结核分枝杆菌抗原蛋白ESAT-6基因重组穿梭质粒的构建与鉴定
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四川大学华西基础医学与法医学院感染免疫研究室 成都610041 陈玮；鲍朗；谢勇恩；胡昌华；张万江；李学敏；
结核分枝杆菌|ESAT-6|重组穿梭质粒PCR扩增
参见附件(149kb)。
四川大学华西基础医学与法医学院感染免疫研究室 成都610041 陈玮；鲍朗；谢勇恩；胡昌华；张万江；李学敏；张会东
关键词：结核分枝杆菌；ESAT-6；重组穿梭质粒PCR扩增
摘要：目的 构建分泌性表达结核分枝杆菌抗原蛋白ESAT-6的重组卡介苗。方法 分别以卡介苗(BCG)和结核分枝杆菌H37Rv株基因组DNA为模板,通过PCR扩增得到约117bp的BCGα抗原(α-Ag)信号肽序列和285bp的结核杆菌esat-6基因序列。将esat-6基因与大肠杆菌-卡介苗穿梭质粒载体pMV261重组,得到重组质粒pME。再将BCGα-Ag信号肽序列克隆至pME中,得到重组质粒pSME。结果 质粒pSME用双酶切和PCR扩增鉴定证实,克隆基因α-Ag信号肽序列和esat-6正确插入载体pMV261。结论 重组质粒pSME可望在BCG中分泌性表达结核分枝杆菌的免疫保护性抗原蛋白ESAT-6,该质粒的构建成功为改造卡介苗、发展新型结核病疫苗奠定了基础。
四川大学华西基础医学与法医学院感染免疫研究室 成都610041 陈玮；鲍朗；谢勇恩；胡昌华；张万江；李学敏；张会东
关键词：结核分枝杆菌；ESAT-6；重组穿梭质粒PCR扩增
摘要：目的 构建分泌性表达结核分枝杆菌抗原蛋白ESAT-6的重组卡介苗。方法 分别以卡介苗(BCG)和结核分枝杆菌H37Rv株基因组DNA为模板,通过PCR扩增得到约117bp的BCGα抗原(α-Ag)信号肽序列和285bp的结核杆菌esat-6基因序列。将esat-6基因与大肠杆菌-卡介苗穿梭质粒载体pMV261重组,得到重组质粒pME。再将BCGα-Ag信号肽序列克隆至pME中,得到重组质粒pSME。结果 质粒pSME用双酶切和PCR扩增鉴定证实,克隆基因α-Ag信号肽序列和esat-6正确插入载体pMV261。结论 重组质粒pSME可望在BCG中分泌性表达结核分枝杆菌的免疫保护性抗原蛋白ESAT-6,该质粒的构建成功为改造卡介苗、发展新型结核病疫苗奠定了基础。
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