α-内收蛋白基因Gly460Trp多态性与原发性高血压相关关系研究
作者：何鑫 初少莉 金力 熊墨淼 王谷亮 张伟忠 周怀发 茅守玉 朱鼎良
单位：何鑫 初少莉 王谷亮 张伟忠 周怀发 茅守玉 朱鼎良：上海第二医科大学附瑞金医院，上海市高血压研究所 上海 200025；金力 熊墨淼：美国德克萨斯州休斯顿大学人类遗传学研究中心，美国德克萨斯州休斯顿；金力：复旦大学遗传学研究所 上海200433
关键词：原发性高血压；基因多态性；α-内收蛋白
高血压杂志990409
摘要 目的：研究α-内收蛋白基因型与原发性高血压的关系。
方法：用突变分离聚合酶链反应(MS-PCR)的方法分别检测138例原发性高血压患者和121例正常血压者α-内收蛋白基因Gly460Trp多态性;测定体重指数(BMI)、空腹血糖、血浆总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、血浆尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)等临床指标。
, 百拇医药
结果：不同α-内收蛋白基因型及基因频率在高血压组与正常组间分布无显著性差异；各基因型之间BMI、空腹血糖、TC、TG、BUN、Cr水平无显著性差异(P>0.05)。
结论：国人α-内收蛋白基因460Trp频率高于高加索人种而与日本人相似；在中国上海人群中，α-内收蛋白基因Gly460Trp多态性与原发性高血压无关。
要点：α-内收蛋白基因Gly460Trp多态性分布于健康组与高血病组无显著频率差异，说明影响不大。
中图分类号：Q756;R544.1;Q51 文献标识码：A
文章编号：1006-2866(1999)04-0308-03
The Relationship Between α-adducin Gene Polymorphism and Essential Hypertension
, 百拇医药
HE Xin1,CHU Shaoli1,JIN Li2，3,XIONG Momiao2,WANG Guliang1,ZHANG Weizhong1,ZHOU Huaifa1,MAO Shouyu1,ZHU Dingliang1
(1.Shanghai Institute of Hypertension,Affiliated Ruijin Hospital of Shanghai Second Medical University Shanghai,200025; 2.Human Genetic Center,University of Texas-Houston,Houston,Texas,USA; 3.Institute of Genetics,Fudan University Shanghai 200433)
, 百拇医药
ABSTRACT Aim:To reveal the relationship between an α-adducin gene polymorphism (Gly460Trp) and essential hypertension.
Methods：One hundred and thirty-eight hypertensive and 121 normotensive subjects were genotyped at Gly460Trp of the α-adducin gene by the technique of mutagenically separated PCR (MS-PCR) to examine a possible association between this polymorphism and hypertension and other phenotypes.
Results：There was no significant association between the Gly460Trp polymorphism in α-adducin gene and the blood pressure variation.No significant association was found between this polymorphism with body mass index,serum level of uric acid,blood urea nitrogen,total cholesterol,triglycerides,creatinine and glucose,respectively.
, 百拇医药
Conclusion：No association was found between α-adducin gene Gly460Trp polymorphism and essential hypertension in Chinese.
Key Words：essential hypertension;gene polymorphism;α-adducin
内收蛋白(adducin)是一个膜骨架蛋白，由α和β或α和γ两个亚基组成。目前认为它参与了细胞连接、膜离子转运和信号传递的过程。人类α-内收蛋白cDNA存在Gly460Trp多态性，表现为第640位碱基由G替换为T，从而导致编码该蛋白第460位的甘氨酸(Gly)替换为色氨酸(Trp)。在高加索人种无亲缘关系的群体研究中发现，原发性高血压(EH)患者中，Gly460Trp杂合子的的频率明显高于正常对照者[1]；在家系内进行连锁分析，也发现该基因附近位点与EH连锁[1,2]。但也有不同报道[3～5]。国内尚未见有关报道。本文就该基因多态性与EH的关系在中国人群中作一初探。
, 百拇医药
MATERIALS AND METHODS
1 研究对象:随机选择长期居住在上海地区的，无亲缘关系的汉族居民259例，分为以下两组：正常血压(NT)组:121例，男73名，女48名，平均年龄49.4±4.7岁，血压<140/90 mmHg，无高血压家族史。原发性高血压病人(HT)组：138例，男82名，女56名，平均年龄50.7±7.6岁，收缩压≥140 mmHg,和(或)舒张压≥90 mmHg，排除继发性高血压。
2 研究方法：
2.1 血液样本的采集:从每个受检者肘前静脉抽取空腹静脉血10ml置于抗凝管中,离心分离出血浆和血细胞。
2.2 常规生化方法测定空腹血糖(FG)和血浆总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、血浆尿素氮(BUN)、血肌酐(Cr)水平。
, 百拇医药
2.3 外周血白细胞DNA提取:常规酚/氯仿法抽提基因组DNA，溶于TE溶液中。
2.4 α-内收蛋白基因多态性检查方法：按照Norihiho设计的方法确定α-内收蛋白基因型[4]。该方法通过设计针对不同等位基因的特异性引物，在同一反应体系中与其公共的非选择性互补引物进行竞争性扩增。并在等位基因的特异性引物中故意引入不配对碱基以减少错配。由于两种特异性引物长度相差十余个碱基对，故可用电泳将其分离。与传统的寡核苷酸杂交法(ASO)相比，具有简单、快速、灵敏的优点[6]。各引物序列如下：(注：有方框的为故意引入的不配对碱基)
野生型引物序列为:5'-GGG GCG ACG AAG CTT CCG AGG
A
-3'
, http://www.100md.com
突变型引物序列为:5'-GCT GAA CTC TGG CC
GG CGA CGA AGC TTC CGA GGA TT-3'
互补引物序列为5'-CCT CCG AAG CCC CAG CTA CCC A-3'
用Taq酶(购自Promega公司)在PCR扩增仪中进行扩增。PCR程序为：94℃初变性3 min，随后于94℃变性45 s，65℃退火1 min，72℃延伸1 min，共35个循环，最后置于72℃ 延伸10 min。PCR产物在8%的聚丙烯酰胺凝胶上电泳，溴乙锭染色后，紫外灯下观察结果并进行多态性分析。
3 统计学分析：所有数据均以均数±标准差表示。组间等位基因型及等位基因频率比较用χ2检验。组间均数比较采用单因素方差分析。Hardy-Weinberg 平衡用χ2检验。P<0.05认为有统计学意义。
, 百拇医药
RESULTS
1 两组对象的临床指标测定结果见表1:结果表明，病例组平均年龄、性别构成比与对照组相比无显著差别。原发性高血压患者体重指数、收缩压、舒张压、空腹血糖、血尿酸、血浆甘油三酯水平明显高于正常血压者(P<0.01)。
表1 原发性高血压组与正常血压组临床指标测定结果比较
Hypertensives
Normotensives
(n=138)
(n=121)
Age(yrs)
50.7±7.6
, http://www.100md.com
49.4±4.7
M/F
82/56
73/48
SBP(mmHg)
146±17*
111±10
DBP(mmHg)
98±11*
74±7
BMI(kg/m2)
, http://www.100md.com 24.8±2.7*
22.6±2.6
Creatinine(μmol/L)
79.1±40.8
77.8±16.4
BUN(mmol/L)
5.01±1.84
5.30±1.15
Uric acid(μmol/L)
330.83±81.36*
280.13±81.62
, http://www.100md.com
FG(mmol/L)
5.18±1.11*
5.02±0.55
TC(mmol/L)
4.67±0.88
4.50±0.80
TG(mmol/L)
1.74±0.74*
1.40±0.62
*P<0.01,hypertensive vs normotensive subjects.
, 百拇医药
2 经PCR扩增后，α-内收蛋白基因可形成两种不同长度的DNA片段，220 bp片段代表460Gly 等位基因,234 bp片段代表460Trp 等位基因。 因此可得出三种基因型：仅有220 bp带型者为野生型纯合子(Gly/Gly)，仅有234bp带型者为突变型纯合子(Trp/Trp)，具有两种带型的为杂合子(Gly/Trp)。NT组与HT组α-内收蛋白基因型和基因频率见表2。
表2 原发性高血压组与正常血压组之间α-内收蛋白基因型和基因频率比较
n
Genotype(Frequency)
Allele(Frequency)
Gly/Gly
Gly/Trp
, 百拇医药
Trp/Trp
Gly
Trp
HT
138
35(0.254)
73(0.529)
30(0.217)
144(0.52)
132(0.48)
NT
121
, 百拇医药 39(0.322)
53(0.438)
29(0.240)
130(0.54)
112(0.46)
HT:Hypertension; NT:No hypertension
各组基因型和基因频率均符合Hardy-Weinberg 平衡，表明所选样本具有群体代表性。由表2可以看出：HT组Gly/Gly型35例， Gly/Trp型73例，Trp/Trp型30例；NT组Gly/Gly型39例，Gly/Trp 53例，Trp/Trp型29例。无论NT组或HT组，均以Gly/Trp杂合子基因型占多数。Trp等位基因频率在HT组为48%，NT组为46%。HT组与NT组α-内收蛋白基因型和基因频率比较，两组差别无显著性。
, 百拇医药
3 将NT组与HT组各对象按α-内收蛋白基因型分型，分别在组内对不同基因型各临床指标进行比较(表3)。在NT组与HT组内，各基因型间体重指数(BMI)、收缩压(SBP)、舒张压(DBP)、空腹血糖、血浆TC、TG、BUN和Cr水平未见显著性差异。
表3 原发性高血压组与正常血压组内不同基因型间临床指标比较
HT
NT
Gly/Gly
Gly/Trp
Trp/Trp
Gly/gly
Gly/Trp
, 百拇医药
Trp/Trp
(n=35)
(n=73)
(n=30)
(n=39)
(n=53)
(n=29)
Age(yrs)
50±8
50±7
52±7
50±5
49±5
, 百拇医药
52±11
SBP(mmHg)
148±14
146±18
143±17
111±10
113±12
112±10
DBP(mmHg)
100±9
98±12
96±11
, 百拇医药
13±8
75±8
74±7
BMI(kg/m2)
25.1±3.3
24.5±2.5
25.3±2.6
22.1±2.1
23.3±2.9
21.9±2.5
Cr(μmol/L)
75.0±18.7
, 百拇医药
76.9±22.7
74.2±16.4
75.7±15.9
78.1±15.8
80.7±17.4
BUN(mmol/L)
4.9±1.5
4.9±1.8
5.2±2.3
5.6±1.1
5.3±1.2
5.3±1.2
, 百拇医药
UA(μmol/L)
317.5±63.4
337.7±81.4
329.8±98.0
271.4±68.3
281.6±88.7
302.9±89.4
FG(mmol/L)
5.1±0.9
5.2±1.0
5.1±1.1
5.0±0.6
, 百拇医药
4.8±0.6
4.8±0.5
TC(mmol/L)
4.4±0.8
4.8±0.9
4.7±1.0
4.4±0.9
4.5±0.8
4.6±0.8
TG(mmol/L)
1.7±0.5
1.7±0.7
, 百拇医药
1.8±1.0
1.3±0.5
1.3±0.5
1.6±0.9
No significant differences were found.
DISCUSSION
越来越多的证据表明，原发性高血压是一多基因遗传性疾病，多个基因参与了EH的发病过程[7～9]。Bianchi等通过比较米兰高血压大鼠(MHS)和米兰正常血压大鼠(MNS)内收蛋白基因的cDNA，发现编码α亚基和β亚基的基因各存在一个点突变。其中α亚基的突变可以解释两种大鼠50%的血压差异，而α亚基仅调节β亚基的效果[10]。转染高血压鼠变异的α-内收蛋白基因至正常鼠，发现前者增加细胞膜钠钾泵的表面表达和最大速度，这从遗传学角度上解释了MHS大鼠肾小管离子重吸收增多的现象。将MHS和MNS两种大鼠杂交，通过对F2代的研究，发现该点突变与血压升高呈共分离。通过比较MHS和MNS，提示膜骨架蛋白-α内收蛋白可能参与MHS穿膜离子的快速转运。人类α-内收蛋白基因位于染色体4p16.3，人鼠之间大约有94%的同源性。无论在人或鼠，该基因的变异都能通过调节肾小管上皮细胞离子转运而影响肾脏功能。在一项结合了连锁分析和相关分析的研究中发现：距α-内收蛋白基因约20kb附近一微卫星位点与高血压紧密连锁(P<0.001)；高血压人群与正常人群间Gly/Trp基因型分布有显著差别；其中Gly/Trp基因型盐敏感性高血压患者对噻嗪类利尿剂的降压反应明显优于Gly/Gly基因型患者[1]。因此认为该基因与盐敏感有关。已有研究表明，α-内收蛋白基因变异，可在修饰肌动蛋白细胞骨架的装配和调节钠泵活性两个方面来改变肾小管上皮细胞转运离子的功能[11]。
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盐敏感性高血压是EH的一个重要亚型。如能证实该基因参与人类盐敏感性高血压的发病过程，那么，这将对指导抗高血压治疗，实现用药个体化具有很大的临床价值。因此，对α-内收蛋白基因多态性的研究正受到越来越多的重视。
然而，对α-内收蛋白基因多态性与EH的研究，在不同人群中结果并不一致。在高加索人群中，460Trp突变频率为0.13～0.23，本研究发现在中国人群中该突变频率为0.46～0.48，高于高加索人群而与日本人群相似(0.54～0.60)。造成结果不一致的原因可能是：(1)不同民族和地区的遗传异质性；(2)对照组的选择。在Curi的研究中[1]，对照组与病例组相比，平均年龄偏高，性别构成比也有差异，而在我们的研究中，对照组与病例组平均年龄、性别构成能够很好的匹配，这可能也是造成结果不一致的一个原因。不同种族的研究结果见表4。
表4 各种族正常人群α-内收蛋白基因Gly460Trp多态性检测结果比较
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Races
n
Methods
Genotype(Frequency)
P
Gly/Gly
Gly/Trp
Trp/Trp
Our Group
Han,Chinese
121
MS-PCR
, 百拇医药
39(0.32)
53(0.44)
29(0.24)
P>0.05
Norihiho [4]
Japanese
159
MS-PCR
30(0.19)
66(0.42)
63(0.40)
P>0.05
, 百拇医药
Cusi[1]
Caucasian in France and Italy
332
ASO
243(0.73)
78(0.24)
11(0.03)
P<0.01
William [3]
Anglo-Australian White
196
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Mismatch-PCR
112(0.57)
73(0.37)
11(0.06)
P>0.05
Atsushi[5]
Scottish
77
ASO
38(0.49)
31(0.41)
8(0.18)
, 百拇医药
P>0.05
ASO:allele-specific oligonucleotide hybridization; P value is the result of association study.
P<0.05 was taken as statistical significant.
本研究首次在中国人群中对α-内收蛋白基因多态性与EH的关系进行初步研究，研究显示，在中国上海人群中，α-内收蛋白基因Gly460Trp多态性可能不是EH发病的重要遗传因素。
REFERENCES
1 Cusi D,Barlassina C,Azzani T,et al.Polymorphisms of α-adducin and salt sensitivity in patients with essential hypertension[J] Lancet 1997;349:1353-1357
, 百拇医药
2 Casari G,Barlassina C,Cusi D,et al.Association of the α-adducin locus with essential hypertension[J]Hypertension1995;25:320-326
3 William Y.S,Wang,David J.A,et al.The Gly460Trp variant of α-adducin is not associated with hypertension in white Anglo-Australians[J] Am J Hypertens 1999;12:632-636
4 Norihiho K,Takao S,Toru N,et at.Lack of association between the α-adducin locus and essential hypertension in the Japanese population[J] Hypertension 1998;31:730-733
, http://www.100md.com
5 Atsushi K,Zilla Y.H.W,Robert F,et al.Human α-adducin gene,blood pressure,and sodium metabolism[J] Hypertens 1998;32:138-143
6 Rust S,Funke H,Assmann G.Mutagenically separated PCR (MS-PCR):a highly specific one-step procedure for easy mutation detection[J] Nucleic Acids Res 1993;21:3623-3629
7 Lander E.S,Schork N.J.Genetic dissection of complex traits[J] Science 1994;265:2037-2048
8 Lifton R.P.Molecular genetics of human blood pressure variation[J] Science 1996;272:676-680
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9 Laragh T.H,Brenner B.M,eds.Hypertension:Pathophysiology,Diagnosis and Management[M] Vol 1.New York; NY,Raven Press.1990:81-100
10 Bianchi G,Tripodi G,Casari G,et al：Two point mutations within the adducin genes are involved in blood pressure variation[J] Proc Nat Acad Sci USA 1994;91:3999-4003
11 Tripody G,Valtorta F,Tofielli L,et al:Hypertension associated point mutation in the adducin α and β subunits affect actin cytoskeleton and ion transport[J] J Clin Invest 1996;97:2815-2822
收稿日期：1999-10-20, 百拇医药
单位：何鑫 初少莉 王谷亮 张伟忠 周怀发 茅守玉 朱鼎良：上海第二医科大学附瑞金医院，上海市高血压研究所 上海 200025；金力 熊墨淼：美国德克萨斯州休斯顿大学人类遗传学研究中心，美国德克萨斯州休斯顿；金力：复旦大学遗传学研究所 上海200433
关键词：原发性高血压；基因多态性；α-内收蛋白
高血压杂志990409
摘要 目的：研究α-内收蛋白基因型与原发性高血压的关系。
方法：用突变分离聚合酶链反应(MS-PCR)的方法分别检测138例原发性高血压患者和121例正常血压者α-内收蛋白基因Gly460Trp多态性;测定体重指数(BMI)、空腹血糖、血浆总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、血浆尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)等临床指标。
, 百拇医药
结果：不同α-内收蛋白基因型及基因频率在高血压组与正常组间分布无显著性差异；各基因型之间BMI、空腹血糖、TC、TG、BUN、Cr水平无显著性差异(P>0.05)。
结论：国人α-内收蛋白基因460Trp频率高于高加索人种而与日本人相似；在中国上海人群中，α-内收蛋白基因Gly460Trp多态性与原发性高血压无关。
要点：α-内收蛋白基因Gly460Trp多态性分布于健康组与高血病组无显著频率差异，说明影响不大。
中图分类号：Q756;R544.1;Q51 文献标识码：A
文章编号：1006-2866(1999)04-0308-03
The Relationship Between α-adducin Gene Polymorphism and Essential Hypertension
, 百拇医药
HE Xin1,CHU Shaoli1,JIN Li2，3,XIONG Momiao2,WANG Guliang1,ZHANG Weizhong1,ZHOU Huaifa1,MAO Shouyu1,ZHU Dingliang1
(1.Shanghai Institute of Hypertension,Affiliated Ruijin Hospital of Shanghai Second Medical University Shanghai,200025; 2.Human Genetic Center,University of Texas-Houston,Houston,Texas,USA; 3.Institute of Genetics,Fudan University Shanghai 200433)
, 百拇医药
ABSTRACT Aim:To reveal the relationship between an α-adducin gene polymorphism (Gly460Trp) and essential hypertension.
Methods：One hundred and thirty-eight hypertensive and 121 normotensive subjects were genotyped at Gly460Trp of the α-adducin gene by the technique of mutagenically separated PCR (MS-PCR) to examine a possible association between this polymorphism and hypertension and other phenotypes.
Results：There was no significant association between the Gly460Trp polymorphism in α-adducin gene and the blood pressure variation.No significant association was found between this polymorphism with body mass index,serum level of uric acid,blood urea nitrogen,total cholesterol,triglycerides,creatinine and glucose,respectively.
, 百拇医药
Conclusion：No association was found between α-adducin gene Gly460Trp polymorphism and essential hypertension in Chinese.
Key Words：essential hypertension;gene polymorphism;α-adducin
内收蛋白(adducin)是一个膜骨架蛋白，由α和β或α和γ两个亚基组成。目前认为它参与了细胞连接、膜离子转运和信号传递的过程。人类α-内收蛋白cDNA存在Gly460Trp多态性，表现为第640位碱基由G替换为T，从而导致编码该蛋白第460位的甘氨酸(Gly)替换为色氨酸(Trp)。在高加索人种无亲缘关系的群体研究中发现，原发性高血压(EH)患者中，Gly460Trp杂合子的的频率明显高于正常对照者[1]；在家系内进行连锁分析，也发现该基因附近位点与EH连锁[1,2]。但也有不同报道[3～5]。国内尚未见有关报道。本文就该基因多态性与EH的关系在中国人群中作一初探。
, 百拇医药
MATERIALS AND METHODS
1 研究对象:随机选择长期居住在上海地区的，无亲缘关系的汉族居民259例，分为以下两组：正常血压(NT)组:121例，男73名，女48名，平均年龄49.4±4.7岁，血压<140/90 mmHg，无高血压家族史。原发性高血压病人(HT)组：138例，男82名，女56名，平均年龄50.7±7.6岁，收缩压≥140 mmHg,和(或)舒张压≥90 mmHg，排除继发性高血压。
2 研究方法：
2.1 血液样本的采集:从每个受检者肘前静脉抽取空腹静脉血10ml置于抗凝管中,离心分离出血浆和血细胞。
2.2 常规生化方法测定空腹血糖(FG)和血浆总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、血浆尿素氮(BUN)、血肌酐(Cr)水平。
, 百拇医药
2.3 外周血白细胞DNA提取:常规酚/氯仿法抽提基因组DNA，溶于TE溶液中。
2.4 α-内收蛋白基因多态性检查方法：按照Norihiho设计的方法确定α-内收蛋白基因型[4]。该方法通过设计针对不同等位基因的特异性引物，在同一反应体系中与其公共的非选择性互补引物进行竞争性扩增。并在等位基因的特异性引物中故意引入不配对碱基以减少错配。由于两种特异性引物长度相差十余个碱基对，故可用电泳将其分离。与传统的寡核苷酸杂交法(ASO)相比，具有简单、快速、灵敏的优点[6]。各引物序列如下：(注：有方框的为故意引入的不配对碱基)
野生型引物序列为:5'-GGG GCG ACG AAG CTT CCG AGG
A-3', http://www.100md.com
突变型引物序列为:5'-GCT GAA CTC TGG CC
GG CGA CGA AGC TTC CGA GGA TT-3'互补引物序列为5'-CCT CCG AAG CCC CAG CTA CCC A-3'
用Taq酶(购自Promega公司)在PCR扩增仪中进行扩增。PCR程序为：94℃初变性3 min，随后于94℃变性45 s，65℃退火1 min，72℃延伸1 min，共35个循环，最后置于72℃ 延伸10 min。PCR产物在8%的聚丙烯酰胺凝胶上电泳，溴乙锭染色后，紫外灯下观察结果并进行多态性分析。
3 统计学分析：所有数据均以均数±标准差表示。组间等位基因型及等位基因频率比较用χ2检验。组间均数比较采用单因素方差分析。Hardy-Weinberg 平衡用χ2检验。P<0.05认为有统计学意义。
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RESULTS
1 两组对象的临床指标测定结果见表1:结果表明，病例组平均年龄、性别构成比与对照组相比无显著差别。原发性高血压患者体重指数、收缩压、舒张压、空腹血糖、血尿酸、血浆甘油三酯水平明显高于正常血压者(P<0.01)。
表1 原发性高血压组与正常血压组临床指标测定结果比较
Hypertensives
Normotensives
(n=138)
(n=121)
Age(yrs)
50.7±7.6
, http://www.100md.com
49.4±4.7
M/F
82/56
73/48
SBP(mmHg)
146±17*
111±10
DBP(mmHg)
98±11*
74±7
BMI(kg/m2)
, http://www.100md.com 24.8±2.7*
22.6±2.6
Creatinine(μmol/L)
79.1±40.8
77.8±16.4
BUN(mmol/L)
5.01±1.84
5.30±1.15
Uric acid(μmol/L)
330.83±81.36*
280.13±81.62
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FG(mmol/L)
5.18±1.11*
5.02±0.55
TC(mmol/L)
4.67±0.88
4.50±0.80
TG(mmol/L)
1.74±0.74*
1.40±0.62
*P<0.01,hypertensive vs normotensive subjects.
, 百拇医药
2 经PCR扩增后，α-内收蛋白基因可形成两种不同长度的DNA片段，220 bp片段代表460Gly 等位基因,234 bp片段代表460Trp 等位基因。 因此可得出三种基因型：仅有220 bp带型者为野生型纯合子(Gly/Gly)，仅有234bp带型者为突变型纯合子(Trp/Trp)，具有两种带型的为杂合子(Gly/Trp)。NT组与HT组α-内收蛋白基因型和基因频率见表2。
表2 原发性高血压组与正常血压组之间α-内收蛋白基因型和基因频率比较
n
Genotype(Frequency)
Allele(Frequency)
Gly/Gly
Gly/Trp
, 百拇医药
Trp/Trp
Gly
Trp
HT
138
35(0.254)
73(0.529)
30(0.217)
144(0.52)
132(0.48)
NT
121
, 百拇医药 39(0.322)
53(0.438)
29(0.240)
130(0.54)
112(0.46)
HT:Hypertension; NT:No hypertension
各组基因型和基因频率均符合Hardy-Weinberg 平衡，表明所选样本具有群体代表性。由表2可以看出：HT组Gly/Gly型35例， Gly/Trp型73例，Trp/Trp型30例；NT组Gly/Gly型39例，Gly/Trp 53例，Trp/Trp型29例。无论NT组或HT组，均以Gly/Trp杂合子基因型占多数。Trp等位基因频率在HT组为48%，NT组为46%。HT组与NT组α-内收蛋白基因型和基因频率比较，两组差别无显著性。
, 百拇医药
3 将NT组与HT组各对象按α-内收蛋白基因型分型，分别在组内对不同基因型各临床指标进行比较(表3)。在NT组与HT组内，各基因型间体重指数(BMI)、收缩压(SBP)、舒张压(DBP)、空腹血糖、血浆TC、TG、BUN和Cr水平未见显著性差异。
表3 原发性高血压组与正常血压组内不同基因型间临床指标比较
HT
NT
Gly/Gly
Gly/Trp
Trp/Trp
Gly/gly
Gly/Trp
, 百拇医药
Trp/Trp
(n=35)
(n=73)
(n=30)
(n=39)
(n=53)
(n=29)
Age(yrs)
50±8
50±7
52±7
50±5
49±5
, 百拇医药
52±11
SBP(mmHg)
148±14
146±18
143±17
111±10
113±12
112±10
DBP(mmHg)
100±9
98±12
96±11
, 百拇医药
13±8
75±8
74±7
BMI(kg/m2)
25.1±3.3
24.5±2.5
25.3±2.6
22.1±2.1
23.3±2.9
21.9±2.5
Cr(μmol/L)
75.0±18.7
, 百拇医药
76.9±22.7
74.2±16.4
75.7±15.9
78.1±15.8
80.7±17.4
BUN(mmol/L)
4.9±1.5
4.9±1.8
5.2±2.3
5.6±1.1
5.3±1.2
5.3±1.2
, 百拇医药
UA(μmol/L)
317.5±63.4
337.7±81.4
329.8±98.0
271.4±68.3
281.6±88.7
302.9±89.4
FG(mmol/L)
5.1±0.9
5.2±1.0
5.1±1.1
5.0±0.6
, 百拇医药
4.8±0.6
4.8±0.5
TC(mmol/L)
4.4±0.8
4.8±0.9
4.7±1.0
4.4±0.9
4.5±0.8
4.6±0.8
TG(mmol/L)
1.7±0.5
1.7±0.7
, 百拇医药
1.8±1.0
1.3±0.5
1.3±0.5
1.6±0.9
No significant differences were found.
DISCUSSION
越来越多的证据表明，原发性高血压是一多基因遗传性疾病，多个基因参与了EH的发病过程[7～9]。Bianchi等通过比较米兰高血压大鼠(MHS)和米兰正常血压大鼠(MNS)内收蛋白基因的cDNA，发现编码α亚基和β亚基的基因各存在一个点突变。其中α亚基的突变可以解释两种大鼠50%的血压差异，而α亚基仅调节β亚基的效果[10]。转染高血压鼠变异的α-内收蛋白基因至正常鼠，发现前者增加细胞膜钠钾泵的表面表达和最大速度，这从遗传学角度上解释了MHS大鼠肾小管离子重吸收增多的现象。将MHS和MNS两种大鼠杂交，通过对F2代的研究，发现该点突变与血压升高呈共分离。通过比较MHS和MNS，提示膜骨架蛋白-α内收蛋白可能参与MHS穿膜离子的快速转运。人类α-内收蛋白基因位于染色体4p16.3，人鼠之间大约有94%的同源性。无论在人或鼠，该基因的变异都能通过调节肾小管上皮细胞离子转运而影响肾脏功能。在一项结合了连锁分析和相关分析的研究中发现：距α-内收蛋白基因约20kb附近一微卫星位点与高血压紧密连锁(P<0.001)；高血压人群与正常人群间Gly/Trp基因型分布有显著差别；其中Gly/Trp基因型盐敏感性高血压患者对噻嗪类利尿剂的降压反应明显优于Gly/Gly基因型患者[1]。因此认为该基因与盐敏感有关。已有研究表明，α-内收蛋白基因变异，可在修饰肌动蛋白细胞骨架的装配和调节钠泵活性两个方面来改变肾小管上皮细胞转运离子的功能[11]。
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盐敏感性高血压是EH的一个重要亚型。如能证实该基因参与人类盐敏感性高血压的发病过程，那么，这将对指导抗高血压治疗，实现用药个体化具有很大的临床价值。因此，对α-内收蛋白基因多态性的研究正受到越来越多的重视。
然而，对α-内收蛋白基因多态性与EH的研究，在不同人群中结果并不一致。在高加索人群中，460Trp突变频率为0.13～0.23，本研究发现在中国人群中该突变频率为0.46～0.48，高于高加索人群而与日本人群相似(0.54～0.60)。造成结果不一致的原因可能是：(1)不同民族和地区的遗传异质性；(2)对照组的选择。在Curi的研究中[1]，对照组与病例组相比，平均年龄偏高，性别构成比也有差异，而在我们的研究中，对照组与病例组平均年龄、性别构成能够很好的匹配，这可能也是造成结果不一致的一个原因。不同种族的研究结果见表4。
表4 各种族正常人群α-内收蛋白基因Gly460Trp多态性检测结果比较
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Races
n
Methods
Genotype(Frequency)
P
Gly/Gly
Gly/Trp
Trp/Trp
Our Group
Han,Chinese
121
MS-PCR
, 百拇医药
39(0.32)
53(0.44)
29(0.24)
P>0.05
Norihiho [4]
Japanese
159
MS-PCR
30(0.19)
66(0.42)
63(0.40)
P>0.05
, 百拇医药
Cusi[1]
Caucasian in France and Italy
332
ASO
243(0.73)
78(0.24)
11(0.03)
P<0.01
William [3]
Anglo-Australian White
196
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Mismatch-PCR
112(0.57)
73(0.37)
11(0.06)
P>0.05
Atsushi[5]
Scottish
77
ASO
38(0.49)
31(0.41)
8(0.18)
, 百拇医药
P>0.05
ASO:allele-specific oligonucleotide hybridization; P value is the result of association study.
P<0.05 was taken as statistical significant.
本研究首次在中国人群中对α-内收蛋白基因多态性与EH的关系进行初步研究，研究显示，在中国上海人群中，α-内收蛋白基因Gly460Trp多态性可能不是EH发病的重要遗传因素。
REFERENCES
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2 Casari G,Barlassina C,Cusi D,et al.Association of the α-adducin locus with essential hypertension[J]Hypertension1995;25:320-326
3 William Y.S,Wang,David J.A,et al.The Gly460Trp variant of α-adducin is not associated with hypertension in white Anglo-Australians[J] Am J Hypertens 1999;12:632-636
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6 Rust S,Funke H,Assmann G.Mutagenically separated PCR (MS-PCR):a highly specific one-step procedure for easy mutation detection[J] Nucleic Acids Res 1993;21:3623-3629
7 Lander E.S,Schork N.J.Genetic dissection of complex traits[J] Science 1994;265:2037-2048
8 Lifton R.P.Molecular genetics of human blood pressure variation[J] Science 1996;272:676-680
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9 Laragh T.H,Brenner B.M,eds.Hypertension:Pathophysiology,Diagnosis and Management[M] Vol 1.New York; NY,Raven Press.1990:81-100
10 Bianchi G,Tripodi G,Casari G,et al：Two point mutations within the adducin genes are involved in blood pressure variation[J] Proc Nat Acad Sci USA 1994;91:3999-4003
11 Tripody G,Valtorta F,Tofielli L,et al:Hypertension associated point mutation in the adducin α and β subunits affect actin cytoskeleton and ion transport[J] J Clin Invest 1996;97:2815-2822
收稿日期：1999-10-20, 百拇医药