一种改进的大引物PCR定点诱变方法
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第一军医大学细胞生物学与医学遗传学教研室 510515广州 莫秋华；徐湘民；钟雄霖；刘忠英
大引物|聚合酶链反应|定点诱变|β珠蛋白基因
参见附件(141kb)。
第一军医大学细胞生物学与医学遗传学教研室 510515广州 莫秋华；徐湘民；钟雄霖；刘忠英
关键词：大引物；聚合酶链反应；定点诱变；β珠蛋白基因
摘要：目的 建立一种改进的、简便易行的大引物 PCR定点诱变技术。方法 在两轮 PCR中设计了两种不同的质粒 DNA模板 ,两者分别缺少正向或反向外侧引物可结合的互补序列 ;当两种模板和两条外侧引物同时存在于一个反应管时 ,可以完全避免对野生型目的基因全长的扩增。第 1轮 PCR由正向外侧引物和突变引物合成大引物 ,这一产物无需凝胶纯化而直接用于第 2轮 PCR。第 2轮 PCR的第 1阶段由大引物延伸合成全长突变终产物 ,两条外侧引物则在第 2阶段指数扩增 ,所有终产物均含所需致突变位点。结果 用此方法对中国人 β地中海贫血 15种稀少突变类型进行定点诱变 ,
第一军医大学细胞生物学与医学遗传学教研室 510515广州 莫秋华；徐湘民；钟雄霖；刘忠英
关键词：大引物；聚合酶链反应；定点诱变；β珠蛋白基因
摘要：目的 建立一种改进的、简便易行的大引物 PCR定点诱变技术。方法 在两轮 PCR中设计了两种不同的质粒 DNA模板 ,两者分别缺少正向或反向外侧引物可结合的互补序列 ;当两种模板和两条外侧引物同时存在于一个反应管时 ,可以完全避免对野生型目的基因全长的扩增。第 1轮 PCR由正向外侧引物和突变引物合成大引物 ,这一产物无需凝胶纯化而直接用于第 2轮 PCR。第 2轮 PCR的第 1阶段由大引物延伸合成全长突变终产物 ,两条外侧引物则在第 2阶段指数扩增 ,所有终产物均含所需致突变位点。结果 用此方法对中国人 β地中海贫血 15种稀少突变类型进行定点诱变 ,
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