NT-3基因克隆与表达
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蚌埠医学院临床生化教研室；中山医科大学解剖学教研室 安徽蚌埠233003；广东广州510089 陈昌杰；何蕴韶
参见附件(53kb)。
蚌埠医学院临床生化教研室；中山医科大学解剖学教研室 安徽蚌埠233003；广东广州510089 陈昌杰；何蕴韶
关键词：神经营养素3；克隆；表达
摘要：目的:探讨利用基因工程技术制备神经营养素 3(Neurotrophin 3,NT 3)的方法。方法:根据NT 3cDNA序列设计一对引物,采用聚合酶链反应,扩增编码人NT 3基因,通过基因重组,构建表达载体PBV220 NT 3。自动序列分析测定TN 3序列。将重组PBV220 NT 3转化到大肠杆菌DH5α中,温度诱导目的基因表达。透视电镜观察诱导后的工程菌。薄层凝胶扫描分析目的基因表达量。Westernbkot鉴定其免疫活性。结果:序列分析结果与文献报道一致;目的基因在温度诱导下表达量为25%,表达产物以包涵体形式存在于工程菌菌体两端,大小不一;Westernbkot阳性。结论:本实验利用基因工程技术制备NT 3是可行的,且表达量为25%,表达产物具有免疫活性,为进一步研究其生物学功能奠定基础。
蚌埠医学院临床生化教研室；中山医科大学解剖学教研室 安徽蚌埠233003；广东广州510089 陈昌杰；何蕴韶
关键词：神经营养素3；克隆；表达
摘要：目的:探讨利用基因工程技术制备神经营养素 3(Neurotrophin 3,NT 3)的方法。方法:根据NT 3cDNA序列设计一对引物,采用聚合酶链反应,扩增编码人NT 3基因,通过基因重组,构建表达载体PBV220 NT 3。自动序列分析测定TN 3序列。将重组PBV220 NT 3转化到大肠杆菌DH5α中,温度诱导目的基因表达。透视电镜观察诱导后的工程菌。薄层凝胶扫描分析目的基因表达量。Westernbkot鉴定其免疫活性。结果:序列分析结果与文献报道一致;目的基因在温度诱导下表达量为25%,表达产物以包涵体形式存在于工程菌菌体两端,大小不一;Westernbkot阳性。结论:本实验利用基因工程技术制备NT 3是可行的,且表达量为25%,表达产物具有免疫活性,为进一步研究其生物学功能奠定基础。
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