猪囊尾蚴抗原cC1在巴斯德毕赤酵母中的表达
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上海第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室 上海200433 杨湘越；孙树汉；陈蕊雯；郭瀛军；颜宏利
cC1cDNA|克隆表达|巴斯德毕赤酵母
参见附件(49kb)。
上海第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室 上海200433 杨湘越；孙树汉；陈蕊雯；郭瀛军；颜宏利
关键词：cC1cDNA；克隆表达；巴斯德毕赤酵母
摘要：目的 克隆并在巴斯德毕赤酵母中表达猪囊尾蚴抗原cC1。方法 用PCR法在cC1cDNA5′端引入所需限制酶位点和酵母分泌信号肽 ,与酵母表达载体pPIC9k重组 ,构建表达质粒 pPIC9k -cC1。采用电穿孔法转化酵母菌SMD116 8,在MD平板上筛选重组克隆 ,用G4 18快速筛选高拷贝转化子 ,阳性克隆经甲醇诱导表达后 ,培养上清SDS -PAGE和Westernblot鉴定。结果 PCR产物经测序无误 ,pPIC9-cC1和 pPIC9k -cC1酶切分析与预期相符 ,获取 86 3个酵母阳性重组克隆及9个高拷贝转化子。表达产物cC1的分子量约 4 2kDa ,占分泌总蛋白 80 %以上 ,产物浓度为 2 0 0 - 35 0mg/L。Wes...
上海第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室 上海200433 杨湘越；孙树汉；陈蕊雯；郭瀛军；颜宏利
关键词：cC1cDNA；克隆表达；巴斯德毕赤酵母
摘要：目的 克隆并在巴斯德毕赤酵母中表达猪囊尾蚴抗原cC1。方法 用PCR法在cC1cDNA5′端引入所需限制酶位点和酵母分泌信号肽 ,与酵母表达载体pPIC9k重组 ,构建表达质粒 pPIC9k -cC1。采用电穿孔法转化酵母菌SMD116 8,在MD平板上筛选重组克隆 ,用G4 18快速筛选高拷贝转化子 ,阳性克隆经甲醇诱导表达后 ,培养上清SDS -PAGE和Westernblot鉴定。结果 PCR产物经测序无误 ,pPIC9-cC1和 pPIC9k -cC1酶切分析与预期相符 ,获取 86 3个酵母阳性重组克隆及9个高拷贝转化子。表达产物cC1的分子量约 4 2kDa ,占分泌总蛋白 80 %以上 ,产物浓度为 2 0 0 - 35 0mg/L。Wes...
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