p65 DNA结合域的克隆、表达及其酵母双杂交自身激活作用检测
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第三军医大学附属大坪医院野战外科研究所第一研究室 重庆400042；重庆400038 徐祥；梁华平；刘昕；代佳平；
核因子-κB|p65|酵母双杂交|自身激活作用|酵母表达,p65DNA结合域的克隆、表达及其酵母双杂交自身激活作用检测
参见附件(63kb)。
第三军医大学附属大坪医院野战外科研究所第一研究室 重庆400042；重庆400038 徐祥；梁华平；刘昕；代佳平；刘琛；罗艳；王正国
关键词：核因子-κB；p65；酵母双杂交；自身激活作用；酵母表达
摘要：目的 获得NF κBp65亚基DNA结合域cDNA及构建酵母双杂交系统中的靶基因 ,并检测靶基因的表达和自身激活活性。方法 利用引物二聚体搭桥技术 ,扩增p65亚基DNA结合域基因片段 ,并将其克隆入酵母双杂交载体pG BKT7DNA BD。应用醋酸锂法转化酵母细胞AH10 9,在SD Trp选择培养基上培养 ,观察转化株的生长情况。按尿素 SDS法抽提酵母蛋白 ,用SDS PAGE电泳和Western blot鉴定靶蛋白在酵母细胞中的表达。利用液相法和平板法检测阳性转化株 β 半乳糖苷酶的活性。 结果 获得p65DNA结合域基因片段 ,并成功构建酵母双杂交系统中的靶基因。靶基因能在酵母细胞中
第三军医大学附属大坪医院野战外科研究所第一研究室 重庆400042；重庆400038 徐祥；梁华平；刘昕；代佳平；刘琛；罗艳；王正国
关键词：核因子-κB；p65；酵母双杂交；自身激活作用；酵母表达
摘要：目的 获得NF κBp65亚基DNA结合域cDNA及构建酵母双杂交系统中的靶基因 ,并检测靶基因的表达和自身激活活性。方法 利用引物二聚体搭桥技术 ,扩增p65亚基DNA结合域基因片段 ,并将其克隆入酵母双杂交载体pG BKT7DNA BD。应用醋酸锂法转化酵母细胞AH10 9,在SD Trp选择培养基上培养 ,观察转化株的生长情况。按尿素 SDS法抽提酵母蛋白 ,用SDS PAGE电泳和Western blot鉴定靶蛋白在酵母细胞中的表达。利用液相法和平板法检测阳性转化株 β 半乳糖苷酶的活性。 结果 获得p65DNA结合域基因片段 ,并成功构建酵母双杂交系统中的靶基因。靶基因能在酵母细胞中
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