恙虫病东方体47kDa蛋白基因部分片段的克隆与表达
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军事医学科学院微生物流行病研究所 北京100071 牛东升；陈香蕊；张雪颖；陈唯军；陈梅玲；崔红；魏文进；温
恙虫病东方体|47kDa基因|克隆|表达
参见附件(50kb)。
军事医学科学院微生物流行病研究所 北京100071 牛东升；陈香蕊；张雪颖；陈唯军；陈梅玲；崔红；魏文进；温博海
关键词：恙虫病东方体；47kDa基因；克隆；表达
摘要：目的 表达恙虫病东方体 (Orientiatsutsugamushi,Ot) 4 7kDa保护性抗原蛋白。 方法 采用PCR方法 ,从OtKarp株基因组DNA中扩增出 4 7kDa蛋白基因片段 ,鉴定后将该片段克隆于原核表达载体 pBV2 2 0 ,构建成重组质粒pBV -4 7。用该重组质粒转化E coli,转化子在 4 2℃诱导表达并对其鉴定。结果 (1)获得长约 14 30bp的PCR片段 ,序列分析结果与已知 4 7kDa基因序列相同 ;(2 )SDS -PAGE检测表达产物 ,在相对分子量 4 0× 10 3 处有表达带 ;(3)经薄层扫描分析 ,目的蛋白占全菌蛋白的 19% ;(4)免疫印迹实验证明其具有免疫反应性。
军事医学科学院微生物流行病研究所 北京100071 牛东升；陈香蕊；张雪颖；陈唯军；陈梅玲；崔红；魏文进；温博海
关键词：恙虫病东方体；47kDa基因；克隆；表达
摘要：目的 表达恙虫病东方体 (Orientiatsutsugamushi,Ot) 4 7kDa保护性抗原蛋白。 方法 采用PCR方法 ,从OtKarp株基因组DNA中扩增出 4 7kDa蛋白基因片段 ,鉴定后将该片段克隆于原核表达载体 pBV2 2 0 ,构建成重组质粒pBV -4 7。用该重组质粒转化E coli,转化子在 4 2℃诱导表达并对其鉴定。结果 (1)获得长约 14 30bp的PCR片段 ,序列分析结果与已知 4 7kDa基因序列相同 ;(2 )SDS -PAGE检测表达产物 ,在相对分子量 4 0× 10 3 处有表达带 ;(3)经薄层扫描分析 ,目的蛋白占全菌蛋白的 19% ;(4)免疫印迹实验证明其具有免疫反应性。
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