于UⅡ的直接抑制作用还是由于UⅡ抑制eNOS mRNA的表达而引起, 尚有待进一步研究。
我们还发现UⅡ可抑制心肌细胞NO的合成, 这同 eNOS mRNA表达水平减少和NOS活性降低的观察是一致的, 提示UⅡ的心血管作用可能涉及NO合成。NO在调节心肌功能上起重要作用[5], 我们发现培养的心肌细胞具有NOS活性, 也支持NO对心功能有调节作用。UⅡ是迄今发现最强的正性变力物质[3], 而NO对心脏有负性变力作用[10], 因此我们不能排除UⅡ抑制NO合成对UⅡ成为最强的正性变力物质的贡献, 但UⅡ通过GPR14受体调节心肌细胞NOS活性及NO合成的机制尚有待进一步研究。
, http://www.100md.com
参 考 文 献
[1] Coulouarn Y, Lihrman I, Jegou S, Anouar Y, Tostivint H, Beauvillain JC, Conlon JM, Bern HA, Vaudry H. Cloning of cDNA encoding the urotensinⅡprecursor in frog and human reveals intense expression of the urotensinⅡgene in motoneurons of the spinal cord. Proc Natl Acad Sci USA, 1998, 95:15803~15808.
[2] Ames RS, Sarau HM, Chambers JK, Willette RN, Aiyar NV, Romanic AN, Louden CS, Foley JJ, Sauermelch CF, Coatney RW, Ao Z, Disa J, Holmes SD, Stadel JM, Martin JD, Liu WS, Glover GI, Wilson S, Mcnulty DE, Ellis CE, Elshouragy NA, Shabon U, Trill JJ, Hay DWP, Ohlstein EH, Bergsma DJ, Douglas SA. Human urotensin-Ⅱis a potent vasoconstrictor and agonist for the orphan receptor GPR14. Nature, 1999, 401(6750):282~286.
, 百拇医药
[3] Russell FD, Molenaar P, O'Brien DM. Cardiostimulant effects of urotensin-Ⅱin human heart in vitro. Br J Pharmacol, 2001,132:5~9.
[4] Douglas SA,Ohlstein EH.Human urotensin-Ⅱ,the most potent mammalian vasoconstrictor identified to date, as a therapeutic target for the management of cardiovascular disease. Trends Cardiovasc Med, 2000, 10:229~237.
[5] Kumar A, Brar R, Wang P, Dee L, Skorupa G, Khadour F, Schulz R, Parrillo JE. Role of nitric oxide and cGMP in human septic serum-induced depression of cardiac myocyte contractility. Am J Physiol, 1999,276(1 Pt 2):R265~R276.
, 百拇医药
[6] Maclean MR, Alexander D, Seirrar A, Gallagher M, Douglas SA, Ohlstein EH, Morecroft I, Pollard K. Contractile responses to human urotensin-Ⅱin rat and human pulmonary arteries: effect of endothelial factors and chronic hypoxia in the rat. Br J Pharmacol, 2000,130:201~204.
[7] Gray GA, Jones MR, Sharif I. Human urotensinⅡ increases coronary perfusion pressure in the isolated rat heart: potentiation by nitric oxide synthase and cyclooxygenase inhibition. Life Sci, 2001,69:175~180.
, 百拇医药
[8] Katano Y, Ishihata A, Aita T, Ogaki T, Horie T. Vasodilator effect of urotensinⅡ, one of the most potent vasoconstricting factors, on rat coronary arteries. Eur J Pharmacol, 2000,402(1-2):R5~R7.
[9] Douglas SA, Sulpizio AC, Piercy V, Sarau HM, Ames RS, Aiyar NV, Ohlstein EH, Willette RN. Differential vasoconstrictor activity of human urotensin-Ⅱ in vascular tissue isolated from the rat, mouse, dog, pig, marmoset and cynomolgus monkey. Br J Pharmacol, 2000,131:1262~1274.
[10] Finkel MS, Oddis CV, Jacob TD, Watkins SC, Hattler BG, Simmons RL. Negative inotropic effects of cytokines on the heart mediated by nitric oxide. Science, 1992,257:387~389., http://www.100md.com
关键词：尿紧张素类；一氧化氮；内皮型一氧化氮合酶；心肌细胞；逆转录-多聚酶链反应
摘要：应用半定量逆转录-多聚酶链反应法, 观察尾加压素(urotensinⅡ, UⅡ)对培养的新生SD大鼠心肌细胞内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase, eNOS) mRNA表达的影响, 并测定UⅡ对心肌细胞内一氧化氮合酶(nitric oxide synthase, NOS)活性和一氧化氮(nitric oxide, NO)释放的影响。结果显示: UⅡ抑制培养的新生大鼠心肌细胞eNOS mRNA表达、 抑制NOS的活性及NO释放; 0.1 μmol/L浓度的UⅡ呈时间依赖性抑制心肌细胞NOS的活性及NO生成。上述实验结果提示UⅡ的心血管作用可能与NO合成系统有关。
, http://www.100md.com
尾加压素(urotensinⅡ, UⅡ)最初是从鱼脊髓尾垂体中分离提纯出来的神经肽, 近年发现在人体脊髓中也有分布[1]。UⅡ是迄今所知最强的缩血管活性肽, 其缩血管作用较内皮素高10倍以上[2]。静脉给予大剂量人UⅡ(hUⅡ)可引起猴血管收缩、心功能抑制等一系列心血管效应[2], hUⅡ还可增加人心肌的收缩力[3], UⅡ在心血管疾病的发生中可能起重要作用[2~4]。一氧化氮(nitric oxide, NO)是已知最强的内源性血管舒张物质, 在体内由L-精氨酸和分子氧在一氧化氮合酶 (nitric oxide synthase, NOS)的催化下产生; NOS主要有3种亚型: 神经型(nNOS)、 诱导型(iNOS)及内皮型(endothelial nitric oxide synthase, eNOS)。心肌细胞主要含有eNOS, 可自身合成NO[5]。NOS抑制剂可增强UⅡ收缩离体人和大鼠肺动脉[4], 表明UⅡ的缩血管作用可能和NO有关[ 4, 6~8]。但 UⅡ对心肌细胞NO合成的影响尚无报道。本文观察了大鼠UⅡ对新生大鼠心肌细胞eNOS mRNA表达、NOS的活性及NO生成的影响, 以探讨UⅡ与心肌细胞NO合成系统之间的关系, 进一步明确UⅡ在心血管调节中的作用机制。
, 百拇医药
1 材料和方法
1.1 材料 新生SD大鼠购自上海毕凯实验动物有限公司; DMEM培养基和TRIzol试剂盒购自Gibco公司; RT试剂盒购自Gene公司; 胰蛋白酶为Amersco公司产品; Tag酶、 dNTP及所有引物为上海生物工程公司产品; 胎牛血清购自杭州四季青生物工程材料研究所; NO和NOS测定试剂盒购自南京建成生物工程公司; Rat UⅡ为日本大阪Peptide公司产品; 紫外分光光度计(美国BioPharm公司); PCR仪(美国Bio-metra公司)。
1.2 心肌细胞的培养 采用1~3 d新生SD大鼠, 无菌条件下取出心室, 剪成1 mm3组织碎块。0.1%胰蛋白酶消化后, 离心收集细胞。加入含10%胎牛血清的DMEM培养液, 接种于6孔板中, 置于37℃、 5% CO2培养箱中培养。用1 h差速贴壁法除去非心肌细胞, 细胞计数, 配成1×106细胞/ml。心肌细胞培养的最初2 d, 培养液中加入0.1 mmol/L的5-溴脱氧尿嘧啶核苷抑制非心肌细胞生长。心肌细胞培养48 h, 换无血清培养基培养24 h后给药。以后每2天换液1次。
, http://www.100md.com
1.3 心肌细胞总RNA提取 收集心肌细胞, 用TRIzol试剂盒提取细胞总RNA, 紫外分光光度计测定RNA浓度和纯度, 重复测定3次, 计算样品总RNA浓度, OD260/OD280比值在1.8~2.0间。
1.4 引物 eNOS寡核苷酸引物: 上游5'-AAC ATG TGT CCT TGC TCG AGG CA-3', 下游5'-TTC CGG CGT CCA CCT GAT CCT AA-3', 该引物可扩增出长度340 bp的eNOS cDNA片段。β-actin寡核苷酸引物: 上游5'-TGG AAT CCT GTG GCA TCC ATG AAA C-3', 下游5'-TAA AAC GCA GCT CAG TAA CAG TCC G-3', 该引物可扩增出长度346 bp的β-actin cDNA片段。
1.5 RT- PCR 取5 μg上述总RNA为模板, 以oligo(dT)18为引物, 按RT试剂盒说明书合成cDNA, 反应总体积为20 μl, 37℃ 60 min, 95℃ 5 min终止反应。 PCR反应体系50 μl, 包括上述5 μl cDNA为模板, 引物1和2各50 pmol, 2.5 mmol/L dNTP 4 μl, 10×PCR缓冲液5 μl, Taq-DNA聚合酶2.5 U, 在PCR仪进行反应: 94℃ 1 min, 60℃ 1 min, 72℃ 1.5 min, 35个循环。
, 百拇医药
1.6 RT-PCR产物的检测和分析 取RT-PCR产物20 μl, 加4 μl上样缓冲液, 在含0.5 μg/ml溴化乙锭的1.5%琼脂糖凝胶上电泳, 60 V 60 min, 用凝胶电泳成像系统扫描定量。
1.7 心肌细胞NOS活性的测定 收集心肌细胞, 用0.1 mmol/L磷酸盐缓冲液(pH 7.4)重悬细胞, 超声波破碎细胞, 12000 g离心10 min, 取上清液作NOS活性测定, 按试剂盒所给步骤进行反应, 计算NOS活性。
1.8 细胞培养液NO浓度的测定 取细胞培养液0.1 ml, 测定NO代谢产物亚硝酸盐的含量来间接反映NO的生成, 按试剂盒所给步骤进行反应, 以亚硝酸钠作标准曲线, 计算NO释放量。
1.9 统计学处理 所有计量资料均用mean±SD表示, 采用t检验, P<0.05被认为有统计学意义。
, 百拇医药
2 结果
2.1 UⅡ对心肌细胞eNOS mRNA表达的影响
用RT-PCR产物琼脂糖凝胶电泳, 可清晰区分eNOS及β-actin扩增条带, 长度分别为340和346 bp, 与理论设计完全相符。经密度扫描仪测定eNOS和β-actin条带各自的峰面积分值, 计算eNOS mRNA/β-actin mRNA的比值。UⅡ(浓度为0.1 μmol/L)给药6、 12和24 h后, 心肌细胞eNOS mRNA水平显著减少, 呈时间依赖性。2.2 UⅡ对心肌细胞NOS活性的影响
UⅡ浓度为0.1和 1 μmol/L时NOS活性明显低于对照组[4.48±0.13 nmol/(min·mg) protein], 分别降低13%和20%(P<0.05,)。UⅡ(浓度为0.1 μmol/L)给药24、 48、 72、 96和120 h后与对照组相比, NOS活性分别降低14%、 21%、 24%、 25%和27%(P<0.05), 呈时间依赖性。2.3 UⅡ对心肌细胞NO生成的影响 UⅡ浓度为0.01、 0.1和 1 μmol/L时NO生成量明显低于对照组(14.33±1.25 nmol/1×106 cells·24 h-1), 分别降低15%、 19%和20%(P<0.05, 图3A)。UⅡ(浓度为0.1 μmol/L)给药24、 48、 72、 96 和 120 h 后与对照组相比, NO 生成量分别降低19%、 21%、 25%、 27%和31%(P<0.05), 呈时间依赖性。
, http://www.100md.com
3 讨论
UⅡ是已知最强的缩血管物质[9], NO是最强的血管舒张物质[5]。NOS抑制剂可减弱虾虎鱼UⅡ对大鼠的降压作用[4], 还可增强离体人和大鼠肺动脉[6]及灌流心脏的冠状动脉[7, 8]对hUⅡ的血管收缩反应, 表明UⅡ可能通过NOS/NO系统调节血管的舒缩活动。hUⅡ引起猴血管收缩时伴随严重的心功能抑制(±dP/dt和心输出量降低)[2], 尽管心电图异常十分明显, 但尚不清楚这是由于UⅡ对心肌的直接电生理作用还是继发于UⅡ引起冠脉缺血后的反应。最近Russell等[3]发现hUⅡ对心肌有直接作用, 而NO对心肌功能有重要的调节作用[10], NO是否参与UⅡ对心肌的直接作用尚不清楚。
本研究应用半定量逆转录-多聚酶链反应法(reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR)观察到UⅡ可抑制培养的新生大鼠心肌细胞eNOS mRNA表达。为避免不同样本间RNA含量的差异, 用看家基因作对照。本实验将不同处理组的eNOS mRNA表达水平相对于β-actin进行比较, 结果显示培养的心肌细胞可表达eNOS mRNA, 大鼠UⅡ可下调eNOS mRNA表达水平, 表明UⅡ呈时间依赖性抑制培养的新生大鼠心肌细胞eNOS mRNA表达。
, 百拇医药
本研究同时观察到UⅡ可直接抑制心肌细胞NOS的活性, 这同eNOS mRNA表达下降方向是一致的。UⅡ可抑制心肌细胞eNOS mRNA表达及NOS的活性, 表明UⅡ对心肌细胞有直接作用, 这也与hUⅡ可直接收缩人心肌条的报道相一致[3], 提示UⅡ与NOS的相互作用呈复杂的解剖及种属特异性。但是, NOS活性的降低是由于UⅡ的直接抑制作用还是由于UⅡ抑制eNOS mRNA的表达而引起, 尚有待进一步研究。
我们还发现UⅡ可抑制心肌细胞NO的合成, 这同 eNOS mRNA表达水平减少和NOS活性降低的观察是一致的, 提示UⅡ的心血管作用可能涉及NO合成。NO在调节心肌功能上起重要作用[5], 我们发现培养的心肌细胞具有NOS活性, 也支持NO对心功能有调节作用。UⅡ是迄今发现最强的正性变力物质[3], 而NO对心脏有负性变力作用[10], 因此我们不能排除UⅡ抑制NO合成对UⅡ成为最强的正性变力物质的贡献, 但UⅡ通过GPR14受体调节心肌细胞NOS活性及NO合成的机制尚有待进一步研究。
, http://www.100md.com
参 考 文 献
[1] Coulouarn Y, Lihrman I, Jegou S, Anouar Y, Tostivint H, Beauvillain JC, Conlon JM, Bern HA, Vaudry H. Cloning of cDNA encoding the urotensinⅡprecursor in frog and human reveals intense expression of the urotensinⅡgene in motoneurons of the spinal cord. Proc Natl Acad Sci USA, 1998, 95:15803~15808.
[2] Ames RS, Sarau HM, Chambers JK, Willette RN, Aiyar NV, Romanic AN, Louden CS, Foley JJ, Sauermelch CF, Coatney RW, Ao Z, Disa J, Holmes SD, Stadel JM, Martin JD, Liu WS, Glover GI, Wilson S, Mcnulty DE, Ellis CE, Elshouragy NA, Shabon U, Trill JJ, Hay DWP, Ohlstein EH, Bergsma DJ, Douglas SA. Human urotensin-Ⅱis a potent vasoconstrictor and agonist for the orphan receptor GPR14. Nature, 1999, 401(6750):282~286.
, 百拇医药
[3] Russell FD, Molenaar P, O'Brien DM. Cardiostimulant effects of urotensin-Ⅱin human heart in vitro. Br J Pharmacol, 2001,132:5~9.
[4] Douglas SA,Ohlstein EH.Human urotensin-Ⅱ,the most potent mammalian vasoconstrictor identified to date, as a therapeutic target for the management of cardiovascular disease. Trends Cardiovasc Med, 2000, 10:229~237.
[5] Kumar A, Brar R, Wang P, Dee L, Skorupa G, Khadour F, Schulz R, Parrillo JE. Role of nitric oxide and cGMP in human septic serum-induced depression of cardiac myocyte contractility. Am J Physiol, 1999,276(1 Pt 2):R265~R276.
, 百拇医药
[6] Maclean MR, Alexander D, Seirrar A, Gallagher M, Douglas SA, Ohlstein EH, Morecroft I, Pollard K. Contractile responses to human urotensin-Ⅱin rat and human pulmonary arteries: effect of endothelial factors and chronic hypoxia in the rat. Br J Pharmacol, 2000,130:201~204.
[7] Gray GA, Jones MR, Sharif I. Human urotensinⅡ increases coronary perfusion pressure in the isolated rat heart: potentiation by nitric oxide synthase and cyclooxygenase inhibition. Life Sci, 2001,69:175~180.
, 百拇医药
[8] Katano Y, Ishihata A, Aita T, Ogaki T, Horie T. Vasodilator effect of urotensinⅡ, one of the most potent vasoconstricting factors, on rat coronary arteries. Eur J Pharmacol, 2000,402(1-2):R5~R7.
[9] Douglas SA, Sulpizio AC, Piercy V, Sarau HM, Ames RS, Aiyar NV, Ohlstein EH, Willette RN. Differential vasoconstrictor activity of human urotensin-Ⅱ in vascular tissue isolated from the rat, mouse, dog, pig, marmoset and cynomolgus monkey. Br J Pharmacol, 2000,131:1262~1274.
[10] Finkel MS, Oddis CV, Jacob TD, Watkins SC, Hattler BG, Simmons RL. Negative inotropic effects of cytokines on the heart mediated by nitric oxide. Science, 1992,257:387~389., http://www.100md.com