葛根素(普乐林)对SHRsp脑卒中预防和治疗作用的研究
作者：王文 张会东 褚洁 王佩合 孙瑞成 邓卿 马丽媛 刘力生
单位：中国医学科学院阜外心血管病医院心血管病研究所 北京 100037
关键词：普乐林；卒中型自发性高血压大鼠；脑卒中；防治作用
高血压杂志000120 摘 要：目的:研究普乐林注射液对卒中型自发性高血压大鼠(SHRsp)脑卒中 的预防和治疗作用。材料和方法:将80只8周龄(雌雄各半)SHRsp随机分为普乐林200 mg/kg,100 mg/kg及对照组, 饮1.0%～1.5% NaCl盐水。实验一: 在高盐负荷开始即灌胃治疗, 8周后断头处死,取颈动脉及脑组织做电镜检查。取脑组织光镜下检查脑卒中发生率。实验二: 脑卒中 发生后开始灌胃治疗,连续10天。记录大鼠脑卒中临床表现分数及存活天数。结果:实验一:治疗后普乐林200 mg/kg, 100 mg/kg组颈动脉电镜扫描和脑组织 电镜透射观察组织病理结果均好于对照组; 光镜下脑卒中检出率(41.7%, 50.0%) 也低于对照组(76.9%)。实验二: 治疗前脑卒中临床表现分数三组间相似, 治疗后普乐林20 0 mg/kg, 100 mg/kg组分数 (0.95±1.39, 2.41±1.65) 均明显低于对照组(3.77±0.27) ( P<0.01～0.001)。治疗期存活天数普乐林200 mg/kg组(9.73±1.03)及100 mg/kg组(7.9 3±2.64)均长于对照组(5.36±4.45)(P<0.05, P>0.05)。脑与心脏重量比值200 mg/kg组(7.92±1.66; 4.83±0.83)及100 mg/kg组(9.07±2.54; 5.57±1.31)均低于 对照组(9.54±1.96; 5.62±1.02) (均P<0.05)。结论;普乐林注射液对SHRsp脑卒中有防治作用。
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分类号：N33;R743.34;R97;R544.1 文献标识码：A
文章编号：1006-2866(2000)01-0058-03
Effects of Puerarin on Stroke in Stroke-prone Spontaneously
Hypertensi ve Rats
WANG Wen ZHANG Huidong LIU Lisheng et al.
(Fu Wai Hospital, CAMS, Beijing 100037,P.R.of China)
ABSTRACT：Aim:The study is to investigate the preve ntive a nd treatment effects of puerarin(PR) on stroke in stroke-prone spontaneously hy pertensive rats (SHRsp).Methods:Eighty SHRsp of 8 week old were randomly divided into PR 200 mg/kg, 100 mg/kg and contr ol group. Rats were given 1.0%～1.5% NaCl as drinking fluid ad libido. In experiment 1: rats were given PR 200 mg/kg.d-1, 100 mg/kg.d-1 or water control at the beginning of experiment for 8 weeks . The histopathologic examination of their brain and carotid artery was made after decapitation. In experiment 2: after onset of stroke, rats were given orally PR 200 mg/kg .d-1, 100 mg/kg.d-1 or water control for 10 days. The clinical score of stroke and survival time of rats were recorded.Results:In experiment 1: the incidence of stroke by micr oscopy in PR 200 mg/kg and 100 mg/kg group was 41.7% and 50.0% respectively,that was decreased th an control group (76.9%). Electron microscope study showed th e endothelium of carotid artery were normal in 200 mg/kg group, while it was ser iously injured in control group and mildly injured in PR 100 mg/kg group. The b rain morphological study showed normal i n PR 200 mg/kg group,significant neuron damage were found in the control. In ex periment 2: the clinical scores of stroke after treatment with PR 200 mg/kg and 100 mg/kg group were 0.95±1.39 and 2.41±1.65 respectively,that is lowered than control g roup(3.77±0.27,P<0.01). The survival time in PR 200 mg/kg 9.7± 1.0 day and PR 100 mg/kg 7.9±2.6 day that is longer than control group (5.36 ±4.45 day,P<0.05).
, 百拇医药
Conclusion：:PR may prevent and effectively treat the stroke in SHRsp .
Key Words：Puerarin; Stroke; SHRsp▲ 普乐林注射液的有效成份为葛根素, 是从植物野葛根中提取的。具有祛 风、活血、通络作用。药理研究表明其有扩张冠状动脉和脑血管作用, 可降低血管阻力, 改 善微循环[1,2,3,4,5]。普乐林对脑卒中防治作用的实验研究未见报道。本实验目 的是观察普乐林对卒中型自发性高血压大鼠(SHRsp)脑卒中的预防和治疗作用。
SUBJECT AND METHODS
1 实验动物: 实验动物是从美国NIH引进在本院实验动 物科繁育的第29代SHRsp,动物合格证号01-3080, 实验条件合格证号01-2040(北京市实验 动物管理委员会)。大鼠雌雄各半, 共80只, 饲养在半屏障环境中。从8周龄开始饮盐水(1% NaCl盐水开始, 逐渐加至1.5% NaCl), 大鼠笼养, 每笼4～5只, 自由饮盐水和吃标准颗粒 饲料。高盐负荷可加速SHRsp的高血压发展和脑卒中发生
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2 药品：普乐林注射液由烟台中策药业有限公司生产,批号970606, 每支2ml, 含葛根素100 mg。
3 随机分组和用药方法:实验分为两部分, 即实验一，二。
实验一为预防性实验。将37只8周龄大鼠随机分成A,B,C三组, 每组12～13只。A和B组分别用普乐林注射液100 mg/kg 与200 mg/kg灌胃治疗, 每日上午9时一次, C组为对照组, 每日 上午用蒸馏水灌胃一次, 连续治疗8周。8周后用锐器断头处死, 每组取3只大鼠脑组织(大脑 顶部)作电镜观察。隔日称大鼠体重一次, 根据体重调整用药量。于实验前及后第24周各测 量大鼠收缩压(尾套法)及心率一次。
实验二：为治疗性实验,将43只大鼠随机分成A,B,C三 组,每组14～15只。从8周龄开始饮盐水，大鼠脑卒 中发生后,改饮自来水,即开始用药治疗,用药剂量及方法同实验一,连续治疗10天。每日 上午称大鼠体重一次。根据日本的大鼠脑卒中临床表现评分标准,每天上午作一次脑卒中表 现评分, 并记录大鼠脑卒中治疗期存活天数。脑卒中后第11天将存活大鼠断头处死。
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4 大鼠脑卒中临床表现评分标准:1分:(活动少)运动量轻度减少, 或轻度兴奋;2分:(活动很少)运动量明显减少, 或激惹性亢进;3分:(伏卧不动)不能行走, 忧郁性症状;4分:(瘫痪)不能站立,任何一侧或双侧肢体麻痹。
5 研究指标：
实验一：主要指标是脑卒中病理检出率和脑组织及颈动脉的细胞超微结构变化、血压及 心率。
实验二：主要指标是脑卒中治疗临床表现评分分数及存活天数。实验一和实验二 大鼠处死或自然死亡后尸解取出脑及心脏器官称重。器官重量比值=器官重量(g)/体重(g)× 1000
6 病理组织取材和处理方法
6.1 光镜组织:将脑组织取出后置15%戊二醛液中固定,每个脑组织切成5片,用HE染色,在 光镜下观察脑卒中发生率。
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6.2 电镜组织:动物处死后,立即取出颈总动脉,用0.1 M PBS冲洗后, 即固定于2.5%戊二醛 中2小时以上, 用0.1 M PBS冲洗3次后, 再用1%锇酸固定1小时, 不同浓度的酒精梯度脱水, 醋酸异戊酯置换2次, 每次20分钟, 临界点干燥后, 用离子溅射仪(日立IB-3型) 镀金, S-5 20扫描电镜观察。动物处死后, 立即取出脑组织, 固定于2.5%戊二醛液和1%锇酸液中, 丙酮 逐级脱水后, 用Epon 812环氧树脂包埋, 超薄切片, 经醋酸铀和柠檬酸铅双重染色后, 用 日立H-60透射电镜观察。
7 统计方法：
用方差及t检验的方法比较组间及组内脑卒中临床评分分数, 并比较组间存活天数、血压、心率、体重器官重量比值, 以P<0.05为差异显著性, 数值用
±s表示, 频率以百分数表示。
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RESULTS
1 实验一
1.1 血压、心率及体重(表 1)：普乐林注射液 200 mg/kg, 100 mg/kg及对照组治疗前后第 2 ，4，6，8周体重三组间均无明显差别。治疗前及治疗后第2周三组间收缩压均无明显差别, 治疗后第4周普乐林注射液 200 mg/kg组收缩压低于对照组(P<0.05)。治疗前三组间 心率相似, 治疗后2,4周普乐林200 mg/kg, 100 mg/kg组心率均低于对照组(P<0.05～0. 001)。
表 1 实验一: 大鼠血压与心率变化
普乐林 200
mg/kg(n=12)
普乐林 100
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mg/kg(n=12)
对照组
(n =13)
收缩压mmHg
治疗前
175.8±7.6
177.1±8.01
176.5±8.6
治疗后第2周
192.9±10.3
192.9±12.8
196.2±10.2
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治疗后第4周
200.8±10.0**
209.2±12.7
218.1±14.7
心率(次/分)
治疗前
405.7±34.1
392.8±18.5
394.1±14.0
治疗后第2周
414.3±27.3*
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401.1±30.5**
437.7±11.0
治疗后第4周
402.0±18.6**
403.5±9.5**
423.8±8.5
*:P<0.05,**:P<0.01,vs control
1.2 脑及心脏重量比值(表 2)：脑及心脏重量比值三组间均无明显差别。
表 2 实验一: 大鼠器官重量比值与脑卒中检出率
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普乐林 200
mg/kg(n=12)
普乐林 100
mg/kg(n=12)
对照组
(n =13)
心脏重量比值
5.27±1.11
5.26±1.36
5.60±0.90
脑重量比值
8.83±2.13
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8.63±1.53
9.15±2.17
脑卒中检出率
41.7%
50.0%
76.9%
1.3 脑卒中病理检出率(表 2)：光镜下: 脑卒中检出率普乐林注射液200 mg/kg组为41.7%, 普乐林注射液100 mg/kg组为50.0%,对照组为76.9%。
1.4 脑组织与颈动脉电镜观察脑组织电镜透射检查：对照组脑组织神 经细胞核固缩,核染色 质疏松,有的核膜失去双重结构,胞浆内质网扩张,线粒体肿胀,嵴消失,神经髓鞘结构扭曲, 失去正常结构。普乐林注射液200 mg/kg组脑组织以上细胞的形态结构正常或基本正常。普 乐林注射液100 mg/kg组脑组织神经细胞核轻度固缩,核染色质较致密,核膜双重结构, 胞浆内质网轻度扩张,线粒体轻度肿胀, 核糖体丰富,神经髓鞘轻度变形。(图1,2)
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图 1 普乐林 200 mg/kg组脑组织电镜检查
图 2 对照组脑组织电镜检查
颈动脉电镜扫描所见: 对照组内皮细胞高度肿胀,内皮细胞 表面可见大小不等的洞, 内皮细胞表面有许多血小板和红细胞粘附; 细胞表面微绒毛消失。普乐林注射液200 mg/kg, 组,内皮细胞排列整齐,内皮细胞表面很少见到大小不等的洞,细胞表面光滑,可见到微绒 毛,红细胞和血小板粘附较少。普乐林注射液100 mg/kg组内皮细胞排列整齐,有的内皮细胞表面可见大小不等的洞,有少量血小板和 红细胞粘附于表面，见图 3,4。
图 3 普乐林200 mg/kg组颈动脉电镜检查
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图 4 对照组颈动脉电镜检查
2 实验二:
2.1 体重(表 3):实验前,后第4,8周,脑卒中发作时,发作后第1,2,3天体重三组间无明显 差别。
表 3 实验二: 大鼠体重(g)变化
普乐林 200
mg/kg(n=15)
普乐林 100
mg/kg(n=14)
对照组
(n=14)
实验前
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150.0±22.7
147.5±18.1
147.9±21.7
实验后第4周
207.7±36.7
196.8±34.0
194.3±42.1
第8周
210.3±25.5
206.8±24.2
202.9±33.8
脑卒中发作时
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211.3±42.0
210.0±44.6
215.4±50.2
要药后第1天
200.7±40.9
198.2±46.6
196.4±45.3
第2天
210.7±42.1
196.4±36.1
201.1±43.3
第3天
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220.0±38.6
207.5±35.9
199.2±44.2
2.2 脑卒中临床表现评分 (表 4):治疗前(脑卒中发作时)脑卒中临床表 现分数三组间相似。治疗后脑卒中临床分数普乐林200 mg/kg组(0.95±1.39分)与100 mg/kg组(2.41±1.65分)均明显低于对照组(3.77±0.27分)(P <0.001,P<0.01),且明显低于治疗前分数。表 4 实验二:脑卒中分数、存活天数及器官重量比值
普乐林 200
mg/kg(n=12)
普乐林 100
mg/kg(n=12)
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对照组
(n =13)
脑卒中临床评分
治疗前
3.80±0.32
3.97±0.38
3.85±0.23
治疗后
0.95±1.39(***)/(△△)
2.41±1.65( **)/(△)
3.77± 0.27
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治疗存活天数
9.73±1.03*
7.93±2.64
5.36±4.45
心脏重量比值
4.83±0.83*
5.57±1.31
5.62±1.02
脑重量比值
7.92±1.66*
9.07±2.54
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9.54±1.96
*:P<0.05,**:P<0.01,***:P<0.001 vs control group; △:P<0 .0 1,△△:P<0.001 与治疗前比较；心、脑重量比值=脏器重量(g)/体重(g)×1000
2.3 治疗期存活天数(表4):普乐林200 mg/kg组,治疗期存活天数(9.73 ±1.03) 显著长于对照组(5.36±4.45) (P<0.0 5),100 mg/kg组(7.93±2.63)稍长于对照组,但差异不明显。
2.4 脑及心脏器官重量比值(表4):普乐林200 mg/kg组脑重量比值(7.92±1.66)与心脏重量比值(4.83±0.83)均明显低于对 照组(9.54±1.96; 5.62±1.02) (均P<0.05); 100 mg/kg组脑与心脏重量比值(9.07± 2.54; 5.57±1.31) 稍低于对照组,但差异不明显。
, 百拇医药
DISCUSSION
卒中型自发性高血压大鼠(SHRsp)100%发生高血压,80%发生脑卒中,是高血压脑卒中 实验研究的最佳模型。
普乐林注射液的有效成分为葛根素,化学名为4'7-二羟基,8-β-D 葡萄糖异黄酮 。研究表明普乐林可扩张脑血管,对抗血管痉挛,增加血流量; 改善血粘度; 并有β-受体阻 滞作用,缓和降低心率及血压,减轻心脏负荷及心肌氧耗量。
动物实验及少量临床研究提示,普乐林(葛根素)有改善脑循环及冠状动脉循环的作用 ,少量病例的临床观察也提示普乐林对脑梗塞病人治疗可能有益[6]。
本实验结果表明普乐林注射液预防性应用,可减少卒中型自发性高血压大鼠(SHRsp) 脑卒中的检出率,示其有减少或预防脑卒中的作用。颈总动脉电镜扫描结果表明,普乐林减 轻了动脉内皮细胞的损害。脑组织电镜透射结果也提示,普乐林有保护脑细胞的作用。
, 百拇医药
SHRsp脑卒中发生后立即应用普乐林治疗,普乐林可减少大鼠脑卒中临床表现评分分 数,延长大鼠治疗期存活天数,提示其有改善脑卒中症状及预后的作用。
普乐林200 mg/kg组还可能有减轻脑组织和心脏重量比值的作用和轻微的降压作用。普乐林对大鼠心率有轻微的降低作用,至少没有增加心率,这也有利于保护心脏。
普乐林注射液对SHRsp的脑卒中有一定的预防和治疗作用。
(鸣谢: 中日友好医院电镜室；北京同仁医院病理室)■
REFERENCES：
[1]曾贵云,周运鹏,张丽英等,葛根素对犬血压血管反应性,脑循环及外周循环 的作用[J] 中华医学杂志 1974;54:265
[2]姜秀莲,徐理纳, 葛根素对小鼠实验性微循环障碍的改善作用[J] 药学 学报 1989;4:251
, 百拇医药
[3]刘娜. 葛根的药理作用及应用进展[J] 中国现代应用药学 1997;14:20
[4]王丽华,秦川秋,于田. 葛根素治疗冠心病高粘高凝血症[J] 山东医药 1 990;14:5
[5]李小鹰,王培仁,邵建华. 葛根素对急性心肌梗塞患者梗塞范围的影响[J] 中华心血管病杂志 1985;13(3):175
[6]贺翠英. 普乐林治疗老年人脑梗塞临床观察[J] 现代康复 199 8;2(1):44
收稿日期：1999-08-31
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单位：中国医学科学院阜外心血管病医院心血管病研究所 北京 100037
关键词：普乐林；卒中型自发性高血压大鼠；脑卒中；防治作用
高血压杂志000120 摘 要：目的:研究普乐林注射液对卒中型自发性高血压大鼠(SHRsp)脑卒中 的预防和治疗作用。材料和方法:将80只8周龄(雌雄各半)SHRsp随机分为普乐林200 mg/kg,100 mg/kg及对照组, 饮1.0%～1.5% NaCl盐水。实验一: 在高盐负荷开始即灌胃治疗, 8周后断头处死,取颈动脉及脑组织做电镜检查。取脑组织光镜下检查脑卒中发生率。实验二: 脑卒中 发生后开始灌胃治疗,连续10天。记录大鼠脑卒中临床表现分数及存活天数。结果:实验一:治疗后普乐林200 mg/kg, 100 mg/kg组颈动脉电镜扫描和脑组织 电镜透射观察组织病理结果均好于对照组; 光镜下脑卒中检出率(41.7%, 50.0%) 也低于对照组(76.9%)。实验二: 治疗前脑卒中临床表现分数三组间相似, 治疗后普乐林20 0 mg/kg, 100 mg/kg组分数 (0.95±1.39, 2.41±1.65) 均明显低于对照组(3.77±0.27) ( P<0.01～0.001)。治疗期存活天数普乐林200 mg/kg组(9.73±1.03)及100 mg/kg组(7.9 3±2.64)均长于对照组(5.36±4.45)(P<0.05, P>0.05)。脑与心脏重量比值200 mg/kg组(7.92±1.66; 4.83±0.83)及100 mg/kg组(9.07±2.54; 5.57±1.31)均低于 对照组(9.54±1.96; 5.62±1.02) (均P<0.05)。结论;普乐林注射液对SHRsp脑卒中有防治作用。
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分类号：N33;R743.34;R97;R544.1 文献标识码：A
文章编号：1006-2866(2000)01-0058-03
Effects of Puerarin on Stroke in Stroke-prone Spontaneously
Hypertensi ve Rats
WANG Wen ZHANG Huidong LIU Lisheng et al.
(Fu Wai Hospital, CAMS, Beijing 100037,P.R.of China)
ABSTRACT：Aim:The study is to investigate the preve ntive a nd treatment effects of puerarin(PR) on stroke in stroke-prone spontaneously hy pertensive rats (SHRsp).Methods:Eighty SHRsp of 8 week old were randomly divided into PR 200 mg/kg, 100 mg/kg and contr ol group. Rats were given 1.0%～1.5% NaCl as drinking fluid ad libido. In experiment 1: rats were given PR 200 mg/kg.d-1, 100 mg/kg.d-1 or water control at the beginning of experiment for 8 weeks . The histopathologic examination of their brain and carotid artery was made after decapitation. In experiment 2: after onset of stroke, rats were given orally PR 200 mg/kg .d-1, 100 mg/kg.d-1 or water control for 10 days. The clinical score of stroke and survival time of rats were recorded.Results:In experiment 1: the incidence of stroke by micr oscopy in PR 200 mg/kg and 100 mg/kg group was 41.7% and 50.0% respectively,that was decreased th an control group (76.9%). Electron microscope study showed th e endothelium of carotid artery were normal in 200 mg/kg group, while it was ser iously injured in control group and mildly injured in PR 100 mg/kg group. The b rain morphological study showed normal i n PR 200 mg/kg group,significant neuron damage were found in the control. In ex periment 2: the clinical scores of stroke after treatment with PR 200 mg/kg and 100 mg/kg group were 0.95±1.39 and 2.41±1.65 respectively,that is lowered than control g roup(3.77±0.27,P<0.01). The survival time in PR 200 mg/kg 9.7± 1.0 day and PR 100 mg/kg 7.9±2.6 day that is longer than control group (5.36 ±4.45 day,P<0.05).
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Conclusion：:PR may prevent and effectively treat the stroke in SHRsp .
Key Words：Puerarin; Stroke; SHRsp▲ 普乐林注射液的有效成份为葛根素, 是从植物野葛根中提取的。具有祛 风、活血、通络作用。药理研究表明其有扩张冠状动脉和脑血管作用, 可降低血管阻力, 改 善微循环[1,2,3,4,5]。普乐林对脑卒中防治作用的实验研究未见报道。本实验目 的是观察普乐林对卒中型自发性高血压大鼠(SHRsp)脑卒中的预防和治疗作用。
SUBJECT AND METHODS
1 实验动物: 实验动物是从美国NIH引进在本院实验动 物科繁育的第29代SHRsp,动物合格证号01-3080, 实验条件合格证号01-2040(北京市实验 动物管理委员会)。大鼠雌雄各半, 共80只, 饲养在半屏障环境中。从8周龄开始饮盐水(1% NaCl盐水开始, 逐渐加至1.5% NaCl), 大鼠笼养, 每笼4～5只, 自由饮盐水和吃标准颗粒 饲料。高盐负荷可加速SHRsp的高血压发展和脑卒中发生
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2 药品：普乐林注射液由烟台中策药业有限公司生产,批号970606, 每支2ml, 含葛根素100 mg。
3 随机分组和用药方法:实验分为两部分, 即实验一，二。
实验一为预防性实验。将37只8周龄大鼠随机分成A,B,C三组, 每组12～13只。A和B组分别用普乐林注射液100 mg/kg 与200 mg/kg灌胃治疗, 每日上午9时一次, C组为对照组, 每日 上午用蒸馏水灌胃一次, 连续治疗8周。8周后用锐器断头处死, 每组取3只大鼠脑组织(大脑 顶部)作电镜观察。隔日称大鼠体重一次, 根据体重调整用药量。于实验前及后第24周各测 量大鼠收缩压(尾套法)及心率一次。
实验二：为治疗性实验,将43只大鼠随机分成A,B,C三 组,每组14～15只。从8周龄开始饮盐水，大鼠脑卒 中发生后,改饮自来水,即开始用药治疗,用药剂量及方法同实验一,连续治疗10天。每日 上午称大鼠体重一次。根据日本的大鼠脑卒中临床表现评分标准,每天上午作一次脑卒中表 现评分, 并记录大鼠脑卒中治疗期存活天数。脑卒中后第11天将存活大鼠断头处死。
, 百拇医药
4 大鼠脑卒中临床表现评分标准:1分:(活动少)运动量轻度减少, 或轻度兴奋;2分:(活动很少)运动量明显减少, 或激惹性亢进;3分:(伏卧不动)不能行走, 忧郁性症状;4分:(瘫痪)不能站立,任何一侧或双侧肢体麻痹。
5 研究指标：
实验一：主要指标是脑卒中病理检出率和脑组织及颈动脉的细胞超微结构变化、血压及 心率。
实验二：主要指标是脑卒中治疗临床表现评分分数及存活天数。实验一和实验二 大鼠处死或自然死亡后尸解取出脑及心脏器官称重。器官重量比值=器官重量(g)/体重(g)× 1000
6 病理组织取材和处理方法
6.1 光镜组织:将脑组织取出后置15%戊二醛液中固定,每个脑组织切成5片,用HE染色,在 光镜下观察脑卒中发生率。
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6.2 电镜组织:动物处死后,立即取出颈总动脉,用0.1 M PBS冲洗后, 即固定于2.5%戊二醛 中2小时以上, 用0.1 M PBS冲洗3次后, 再用1%锇酸固定1小时, 不同浓度的酒精梯度脱水, 醋酸异戊酯置换2次, 每次20分钟, 临界点干燥后, 用离子溅射仪(日立IB-3型) 镀金, S-5 20扫描电镜观察。动物处死后, 立即取出脑组织, 固定于2.5%戊二醛液和1%锇酸液中, 丙酮 逐级脱水后, 用Epon 812环氧树脂包埋, 超薄切片, 经醋酸铀和柠檬酸铅双重染色后, 用 日立H-60透射电镜观察。
7 统计方法：
用方差及t检验的方法比较组间及组内脑卒中临床评分分数, 并比较组间存活天数、血压、心率、体重器官重量比值, 以P<0.05为差异显著性, 数值用
±s表示, 频率以百分数表示。, http://www.100md.com
RESULTS
1 实验一
1.1 血压、心率及体重(表 1)：普乐林注射液 200 mg/kg, 100 mg/kg及对照组治疗前后第 2 ，4，6，8周体重三组间均无明显差别。治疗前及治疗后第2周三组间收缩压均无明显差别, 治疗后第4周普乐林注射液 200 mg/kg组收缩压低于对照组(P<0.05)。治疗前三组间 心率相似, 治疗后2,4周普乐林200 mg/kg, 100 mg/kg组心率均低于对照组(P<0.05～0. 001)。
表 1 实验一: 大鼠血压与心率变化
普乐林 200
mg/kg(n=12)
普乐林 100
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mg/kg(n=12)
对照组
(n =13)
收缩压mmHg
治疗前
175.8±7.6
177.1±8.01
176.5±8.6
治疗后第2周
192.9±10.3
192.9±12.8
196.2±10.2
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治疗后第4周
200.8±10.0**
209.2±12.7
218.1±14.7
心率(次/分)
治疗前
405.7±34.1
392.8±18.5
394.1±14.0
治疗后第2周
414.3±27.3*
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401.1±30.5**
437.7±11.0
治疗后第4周
402.0±18.6**
403.5±9.5**
423.8±8.5
*:P<0.05,**:P<0.01,vs control
1.2 脑及心脏重量比值(表 2)：脑及心脏重量比值三组间均无明显差别。
表 2 实验一: 大鼠器官重量比值与脑卒中检出率
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普乐林 200
mg/kg(n=12)
普乐林 100
mg/kg(n=12)
对照组
(n =13)
心脏重量比值
5.27±1.11
5.26±1.36
5.60±0.90
脑重量比值
8.83±2.13
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8.63±1.53
9.15±2.17
脑卒中检出率
41.7%
50.0%
76.9%
1.3 脑卒中病理检出率(表 2)：光镜下: 脑卒中检出率普乐林注射液200 mg/kg组为41.7%, 普乐林注射液100 mg/kg组为50.0%,对照组为76.9%。
1.4 脑组织与颈动脉电镜观察脑组织电镜透射检查：对照组脑组织神 经细胞核固缩,核染色 质疏松,有的核膜失去双重结构,胞浆内质网扩张,线粒体肿胀,嵴消失,神经髓鞘结构扭曲, 失去正常结构。普乐林注射液200 mg/kg组脑组织以上细胞的形态结构正常或基本正常。普 乐林注射液100 mg/kg组脑组织神经细胞核轻度固缩,核染色质较致密,核膜双重结构, 胞浆内质网轻度扩张,线粒体轻度肿胀, 核糖体丰富,神经髓鞘轻度变形。(图1,2)
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图 1 普乐林 200 mg/kg组脑组织电镜检查
图 2 对照组脑组织电镜检查
颈动脉电镜扫描所见: 对照组内皮细胞高度肿胀,内皮细胞 表面可见大小不等的洞, 内皮细胞表面有许多血小板和红细胞粘附; 细胞表面微绒毛消失。普乐林注射液200 mg/kg, 组,内皮细胞排列整齐,内皮细胞表面很少见到大小不等的洞,细胞表面光滑,可见到微绒 毛,红细胞和血小板粘附较少。普乐林注射液100 mg/kg组内皮细胞排列整齐,有的内皮细胞表面可见大小不等的洞,有少量血小板和 红细胞粘附于表面，见图 3,4。
图 3 普乐林200 mg/kg组颈动脉电镜检查
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图 4 对照组颈动脉电镜检查
2 实验二:
2.1 体重(表 3):实验前,后第4,8周,脑卒中发作时,发作后第1,2,3天体重三组间无明显 差别。
表 3 实验二: 大鼠体重(g)变化
普乐林 200
mg/kg(n=15)
普乐林 100
mg/kg(n=14)
对照组
(n=14)
实验前
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150.0±22.7
147.5±18.1
147.9±21.7
实验后第4周
207.7±36.7
196.8±34.0
194.3±42.1
第8周
210.3±25.5
206.8±24.2
202.9±33.8
脑卒中发作时
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211.3±42.0
210.0±44.6
215.4±50.2
要药后第1天
200.7±40.9
198.2±46.6
196.4±45.3
第2天
210.7±42.1
196.4±36.1
201.1±43.3
第3天
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220.0±38.6
207.5±35.9
199.2±44.2
2.2 脑卒中临床表现评分 (表 4):治疗前(脑卒中发作时)脑卒中临床表 现分数三组间相似。治疗后脑卒中临床分数普乐林200 mg/kg组(0.95±1.39分)与100 mg/kg组(2.41±1.65分)均明显低于对照组(3.77±0.27分)(P <0.001,P<0.01),且明显低于治疗前分数。表 4 实验二:脑卒中分数、存活天数及器官重量比值
普乐林 200
mg/kg(n=12)
普乐林 100
mg/kg(n=12)
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对照组
(n =13)
脑卒中临床评分
治疗前
3.80±0.32
3.97±0.38
3.85±0.23
治疗后
0.95±1.39(***)/(△△)
2.41±1.65( **)/(△)
3.77± 0.27
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治疗存活天数
9.73±1.03*
7.93±2.64
5.36±4.45
心脏重量比值
4.83±0.83*
5.57±1.31
5.62±1.02
脑重量比值
7.92±1.66*
9.07±2.54
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9.54±1.96
*:P<0.05,**:P<0.01,***:P<0.001 vs control group; △:P<0 .0 1,△△:P<0.001 与治疗前比较；心、脑重量比值=脏器重量(g)/体重(g)×1000
2.3 治疗期存活天数(表4):普乐林200 mg/kg组,治疗期存活天数(9.73 ±1.03) 显著长于对照组(5.36±4.45) (P<0.0 5),100 mg/kg组(7.93±2.63)稍长于对照组,但差异不明显。
2.4 脑及心脏器官重量比值(表4):普乐林200 mg/kg组脑重量比值(7.92±1.66)与心脏重量比值(4.83±0.83)均明显低于对 照组(9.54±1.96; 5.62±1.02) (均P<0.05); 100 mg/kg组脑与心脏重量比值(9.07± 2.54; 5.57±1.31) 稍低于对照组,但差异不明显。
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DISCUSSION
卒中型自发性高血压大鼠(SHRsp)100%发生高血压,80%发生脑卒中,是高血压脑卒中 实验研究的最佳模型。
普乐林注射液的有效成分为葛根素,化学名为4'7-二羟基,8-β-D 葡萄糖异黄酮 。研究表明普乐林可扩张脑血管,对抗血管痉挛,增加血流量; 改善血粘度; 并有β-受体阻 滞作用,缓和降低心率及血压,减轻心脏负荷及心肌氧耗量。
动物实验及少量临床研究提示,普乐林(葛根素)有改善脑循环及冠状动脉循环的作用 ,少量病例的临床观察也提示普乐林对脑梗塞病人治疗可能有益[6]。
本实验结果表明普乐林注射液预防性应用,可减少卒中型自发性高血压大鼠(SHRsp) 脑卒中的检出率,示其有减少或预防脑卒中的作用。颈总动脉电镜扫描结果表明,普乐林减 轻了动脉内皮细胞的损害。脑组织电镜透射结果也提示,普乐林有保护脑细胞的作用。
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SHRsp脑卒中发生后立即应用普乐林治疗,普乐林可减少大鼠脑卒中临床表现评分分 数,延长大鼠治疗期存活天数,提示其有改善脑卒中症状及预后的作用。
普乐林200 mg/kg组还可能有减轻脑组织和心脏重量比值的作用和轻微的降压作用。普乐林对大鼠心率有轻微的降低作用,至少没有增加心率,这也有利于保护心脏。
普乐林注射液对SHRsp的脑卒中有一定的预防和治疗作用。
(鸣谢: 中日友好医院电镜室；北京同仁医院病理室)■
REFERENCES：
[1]曾贵云,周运鹏,张丽英等,葛根素对犬血压血管反应性,脑循环及外周循环 的作用[J] 中华医学杂志 1974;54:265
[2]姜秀莲,徐理纳, 葛根素对小鼠实验性微循环障碍的改善作用[J] 药学 学报 1989;4:251
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[3]刘娜. 葛根的药理作用及应用进展[J] 中国现代应用药学 1997;14:20
[4]王丽华,秦川秋,于田. 葛根素治疗冠心病高粘高凝血症[J] 山东医药 1 990;14:5
[5]李小鹰,王培仁,邵建华. 葛根素对急性心肌梗塞患者梗塞范围的影响[J] 中华心血管病杂志 1985;13(3):175
[6]贺翠英. 普乐林治疗老年人脑梗塞临床观察[J] 现代康复 199 8;2(1):44
收稿日期：1999-08-31
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