HPLC法分析贯叶连翘不同部位中金丝桃素的含量
作者：曾建国 张胜 陈玉秀
单位：曾建国 张胜 陈玉秀(湖南宏生堂实业有限公司 长沙 410007)
关键词：贯叶连翘；金丝桃素；不同部位；HPLC
西北药学杂志000410摘要 用HPLC法测定贯叶连翘根、茎、叶、花、果中金丝桃素的含量；结果表明花中含量最高，茎中含量甚微。
中图分类号：R284 文献标识码：A
贯叶连翘Hypericum perforatum L.为藤黄科金丝桃属植物，药理实验证明其主要成分金丝桃素具有抗病毒、抗炎及抗肿瘤作用，对人体激活白细胞的免疫功能有抑制作用〔1〕。目前以金丝桃素含量为贯叶连翘定量指标。我们建立了HPLC法，并测定了几个产区的贯叶连翘原植物根、茎、叶、花、果中金丝桃素的含量，以指导药材的采收和金丝桃素生产原料的质量控制。
, 百拇医药
1 仪器与试药
1.1 仪器 HPLC仪(美国Perkin-Elmer公司)；LC-295型紫外可见检测器；Series 200泵；Plus-1022色谱工作站。
1.2 试药 乙腈(色谱纯)；金丝桃素对照品(Sigma公司，批号97071503)；贯叶连翘(Hypericum.Perforatum Linn)全草(7月下旬至9月上旬采集)。
2 方法与结果
2.1 色谱条件 色谱柱：Nova-Pak ODS(4.6mm×200mm)；流动相：甲醇∶乙腈∶0.1mol/L磷酸二氢钠缓冲液(400∶100∶100)；流速：1ml/min；检测波长：588nm；Range：0.05AUFS；进样量：10μl，金丝桃素保留时间11min。
2.2 供试液的制备 将原药材各部位样品分别粉碎，使全部过60目筛。精密称取约1g，用甲醇-吡啶(90∶10)20ml超声提取1h，放冷至室温，最后定容于25ml量瓶中，用0.45μm滤膜滤过，滤液即为供试液。精密称取金丝桃素对照品，用吡啶-甲醇(1∶9)溶解并稀释为0.01mg/ml的溶液，作为对照品溶液。
, http://www.100md.com
2.3 提取溶媒的选择 金丝桃素为多酚羟基双蒽酮类，在甲醇中加入一定吡啶使提取溶剂呈弱碱性，有利于金丝桃素的溶出。
2.4 提取时间 对同一药材样品分别加入吡啶-甲醇溶液20ml超声提取15，30，45，60，90min后测定，表明45min以后金丝桃素的含量测定结果趋于稳定(15%)，考虑超声时间过长溶剂升温，故采取超声1h为宜。
2.5 标准曲线的制备 分别吸取0，2.5，5，10，15，20μl的金丝桃素对照品溶液进样，以峰面积对进样量回归得方程：y＝38707x-8804，r＝0.9991。
同法取供试品溶液测定。结果见表1。取同一药材测定9次，RSD＝3.30%。
表1 不同产地贯叶连翘各部位的含量 产 地
花
, http://www.100md.com
叶
茎
根
果实
全草
甘肃文县
0.072
0.046
0.002
未检出
0.028
甘肃康县
0.090
, http://www.100md.com
0.035
未检出
未检出
0.039
湖南龙山
0.058
0.037
0.007
未检出
0.019
0.019
贵州毕节
0.057
, 百拇医药
0.036
0.003
未检出
0.009
0.022
陕西丹凤
0.086
0.033
未检出
未检出
0.018
湖北恩施
0.085
, 百拇医药
0.040
未检出
未检出
0.015
四川达川
0.050
0.035
未检出
未检出
0.018
2.6 加样回收试验 精密称取药材粉末3份，分别加入不同量的金丝桃素对照品，按样品测定方法操作，金丝桃素平均回收率为100.3%，RSD＝4.17%。
, 百拇医药
3 讨论
①金丝桃素含量测定可用薄层扫描法〔2〕或HPLC法，荧光检测并配合梯度洗脱〔3〕。本文建立的HPLC法使用紫外检测器，且为等度洗脱，较上述方法简便、实用，具有较强的可操作性。
②从含量测定结果可知：金丝桃素在花中含量最高，叶次之，果实含量低，茎中含量甚微，根中未检出金丝桃素。故应在花期采收地上部分，弃去茎干；药材质量以花叶多者为优。
参考文献
〔1〕 Ezio Bombardelli, Paolo Morazzoni. Hypericum perforatum. Fitoterapia, 1995(1):43
〔2〕 Kartnig Th and Gbel I. Determination of hypericin and pseudohypericin by thin layer chromatography-den-sitometry. J Chromotogr, 1992(609):423
〔3〕 Giuseppe Micali, Francesco Lanuzza, Paolina Curro. High performance liquid chromatographic determination of the biologically active principle hypericin in phytotherapeatic vegetable extracts and alcoholic beverages. J Chromotogr, 1996(731):336
(收稿：2000-02-22), http://www.100md.com
单位：曾建国 张胜 陈玉秀(湖南宏生堂实业有限公司 长沙 410007)
关键词：贯叶连翘；金丝桃素；不同部位；HPLC
西北药学杂志000410摘要 用HPLC法测定贯叶连翘根、茎、叶、花、果中金丝桃素的含量；结果表明花中含量最高，茎中含量甚微。
中图分类号：R284 文献标识码：A
贯叶连翘Hypericum perforatum L.为藤黄科金丝桃属植物，药理实验证明其主要成分金丝桃素具有抗病毒、抗炎及抗肿瘤作用，对人体激活白细胞的免疫功能有抑制作用〔1〕。目前以金丝桃素含量为贯叶连翘定量指标。我们建立了HPLC法，并测定了几个产区的贯叶连翘原植物根、茎、叶、花、果中金丝桃素的含量，以指导药材的采收和金丝桃素生产原料的质量控制。
, 百拇医药
1 仪器与试药
1.1 仪器 HPLC仪(美国Perkin-Elmer公司)；LC-295型紫外可见检测器；Series 200泵；Plus-1022色谱工作站。
1.2 试药 乙腈(色谱纯)；金丝桃素对照品(Sigma公司，批号97071503)；贯叶连翘(Hypericum.Perforatum Linn)全草(7月下旬至9月上旬采集)。
2 方法与结果
2.1 色谱条件 色谱柱：Nova-Pak ODS(4.6mm×200mm)；流动相：甲醇∶乙腈∶0.1mol/L磷酸二氢钠缓冲液(400∶100∶100)；流速：1ml/min；检测波长：588nm；Range：0.05AUFS；进样量：10μl，金丝桃素保留时间11min。
2.2 供试液的制备 将原药材各部位样品分别粉碎，使全部过60目筛。精密称取约1g，用甲醇-吡啶(90∶10)20ml超声提取1h，放冷至室温，最后定容于25ml量瓶中，用0.45μm滤膜滤过，滤液即为供试液。精密称取金丝桃素对照品，用吡啶-甲醇(1∶9)溶解并稀释为0.01mg/ml的溶液，作为对照品溶液。
, http://www.100md.com
2.3 提取溶媒的选择 金丝桃素为多酚羟基双蒽酮类，在甲醇中加入一定吡啶使提取溶剂呈弱碱性，有利于金丝桃素的溶出。
2.4 提取时间 对同一药材样品分别加入吡啶-甲醇溶液20ml超声提取15，30，45，60，90min后测定，表明45min以后金丝桃素的含量测定结果趋于稳定(15%)，考虑超声时间过长溶剂升温，故采取超声1h为宜。
2.5 标准曲线的制备 分别吸取0，2.5，5，10，15，20μl的金丝桃素对照品溶液进样，以峰面积对进样量回归得方程：y＝38707x-8804，r＝0.9991。
同法取供试品溶液测定。结果见表1。取同一药材测定9次，RSD＝3.30%。
表1 不同产地贯叶连翘各部位的含量 产 地
花
, http://www.100md.com
叶
茎
根
果实
全草
甘肃文县
0.072
0.046
0.002
未检出
0.028
甘肃康县
0.090
, http://www.100md.com
0.035
未检出
未检出
0.039
湖南龙山
0.058
0.037
0.007
未检出
0.019
0.019
贵州毕节
0.057
, 百拇医药
0.036
0.003
未检出
0.009
0.022
陕西丹凤
0.086
0.033
未检出
未检出
0.018
湖北恩施
0.085
, 百拇医药
0.040
未检出
未检出
0.015
四川达川
0.050
0.035
未检出
未检出
0.018
2.6 加样回收试验 精密称取药材粉末3份，分别加入不同量的金丝桃素对照品，按样品测定方法操作，金丝桃素平均回收率为100.3%，RSD＝4.17%。
, 百拇医药
3 讨论
①金丝桃素含量测定可用薄层扫描法〔2〕或HPLC法，荧光检测并配合梯度洗脱〔3〕。本文建立的HPLC法使用紫外检测器，且为等度洗脱，较上述方法简便、实用，具有较强的可操作性。
②从含量测定结果可知：金丝桃素在花中含量最高，叶次之，果实含量低，茎中含量甚微，根中未检出金丝桃素。故应在花期采收地上部分，弃去茎干；药材质量以花叶多者为优。
参考文献
〔1〕 Ezio Bombardelli, Paolo Morazzoni. Hypericum perforatum. Fitoterapia, 1995(1):43
〔2〕 Kartnig Th and Gbel I. Determination of hypericin and pseudohypericin by thin layer chromatography-den-sitometry. J Chromotogr, 1992(609):423
〔3〕 Giuseppe Micali, Francesco Lanuzza, Paolina Curro. High performance liquid chromatographic determination of the biologically active principle hypericin in phytotherapeatic vegetable extracts and alcoholic beverages. J Chromotogr, 1996(731):336
(收稿：2000-02-22), http://www.100md.com