槲皮素对家兔主动脉血管平滑肌细胞胞内游离钙浓度的影响
作者：李家富 章茂顺 王家良 符宗胤 廖晓阳
单位：李家富(四川省泸州医学院附属医院心内科 泸州 646000)；章茂顺 王家良 符宗胤 廖晓阳(华西医科大学 附一院 心内科 成都 610041)
关键词：槲皮素；血管平滑肌细胞；胞内游离钙浓度；兔
高血压杂志000119
摘 要：目的: 探讨槲皮素(Que)对血管平滑肌细胞胞内游离钙浓 度([Ca2+]i)的影响。方法：采用新一代钙荧光探剂Fluo-3/AM检测Que对培养的兔主动脉血管平滑肌细胞(ASMC) [Ca2+]i 在高K+、去甲肾上腺素(NE)、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)刺激作用下的改变，并与Verapamil进行对照研究。结果：Que(10-6、 10-5、10-4mol/l)呈剂量依 赖性抑制高K+去极化引起的[Ca2+]i 升高，与Verapamil作用相似,但弱于Verapa mil；Que (10-6～10- 4mol/L)对NE,AngⅡ 通过受体介导引起的[Ca2+]i 增高也具有明显的抑制作用。但Que对静息状态的ASM C[Ca2+]i 无明显影响。结论:Que通过对血管平滑肌细胞电压依赖性钙通道和受体 操纵性钙通道双重抑制作用，降低细胞内游离钙水平，这可能是其舒血管降压机制之一。
, 百拇医药
分类号：R589.5;Q46;Q2;R972 文献标识码：A
文章编号：1006-2866(2000)01-0055-03
Effects of Quercetin on Intracellular Free Calcium Concentration in Cultured Rabbit Aortic Smooth Muscle Cells
LI Jiafu
(Department of Cardiology, Affiliated Hospital of Luzhou Medica l College, Luzhou)
ZHANG Maoshun WANG Jialiang FU Zongyin LIAO Xiao yang
, 百拇医药
(Department of Cardiology, First Affiliated Hospital, WCUMS,Chengdu 610041)
ABSTRACT：Aim：To explore the effects of q uercetin (Que) on intracellular free c alcium([Ca2+]i) in vascular smooth muscle cells.Methods: The effects of Que on changes in [Ca2+]i were determined in cultured rabbit aortic smoot h muscle cells(ASMC) after exposure to high K+,norepinephrine(NE) and angioten sinⅡ(AngⅡ). Fluorescent Ca2+-indicater fluo-3/AM was used. The effects of Que were compared with that of verapamil.Results: It was found th at Que (10-6～10-4mol/L) inhibited the elevation of [Ca2+ ]i induced by high potassium-depolarization in a concentration dependent manner. These effects w ere similar to but weaker than those of verapamil. In addition,it was shown tha t Que (10-6～10-4mol/L) inhibited the elevation of [Ca2+]i induced by NE an d Ang Ⅱ in the presence of extracellular Ca2+. In the absence of extra cellul ar Ca2+,Que (10-6～10-4)mol/L also had some blocking effects on the NE-induced [Ca2+]i increase.
, 百拇医药
Conclusions: The results suggest that Que mighit decrease th e [Ca2+]i of ASMC by blocking both voltage-dependent calcium channels and receptor-operated calcium channels,which is one of hypotensive mechanisms.
Key Words：quercetin; vascular smooth muscle cells; intrac ellular free calcium; rabbit▲
近年来研究发现，醋柳黄酮(Total Flavonoids of Hippophae Rhamnoides L,TFH) 有良好的扩张血管 、缓解心绞痛、降低血压、保护心肌缺血/罐注损伤等多种心血管效应 [1 、2、3]。但其作用机制未完全明了。槲皮素(Quercetin,Que)是TFH的主要单体之一。 有研 究显示Que的扩张血管作用可能与拮抗钙离子转运有关[4]。本实验研究观察Que对 培养的兔 主动脉血管平滑肌细胞 (ASMC)在不同刺激条件下胞内游离钙浓度([Ca2+]i)的影 响，以初步探讨其舒血管降压机制，为黄酮类药物在高血压防治中的应用提供实验依据。
, 百拇医药
MATERIALS AND METHODS
1 主要药品及试剂: Que由美达康药业有限公司提供 (纯度>98%);Verapamil(Ver) 购自德国基诺药厂； 去甲肾上腺素(NE)为上海禾丰制药有限公司产品;HEPES,Fluo-3/AM,AngiotensinⅡ(AngⅡ) ,EGTA均购于Sigma公司;A23187为美国CNI公司产品,其他试剂均为国产分析纯。
2 兔主动脉血管平滑肌细胞培养: 根据文献[5]采用贴块法培养。无菌取出新西兰大白兔(华西医大实验动物中 心提供) 胸主动脉，去除血管内皮及外膜将中膜剪成 1 mm大小组织块,置于培养瓶贴壁培养。待2周 左右,长出单层细胞，呈典型“峰”、“谷”样生长,并进行传代。在光镜、电镜下鉴定。
3 ASMC游离钙浓度测定:参照文献[6]将ASMC(2.5×104细胞/ml)培养在13 mm玻璃片上, 待细胞生长融 合,用钙荧光探针Fluo-3/AM负载处理。在37℃恒温下,采用RF-5000pc型荧光分光度计(日 本、岛津)进行荧光强度测定。参数：Ex Bandpass 5 nm,Em Bandpass 10 nm；λex 505 nm,λem 526 nm,Re sponse 2 s。分别检测Que对高K+，NE，AngⅡ等激动剂引起[Ca2+]i 升高的作 用,测定前预先将Que加入各样品中孵育6 min,再分别加入上述激动剂；对照组则只加入激动 剂;空白组不加入任何药物干预测定静息状态钙荧光值(F)。然后加入A23187(10-5mol/L),读取最大荧光值(Fmax) ，最后加入EGTA(5 mmol/L)，读取最小荧光值(Fmin)。按下式计算出细胞内Ca2+浓度 (nmol/L)：[Ca2+]i =Kd(F-Fmin)/(Fmax-F)，Kd=450 nmol/L为Ca2+与Fluo -3/AM解离常数。
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4 统计分析：数据均用
±s表示,组间比较用t检验。
RESULTS
1 Que对静息状态ASMC[Ca2+]i 的影响: 静息状态下培养的单层兔主动脉血管平滑肌细胞[Ca2+]i 为126.77±8.54 nmol/L(n=15)。在Que (10-4mol/L)、Ver(10-5mol/L)作用下,分别为125. 36± 7.92 nmol/L,124.16±9.76 nmol/L,对静息状态[Ca2+]i 均无明显影响(n=5,P 均>0.05)。
2 Que对高K+去极化引起[Ca2+]i 升高的抑制作用: 高KCl(70 mmol/L)使膜去极化作用，明显增加ASMC[Ca2+]i ,由127.90± 10.51 nmol/L增至614.91±39.04 nmol/L(n=5,P<0.01)。当预先分别加入Que 10-6、10-5、10-4mol/L，再加入KCl(70 mmol/L )，则使升高的[Ca2+]i 分别下降了27.06%,41.08%,67.95%， 呈剂量依赖性降低[Ca2+]i(P均<0.01 ); 在同样条件下，Ver(10-5mol/L)使升高的细胞内钙降低了70.09%，与同剂量的Que相 比P<0.01，具有统计学义,见Fig 1。
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Fig 1 Effects of inhibition of Que(10-6～10-4mol/ L) and verapamil(10-5m ol/L) on
high K+ (70 mmol/L) induced [Ca2+]i elevation in cultured ASM C from rabbit.
(±s,n=5) **P<0.01 compared with KCl; ##：P<0.01 compared
with Que (10-5mol/L)；△△：P<0.01 compared with Ver+KCl
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3 Que对NE引起[Ca2+]i升高的抑制作用:当有细胞外钙存在时(胞外钙浓度为1.8mol/L)，NE(10-5mol/L)使ASMC[Ca2 +]i明显升高，由静息状态的127.34±8.68 nmol/L 增至445.10±29.67 nmol/L (P< 0.01, n=5)。无细胞 外钙存在下，则ASMC静息状态[Ca2+]i降为71.95±5.41 nmol/L, NE(10-5mo l/L)使胞内贮存钙释放，[Ca2+]i升至178.76±13.54 nmol/L (P<0.01, n =5)。Que (10-6、10-5、10-4 mol/L)对NE(10-5mol/L)在有或 无胞外Ca2+存在下引起的[Ca2+]i升高,均具有明显的抑制效应(P<0.01) ,(Fig.2)。
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Fig 2 Effects of inhibition of different concentration Que on NE( 10-5mol/L) induced
[Ca2+]i elevation in cultured ASMC from r abbit in the presence and absence of external calcium
:NE(control);
:Quw(10-6 mol/L)+NE;
:Que(10-5 mol/L)+NE;
:Qu e(10-4 mol/L)+NE
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(±s,n=5),**P<0.01, compared with NE (control)
4 Que对Ang Ⅱ引起[Ca2+]i升高的抑制作用：AngⅡ(100 nmol/L)使ASMC[Ca2+]i明显升高，由静息状态下126.77±9.56 nmol/L 升至 675.51±44.79 nmol/L (n=5, P<0.01)。Que 10-6，10-5，10-4mol/L分别使Ang Ⅱ(100nmol/L)引起升高的[Ca 2+]i下降了18.63%,34.20%，47.23%,各剂量组对AngⅡ激动作用均具有明显抑制效应(P<0.01),(Fig.3) 。
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Fig 3 Effects of Que of different concentration on Ang Ⅱ (100 nmol/ L) induced
[Ca2+]i elevation in cultured ASMC from rabbit:AngⅡ(control);
:Quw(10-6 mol/L)+AngⅡ;:Que(10-5 mol/L )+AngⅡ;
:Que(10-4 mol/L)+AngⅡ
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(±s,n=5),**：P<0.01, compared with AngⅡ (control)
DISCUSSION
高血压患者存在细胞钙调控障碍,主要表现在Ca2+跨膜内流增加、 胞 内Ca2+池释放与摄取Ca2+异常以及胞内Ca2+外向转运障碍,使[Ca2 +]i升高,血管张力增加 ,血压升 高。而且触发血管平滑肌、心肌增殖、肥厚,结构重塑[7，8]。因此, 寻找纠正细 胞钙调控障碍的药物对高血压防治具有重要意义。
Que是广泛存在于植物界的黄酮类化合物，也是TFH的主要单体之一。近年来不少 研究表明TFH具有良好缓解心绞痛、降低血压等作用。但对其单体成份研究甚少。在七十年 代有研究发现Que具有扩张血管、降低血压等作用。曾有作者报道用Que治疗高血压患者50例 ，有效率达74%，服药30天平均血压下降17～26/8～11mmHg，降压效果明显[9]。但 Que降压机制至今未明。目前认为其降压作用可能涉及：(1)对心血管活动中枢的抑制作用 [10]；(2)拮抗钙通道，降低胞内钙水平[4]。本实验研究应用培养的A SMC，观察了Que对ASMC在不同刺激条件下胞内游离钙浓度([Ca2+]i)的影响。
, 百拇医药
1 Que对静息状态细胞[Ca2+]i的影响： 静息状态下，细胞[Ca2+]i变化是Ca2+跨膜转运和胞内钙池摄取与释 放等动态平衡改 变的结果。也是细胞发挥其生理功能的重要物质基础。本实验研究发现,Que及Ver对静息状 态的细胞[Ca2+]i 无明显影响,这与Durate[11]等报道的Que对静息状态的 主动脉血管条无明 显松弛作用具有一致性。说明在生理范围的细胞外钙存在下，Que对细胞钙的动态平衡调节 无明显影响。
2 Que对刺激状态细胞[Ca2+]i的影响： 在血管平滑肌细胞膜上存在的电压依赖性钙通道(VDC)和受体操纵性钙通道(ROC)是 胞外Ca2+内流的主要途径。细胞外高K+状态使膜去极化,激活VDC,使细胞外Ca2 +内流, [C a2+]i 升高。NE、AngⅡ是较强的两种缩血管活性物质,通过激活细胞膜上相应的ROC 引起胞外Ca2+ 内流、胞内贮存钙释放,提高胞内游离钙水平，使血管反应性增加，在高血压发病机制中具 有重要作用。在无外Ca2+时,NE则通过α1受体介导使胞内贮存钙释放,引起[Ca 2+]i升高[12]。 本研究显示Que 呈剂量依赖性抑制高K+去极化引起的[ Ca2+]i升高,表明Que 降低[Ca2+]i 与阻滞VDC,减少胞外Ca2+内流有关。但其对跨膜Ca2+内流的抑制作用弱于传 统的钙拮抗 剂Verapamil。实验中还发现Que不同程度地抑制NE、AngⅡ的激动作用,从而降低[Ca2+ ]i , 显示Que 对通过ROC引起的[Ca2+]i 升高也具有抑制作用。
, 百拇医药
本实验研究提示Que 可能通过对VDC、ROC的双重抑制作用,降低血管平滑肌细胞胞 内游离钙水平,这可能是其舒血管降压机制之一。但Que 是否直接作用于离子通道、受体或 是胞内信号途径尚需深入研究。■
REFERENCES：
[1]章茂顺，王家良，张泰怀等. 醋柳黄酮治疗缺血性心脏病随机对照研究[J] 中华心血管病杂志 1987；15(2)：97
[2]于晓江，刘传镐，李孝光等.沙棘总黄酮对离体血管平滑肌的作用[J]西安 医科大学学报 1990;11(4)：332
[3]吴英，王秉文，王 毅等. 沙棘总黄酮对大鼠心肌再灌注损伤的保护作用[J] 中国药理学通报 1998;13(1)：53
[4]Morales M.A, Lozoyo X. Calcium-antagonist effects of quercetin on aortic smo oth muscle[J] Planta Med 1994,60：313-317
, 百拇医药
[5]夏人仪，佘铭鹏，卢耀增，等. 兔主动脉平滑肌细胞培养及形态学观察[J] 中华心血管病杂志 1982;10(2):134-137
[6]Zhu ZM, Tepel M, Zidek W. Role of Na+/Ca2+ exchange on agonist induc ed cytosolic free calcium in vascular smooth muscle cells[J] Am J Physiol 1994;266:C794
[7]Gonzalez JM,Suki WN. Cell calcium and arterial blood pressure[J] Semin-N ephrol 1995;15(6):564-8
[8]Marban E,Koretsune Y. Cell calcium,Oncogenes,and hypertrophy[J] Hyperten s 1990;15:652-658
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[9]陈奇，张士善. 槲皮素的药理研究及临床应用[J] 中华医学杂志 1977 ；8：513
[10]矫勇益，邵立荣，杨建平等. 槲皮素对大鼠循环功能影响及其中枢机制的探讨[J] 中国药理学通报 1996；12(5)：479
[11]Duarte J, Prevez VF,Zarzuelo A, et al. Vasodilator effects of querc etin in isolated rat vascular smooth muscle[J] Eur J Pharmacol 1993;239: 1-7
[12]Xu JL, Guan YY, Chen KM, et al. Character of the Ca2+ entry induced by activation of α1-adrenoceptors in rat aorta[J] Chin Pharmacol Bull 1994,10:101-4
收稿日期：1999-02-09, http://www.100md.com
单位：李家富(四川省泸州医学院附属医院心内科 泸州 646000)；章茂顺 王家良 符宗胤 廖晓阳(华西医科大学 附一院 心内科 成都 610041)
关键词：槲皮素；血管平滑肌细胞；胞内游离钙浓度；兔
高血压杂志000119
摘 要：目的: 探讨槲皮素(Que)对血管平滑肌细胞胞内游离钙浓 度([Ca2+]i)的影响。方法：采用新一代钙荧光探剂Fluo-3/AM检测Que对培养的兔主动脉血管平滑肌细胞(ASMC) [Ca2+]i 在高K+、去甲肾上腺素(NE)、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)刺激作用下的改变，并与Verapamil进行对照研究。结果：Que(10-6、 10-5、10-4mol/l)呈剂量依 赖性抑制高K+去极化引起的[Ca2+]i 升高，与Verapamil作用相似,但弱于Verapa mil；Que (10-6～10- 4mol/L)对NE,AngⅡ 通过受体介导引起的[Ca2+]i 增高也具有明显的抑制作用。但Que对静息状态的ASM C[Ca2+]i 无明显影响。结论:Que通过对血管平滑肌细胞电压依赖性钙通道和受体 操纵性钙通道双重抑制作用，降低细胞内游离钙水平，这可能是其舒血管降压机制之一。
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分类号：R589.5;Q46;Q2;R972 文献标识码：A
文章编号：1006-2866(2000)01-0055-03
Effects of Quercetin on Intracellular Free Calcium Concentration in Cultured Rabbit Aortic Smooth Muscle Cells
LI Jiafu
(Department of Cardiology, Affiliated Hospital of Luzhou Medica l College, Luzhou)
ZHANG Maoshun WANG Jialiang FU Zongyin LIAO Xiao yang
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(Department of Cardiology, First Affiliated Hospital, WCUMS,Chengdu 610041)
ABSTRACT：Aim：To explore the effects of q uercetin (Que) on intracellular free c alcium([Ca2+]i) in vascular smooth muscle cells.Methods: The effects of Que on changes in [Ca2+]i were determined in cultured rabbit aortic smoot h muscle cells(ASMC) after exposure to high K+,norepinephrine(NE) and angioten sinⅡ(AngⅡ). Fluorescent Ca2+-indicater fluo-3/AM was used. The effects of Que were compared with that of verapamil.Results: It was found th at Que (10-6～10-4mol/L) inhibited the elevation of [Ca2+ ]i induced by high potassium-depolarization in a concentration dependent manner. These effects w ere similar to but weaker than those of verapamil. In addition,it was shown tha t Que (10-6～10-4mol/L) inhibited the elevation of [Ca2+]i induced by NE an d Ang Ⅱ in the presence of extracellular Ca2+. In the absence of extra cellul ar Ca2+,Que (10-6～10-4)mol/L also had some blocking effects on the NE-induced [Ca2+]i increase.
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Conclusions: The results suggest that Que mighit decrease th e [Ca2+]i of ASMC by blocking both voltage-dependent calcium channels and receptor-operated calcium channels,which is one of hypotensive mechanisms.
Key Words：quercetin; vascular smooth muscle cells; intrac ellular free calcium; rabbit▲
近年来研究发现，醋柳黄酮(Total Flavonoids of Hippophae Rhamnoides L,TFH) 有良好的扩张血管 、缓解心绞痛、降低血压、保护心肌缺血/罐注损伤等多种心血管效应 [1 、2、3]。但其作用机制未完全明了。槲皮素(Quercetin,Que)是TFH的主要单体之一。 有研 究显示Que的扩张血管作用可能与拮抗钙离子转运有关[4]。本实验研究观察Que对 培养的兔 主动脉血管平滑肌细胞 (ASMC)在不同刺激条件下胞内游离钙浓度([Ca2+]i)的影 响，以初步探讨其舒血管降压机制，为黄酮类药物在高血压防治中的应用提供实验依据。
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MATERIALS AND METHODS
1 主要药品及试剂: Que由美达康药业有限公司提供 (纯度>98%);Verapamil(Ver) 购自德国基诺药厂； 去甲肾上腺素(NE)为上海禾丰制药有限公司产品;HEPES,Fluo-3/AM,AngiotensinⅡ(AngⅡ) ,EGTA均购于Sigma公司;A23187为美国CNI公司产品,其他试剂均为国产分析纯。
2 兔主动脉血管平滑肌细胞培养: 根据文献[5]采用贴块法培养。无菌取出新西兰大白兔(华西医大实验动物中 心提供) 胸主动脉，去除血管内皮及外膜将中膜剪成 1 mm大小组织块,置于培养瓶贴壁培养。待2周 左右,长出单层细胞，呈典型“峰”、“谷”样生长,并进行传代。在光镜、电镜下鉴定。
3 ASMC游离钙浓度测定:参照文献[6]将ASMC(2.5×104细胞/ml)培养在13 mm玻璃片上, 待细胞生长融 合,用钙荧光探针Fluo-3/AM负载处理。在37℃恒温下,采用RF-5000pc型荧光分光度计(日 本、岛津)进行荧光强度测定。参数：Ex Bandpass 5 nm,Em Bandpass 10 nm；λex 505 nm,λem 526 nm,Re sponse 2 s。分别检测Que对高K+，NE，AngⅡ等激动剂引起[Ca2+]i 升高的作 用,测定前预先将Que加入各样品中孵育6 min,再分别加入上述激动剂；对照组则只加入激动 剂;空白组不加入任何药物干预测定静息状态钙荧光值(F)。然后加入A23187(10-5mol/L),读取最大荧光值(Fmax) ，最后加入EGTA(5 mmol/L)，读取最小荧光值(Fmin)。按下式计算出细胞内Ca2+浓度 (nmol/L)：[Ca2+]i =Kd(F-Fmin)/(Fmax-F)，Kd=450 nmol/L为Ca2+与Fluo -3/AM解离常数。
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4 统计分析：数据均用
±s表示,组间比较用t检验。RESULTS
1 Que对静息状态ASMC[Ca2+]i 的影响: 静息状态下培养的单层兔主动脉血管平滑肌细胞[Ca2+]i 为126.77±8.54 nmol/L(n=15)。在Que (10-4mol/L)、Ver(10-5mol/L)作用下,分别为125. 36± 7.92 nmol/L,124.16±9.76 nmol/L,对静息状态[Ca2+]i 均无明显影响(n=5,P 均>0.05)。
2 Que对高K+去极化引起[Ca2+]i 升高的抑制作用: 高KCl(70 mmol/L)使膜去极化作用，明显增加ASMC[Ca2+]i ,由127.90± 10.51 nmol/L增至614.91±39.04 nmol/L(n=5,P<0.01)。当预先分别加入Que 10-6、10-5、10-4mol/L，再加入KCl(70 mmol/L )，则使升高的[Ca2+]i 分别下降了27.06%,41.08%,67.95%， 呈剂量依赖性降低[Ca2+]i(P均<0.01 ); 在同样条件下，Ver(10-5mol/L)使升高的细胞内钙降低了70.09%，与同剂量的Que相 比P<0.01，具有统计学义,见Fig 1。
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Fig 1 Effects of inhibition of Que(10-6～10-4mol/ L) and verapamil(10-5m ol/L) on
high K+ (70 mmol/L) induced [Ca2+]i elevation in cultured ASM C from rabbit.
(
±s,n=5) **P<0.01 compared with KCl; ##：P<0.01 comparedwith Que (10-5mol/L)；△△：P<0.01 compared with Ver+KCl
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3 Que对NE引起[Ca2+]i升高的抑制作用:当有细胞外钙存在时(胞外钙浓度为1.8mol/L)，NE(10-5mol/L)使ASMC[Ca2 +]i明显升高，由静息状态的127.34±8.68 nmol/L 增至445.10±29.67 nmol/L (P< 0.01, n=5)。无细胞 外钙存在下，则ASMC静息状态[Ca2+]i降为71.95±5.41 nmol/L, NE(10-5mo l/L)使胞内贮存钙释放，[Ca2+]i升至178.76±13.54 nmol/L (P<0.01, n =5)。Que (10-6、10-5、10-4 mol/L)对NE(10-5mol/L)在有或 无胞外Ca2+存在下引起的[Ca2+]i升高,均具有明显的抑制效应(P<0.01) ,(Fig.2)。
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Fig 2 Effects of inhibition of different concentration Que on NE( 10-5mol/L) induced
[Ca2+]i elevation in cultured ASMC from r abbit in the presence and absence of external calcium
:NE(control);:Quw(10-6 mol/L)+NE;:Que(10-5 mol/L)+NE;:Qu e(10-4 mol/L)+NE, http://www.100md.com
(
±s,n=5),**P<0.01, compared with NE (control)4 Que对Ang Ⅱ引起[Ca2+]i升高的抑制作用：AngⅡ(100 nmol/L)使ASMC[Ca2+]i明显升高，由静息状态下126.77±9.56 nmol/L 升至 675.51±44.79 nmol/L (n=5, P<0.01)。Que 10-6，10-5，10-4mol/L分别使Ang Ⅱ(100nmol/L)引起升高的[Ca 2+]i下降了18.63%,34.20%，47.23%,各剂量组对AngⅡ激动作用均具有明显抑制效应(P<0.01),(Fig.3) 。
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Fig 3 Effects of Que of different concentration on Ang Ⅱ (100 nmol/ L) induced
[Ca2+]i elevation in cultured ASMC from rabbit
:AngⅡ(control);:Quw(10-6 mol/L)+AngⅡ;:Que(10-5 mol/L )+AngⅡ;:Que(10-4 mol/L)+AngⅡ, 百拇医药
(
±s,n=5),**：P<0.01, compared with AngⅡ (control)DISCUSSION
高血压患者存在细胞钙调控障碍,主要表现在Ca2+跨膜内流增加、 胞 内Ca2+池释放与摄取Ca2+异常以及胞内Ca2+外向转运障碍,使[Ca2 +]i升高,血管张力增加 ,血压升 高。而且触发血管平滑肌、心肌增殖、肥厚,结构重塑[7，8]。因此, 寻找纠正细 胞钙调控障碍的药物对高血压防治具有重要意义。
Que是广泛存在于植物界的黄酮类化合物，也是TFH的主要单体之一。近年来不少 研究表明TFH具有良好缓解心绞痛、降低血压等作用。但对其单体成份研究甚少。在七十年 代有研究发现Que具有扩张血管、降低血压等作用。曾有作者报道用Que治疗高血压患者50例 ，有效率达74%，服药30天平均血压下降17～26/8～11mmHg，降压效果明显[9]。但 Que降压机制至今未明。目前认为其降压作用可能涉及：(1)对心血管活动中枢的抑制作用 [10]；(2)拮抗钙通道，降低胞内钙水平[4]。本实验研究应用培养的A SMC，观察了Que对ASMC在不同刺激条件下胞内游离钙浓度([Ca2+]i)的影响。
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1 Que对静息状态细胞[Ca2+]i的影响： 静息状态下，细胞[Ca2+]i变化是Ca2+跨膜转运和胞内钙池摄取与释 放等动态平衡改 变的结果。也是细胞发挥其生理功能的重要物质基础。本实验研究发现,Que及Ver对静息状 态的细胞[Ca2+]i 无明显影响,这与Durate[11]等报道的Que对静息状态的 主动脉血管条无明 显松弛作用具有一致性。说明在生理范围的细胞外钙存在下，Que对细胞钙的动态平衡调节 无明显影响。
2 Que对刺激状态细胞[Ca2+]i的影响： 在血管平滑肌细胞膜上存在的电压依赖性钙通道(VDC)和受体操纵性钙通道(ROC)是 胞外Ca2+内流的主要途径。细胞外高K+状态使膜去极化,激活VDC,使细胞外Ca2 +内流, [C a2+]i 升高。NE、AngⅡ是较强的两种缩血管活性物质,通过激活细胞膜上相应的ROC 引起胞外Ca2+ 内流、胞内贮存钙释放,提高胞内游离钙水平，使血管反应性增加，在高血压发病机制中具 有重要作用。在无外Ca2+时,NE则通过α1受体介导使胞内贮存钙释放,引起[Ca 2+]i升高[12]。 本研究显示Que 呈剂量依赖性抑制高K+去极化引起的[ Ca2+]i升高,表明Que 降低[Ca2+]i 与阻滞VDC,减少胞外Ca2+内流有关。但其对跨膜Ca2+内流的抑制作用弱于传 统的钙拮抗 剂Verapamil。实验中还发现Que不同程度地抑制NE、AngⅡ的激动作用,从而降低[Ca2+ ]i , 显示Que 对通过ROC引起的[Ca2+]i 升高也具有抑制作用。
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本实验研究提示Que 可能通过对VDC、ROC的双重抑制作用,降低血管平滑肌细胞胞 内游离钙水平,这可能是其舒血管降压机制之一。但Que 是否直接作用于离子通道、受体或 是胞内信号途径尚需深入研究。■
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收稿日期：1999-02-09, http://www.100md.com