丙型肝炎病毒NS3蛋白酶结构域在昆虫细胞中的表达及鉴定
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军事医学科学院微生物流行病研究所应用分子生物学实验室 100071北京 杜桂鑫；侯利华；王海涛
肝炎病毒|丙型|丝氨酸蛋白酶|昆虫细胞|去垢剂
参见附件(63kb)。
军事医学科学院微生物流行病研究所应用分子生物学实验室 100071北京 杜桂鑫；侯利华；王海涛
关键词：肝炎病毒；丙型；丝氨酸蛋白酶；昆虫细胞；去垢剂
摘要：目的 利用杆状病毒 昆虫细胞表达系统制备丙型肝炎病毒 (HCV)丝氨酸蛋白酶结构域 (proteasedomain)的重组蛋白。方法 构建含有HCV丝氨酸蛋白酶结构域基因的杆状病毒转移载体 pFBCNS3N ,转化大肠杆菌DH10Bac进行转座 ,提取重组Bacmid用Lipofectamine法转染昆虫细胞Sf9包装成重组杆状病毒。用重组杆状病毒感染昆虫细胞进行蛋白表达 ,用SDS PAGE电泳和免疫印迹实验分析表达情况 ;利用去垢剂十二烷基肌酸钠溶解重组蛋白后以Ni NTAagrose柱亲和纯化重组蛋白 ;以重组蛋白NS5ab(包含NS5A羟基端部分和NS5B氨基端部分的重组蛋白 )为底物检测丝氨酸蛋白酶的酶...
军事医学科学院微生物流行病研究所应用分子生物学实验室 100071北京 杜桂鑫；侯利华；王海涛
关键词：肝炎病毒；丙型；丝氨酸蛋白酶；昆虫细胞；去垢剂
摘要：目的 利用杆状病毒 昆虫细胞表达系统制备丙型肝炎病毒 (HCV)丝氨酸蛋白酶结构域 (proteasedomain)的重组蛋白。方法 构建含有HCV丝氨酸蛋白酶结构域基因的杆状病毒转移载体 pFBCNS3N ,转化大肠杆菌DH10Bac进行转座 ,提取重组Bacmid用Lipofectamine法转染昆虫细胞Sf9包装成重组杆状病毒。用重组杆状病毒感染昆虫细胞进行蛋白表达 ,用SDS PAGE电泳和免疫印迹实验分析表达情况 ;利用去垢剂十二烷基肌酸钠溶解重组蛋白后以Ni NTAagrose柱亲和纯化重组蛋白 ;以重组蛋白NS5ab(包含NS5A羟基端部分和NS5B氨基端部分的重组蛋白 )为底物检测丝氨酸蛋白酶的酶...
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