血管生成抑素endostatin的表达、纯化及活性研究
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第二军医大学基础医学部微生物学教研室上海200433 贺祥；科研部；王路；潘卫；曹明媚；戚中田
血管生成抑素|基因表达|内皮细胞|生物学效应
参见附件(123kb)。
第二军医大学基础医学部微生物学教研室上海200433 贺祥；科研部；王路；潘卫；曹明媚；戚中田
关键词：血管生成抑素；基因表达；内皮细胞；生物学效应
摘要：目的:将从人胎肝组织克隆的血管生成抑素endostatin基因进行原核表达、纯化,检测重组endostatin的生物学活性。方法:利用原核表达载体pBV220在大肠杆菌DH5α中表达endostatin,利用肝素Sepharose亲和层析及SephacrylS-200分子筛纯化;通过体外内皮细胞(ECV304)增殖实验及体内鸡胚尿囊膜(CAM)新生血管实验检测其抑制活性。结果:Endo-statin在DH5α中的表达率为28.5%,纯化后纯度可达90.5%。Endostatin可明显抑制体外培养的内皮细胞增殖,IC50为72μg/ml;20μg/ml时使细胞于48h发生明显凋亡;200μg/ml的endostatin可使CAM新生血管化率下降30%。结论:研究结果表明endostatin对内皮细胞具有明显抑制作用,提示其在肿瘤及新生血管性疾病的治疗中有潜在的应用前景。
第二军医大学基础医学部微生物学教研室上海200433 贺祥；科研部；王路；潘卫；曹明媚；戚中田
关键词：血管生成抑素；基因表达；内皮细胞；生物学效应
摘要：目的:将从人胎肝组织克隆的血管生成抑素endostatin基因进行原核表达、纯化,检测重组endostatin的生物学活性。方法:利用原核表达载体pBV220在大肠杆菌DH5α中表达endostatin,利用肝素Sepharose亲和层析及SephacrylS-200分子筛纯化;通过体外内皮细胞(ECV304)增殖实验及体内鸡胚尿囊膜(CAM)新生血管实验检测其抑制活性。结果:Endo-statin在DH5α中的表达率为28.5%,纯化后纯度可达90.5%。Endostatin可明显抑制体外培养的内皮细胞增殖,IC50为72μg/ml;20μg/ml时使细胞于48h发生明显凋亡;200μg/ml的endostatin可使CAM新生血管化率下降30%。结论:研究结果表明endostatin对内皮细胞具有明显抑制作用,提示其在肿瘤及新生血管性疾病的治疗中有潜在的应用前景。
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