酵母双杂合系统BD端血型糖蛋白A表达质粒的构建

http://www.100md.com 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所国家重点实验室；哈尔滨医科大学病理生理学教研室；黑龙江哈尔滨150086；黑

    参见附件(76kb)。

     中国农业科学院哈尔滨兽医研究所国家重点实验室；哈尔滨医科大学病理生理学教研室；黑龙江哈尔滨150086；黑龙江哈尔滨150001 李宏涛；傅国辉；姜晓姝；张宝山；孔宪刚

    关键词：血型糖蛋白；酵母菌；膜蛋白质类

    摘要： 目的 :获得血型糖蛋白A(GPA)cDNA片段 ,并构建酵母双杂合BD端表达质粒。方法 :利用RT -PCR方法 ,从K5 6 2细胞mRNA中扩增GPAcDNA片段 ,约 410bp。测序后将其克隆至pbridge载体上。用醋酸锂法将构建好的pbridge -GPA转染酵母菌AH10 9,观察其在选择性培养基上的表达情况。结果 :克隆到的 410bpGPAcDNA编码的氨基酸序列基本与公布序列相同。pbridge—GPA转染酵母菌后 ,在SD/Gal/—His/Ura培养基上出现 1mm大小白色菌落。结论 :获得了血型糖蛋白AcDNA克隆 ,pbridge—GPA对酵母无毒性 ,不能激活检测基因 ,可作为酵母双杂合系统中的靶基因。

    http://www.100md.com/html/analecta/2002/12/01/04/603.htm

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