氯霉素乙酰基转移酶双抗体夹心ELISA检测方法的建立
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中国预防医学科学院病毒学研究所 100052北京 高晨；侯星生；张福萍；周伟；袁育康；董小平
氯霉素乙酰转移酶|抗体|病毒|酶联免疫吸附测定|人乳头状瘤病毒
参见附件(98kb)。
中国预防医学科学院病毒学研究所 100052北京 高晨；侯星生；张福萍；周伟；袁育康；董小平
关键词：氯霉素乙酰转移酶；抗体；病毒；酶联免疫吸附测定；人乳头状瘤病毒
摘要：目的 建立氯霉素乙酰基转移酶 (chloramphenicolacetyltransferase ,CAT)双抗体夹心ELISA的实验室检测方法。方法 从质粒pBLCAT6经PCR扩增CAT基因序列 ,插入到原核表达质粒pGEX 2T中 ,在大肠埃希菌DH5α中诱导表达 ;以纯化的融合蛋白GST CAT为抗原免疫实验用兔 ,得到的CAT抗血清进行生物素标记 ,并在此基础上利用生物素链和亲和素放大系统建立双抗体夹心ELISA法。构建不同YY1结合位点突变的HPV16LCRCAT报道质粒 ,体外瞬时转染真核细胞 ,提取胞质蛋白 ,以建立的方法进行CAT表达检测。结果 SDS PAGE显示表达的GST CAT融合蛋白相对分子质量约为 5 40 0 ...
中国预防医学科学院病毒学研究所 100052北京 高晨；侯星生；张福萍；周伟；袁育康；董小平
关键词：氯霉素乙酰转移酶；抗体；病毒；酶联免疫吸附测定；人乳头状瘤病毒
摘要：目的 建立氯霉素乙酰基转移酶 (chloramphenicolacetyltransferase ,CAT)双抗体夹心ELISA的实验室检测方法。方法 从质粒pBLCAT6经PCR扩增CAT基因序列 ,插入到原核表达质粒pGEX 2T中 ,在大肠埃希菌DH5α中诱导表达 ;以纯化的融合蛋白GST CAT为抗原免疫实验用兔 ,得到的CAT抗血清进行生物素标记 ,并在此基础上利用生物素链和亲和素放大系统建立双抗体夹心ELISA法。构建不同YY1结合位点突变的HPV16LCRCAT报道质粒 ,体外瞬时转染真核细胞 ,提取胞质蛋白 ,以建立的方法进行CAT表达检测。结果 SDS PAGE显示表达的GST CAT融合蛋白相对分子质量约为 5 40 0 ...
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