神女乐洗液质控方法的研究
作者：谢东
单位：南宁 530021 广西药品检验所
关键词：神女乐洗液；薄层色谱法；气相色谱法；苦参；蛇床子；薄荷脑
中国现代应用药学990620
摘要 目的：建立神女乐洗液的质量控制方法。方法：采用薄层色谱法对其中的苦参、蛇床子进行定性鉴别；并以萘为内标，应用气相色谱法对其中的薄荷脑进行了定量测定。结果：线性范围在0.06312～0.3156μg，平均回收率97.16%(n=5)，RSD为0.90%。结论：鉴别和含量测定方法中各阴性对照均无干扰，含量测定方法灵敏度高，重现性好，可作为该制剂的质量控制标准。
Quality control of Shennule Xiye
Xie Dong(Xie D)
, http://www.100md.com
(Guangxi Province Institute for Drug Control,Nanning 530021)
ABSTRACT OBJECTIVE：A quality control method was established for Shennule Xiye.METHOD:Ingredients sophoras and cnidii were identified by TLC.A GC method for the determinetion of menthol using nahpthalene as internal standard was established.RESULTS:The method was linear within the range of 0.06312～0.3156μg,the average recovery was 97.16%,and the RSD was 0.90%.CONCLUSION:The method is sensitive and highly reproducible,and can be used for the assay of Shennule Xiye.
, 百拇医药
KEY WORDS Shennule Xiye,TLC,GC,sophoras,cnidii,menthol
神女乐洗液是由苦参、地肤子、薄荷油、蛇床子等中药经加工而成的外用液体制剂，具有清热燥湿，杀虫止痒功能，临床上用于湿热带下，皮肤瘙痒症的治疗。为了有效控制神女乐洗液的内在质量，采用TLC法分别对制剂中的主要药物苦参、蛇床子进行了定性鉴别，并应用气相色谱法测定了样品中薄荷脑的含量，为神女乐洗液的质量控制提供了实验依据。
1 仪器与试药
日本岛津GC-9A气相色谱仪；岛津C-R2A数据处理机。槐定碱，薄荷脑对照品(中国药品生物制品检定所)；硅胶G(青岛海洋化工厂)；神女乐洗液(广西右江制药厂)；试剂均为分析纯。药材经黄燮才主任技师鉴定。
2 TLC定性鉴别
, 百拇医药
2.1 薄层板制备
取硅胶G，加0.5%羧甲基纤维素钠溶液，研匀，均匀涂布于玻璃板上，晾干，105℃活化1h，置干燥器中备用。
2.2 供试品溶液制备
取本品10ml，加氨试液调pH值至9～10，加氯仿15ml，振摇提取，分取氯仿液，于水浴上蒸干，残渣加氯仿3ml使溶解，滤过，滤液作为供试品溶液。
2.3 对照品溶液制备
取槐定碱对照品适量，加氯仿制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。
2.4 蛇床子对照药材溶液的制备
取蛇床子对照药材1g，加氯仿15ml及氨试液1ml,冷浸1h，时时振摇，滤过，滤液于水浴上蒸干，残渣加氯仿3ml使溶解，滤过，滤液作为对照药材溶液。
, 百拇医药
2.5 阴性对照溶液制备
按处方比例去除苦参或蛇床子，同供试品溶液制备方法分别制得缺苦参或蛇床子的阴性对照溶液。
2.6 苦参的鉴别
吸取供试品溶液、缺苦参的阴性对照溶液、槐定碱对照品溶液各4μl，分别点于同一薄层板上，以氯仿-甲醇-浓氨试液(30∶3∶0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾溶液。供试品色谱中，与对照品色谱在相应位置上有相同的橙红色斑点，缺苦参的阴性对照溶液无干扰，结果见图1。
1-供试品溶液；2-槐定碱对照品液；3-阴性对照液
2.7 蛇床子的鉴别
, 百拇医药 吸取供试品溶液、缺蛇床子的阴性对照溶液、蛇床子对照药材溶液各10～15μl，分别点于同一薄层板上，以石油醚(60～90℃)-醋酸乙酯(7∶3)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%香草醛硫酸溶液，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的蓝色荧光斑点，缺蛇床子的阴性对照溶液无干扰，结果见图2。
图2 蛇床子TLC图谱
1-供试品溶液；2-蛇床子药材液；3-阴性对照液
3 薄荷脑含量测定
3.1 色谱条件
色谱柱：10% PEG-20M，0.3mm×2m；柱温：118℃；进样口与检测器温度：210℃；气流：N2 30ml/min，H2 60ml/min，空气400ml/min；氢火焰检测器。
, 百拇医药
3.2 标准曲线的制备
3.2.1 内标溶液配制 精密称取萘52.4mg，置50ml量瓶中，加石油醚(60～90℃)使溶解并稀释至刻度，作为内标溶液。3.2.2 薄荷脑对照品溶液的配制 精密称取薄荷脑对照品49.2mg,置50ml量瓶中，加石油醚(60～90℃)使溶解并稀释至刻度，作为原液备用。精密吸取原液2ml，加入内标溶液2ml，加石油醚(60～90℃)稀释至刻度，摇匀，即得。
3.2.3 测定方法 精密吸取薄荷脑原液1，2，3，4和5ml，置50ml量瓶中，加石油醚(60～90℃)稀释至刻度，摇匀。以给定的色谱条件进样3μl，以薄荷脑峰面积与内标峰面积之比为横坐标，薄荷脑含量为纵坐标，绘制标准曲线，其回归方程为：Y(μg)=0.1612944X+0.0007681，r=0.99999。
在0.06312～0.3156μg范围内进样量与峰面积呈良好的线性关系。
, 百拇医药
3.3 干扰实验
按处方规定的配比，制成不含薄荷油的样品，按样品测定项下操作，在给定的条件下分析，试验结果表明，空白样品对测定无影响，结果见图3。
图3 干扰试验气相色谱图
1-溶剂色谱峰；2-样品色谱峰(不加内标)；3-样品色谱峰(加内标)；4-标准品色谱峰(加内标)；5-空白样品色谱峰；a-薄荷脑；b-萘(内标)
3.4 精密度试验
取样品供试液进样5次，测定薄荷脑含量，结果其RSD为0.66%。
3.5稳定性试验
, 百拇医药
取样品供试液每隔2h进样一次，共测定 5次，结果薄荷脑含量平均为0.197mg/ml，RSD为1.21%，表明样品溶液在8h内稳定。
3.6 重现性试验
取同一批样品5份，按样品提取方法同法提取，测定薄荷脑的含量，结果平均含量为0.194%，RSD为1.62%，表明重现性良好。
3.7回收率试验
精密吸取样品15ml，精密加薄荷脑原液(1.052mg/ml)2ml，按样品提取方法制得供试品溶液，测定薄荷脑含量，结果平均回收率为97.16%，RSD为0.90%，见表1。
表1 加样回收率测定结果 编号
样品量/mg
, http://www.100md.com
加入量/mg
测得量/mg
回收率/%
1
2.913
2.104
4.956
97.1
2
2.913
2.104
4.944
96.5
, 百拇医药
3
2.913
2.104
4.983
98.4
4
2.913
2.104
4.937
96.2
5
2.913
2.104
, 百拇医药
4.966
97.6
3.8 样品测定
精密吸取供试品15ml，加石油醚(60～90℃)提取4次(15，10，10和10)，合并提取液，置于50ml量瓶中，加石油醚(60～90℃)稀释至刻度，作为供试品溶液。吸取3μl，进样。以内标法计算，结果见表2。表2 样品测定结果 批 号
薄荷脑含量/mg.ml-1
RSD/%
950420
0.194
1.62
, http://www.100md.com
950422
0.213
1.76
950425
0.205
1.98
980602
0.267
0.97
980702
0.260
0.42
4 讨 论
, http://www.100md.com
4.1 在苦参的鉴别中，曾试用苦参碱作为对照品，但在展开后发现，阴性对照在与苦参碱对照品色谱相应位置有一相同颜色的斑点，故最后采用槐定碱作为对照品。试验中，曾比较了不同的展开系统，如氯仿-甲醇-浓氨试液的不同比例以及甲苯-丙酮-乙醇-浓氨试液(20∶20∶3∶1)、苯-丙酮-甲醇(8∶3∶0.5)等，结果以本文所选用的展开系统较好，斑点完全分离，Rf值适中。
4.2 在蛇床子的薄层鉴别中，曾试用了苯-醋酸乙酯(9∶1)、正己烷-醋酸乙酯(8.5∶1.5)等展开系统，结果以本文所用的展开系统较好，斑点能较好分离，Rf值适中。若展开后直接置紫外光灯(365nm)下检视，虽然供试品色谱与对照药材色谱有相对应的紫色斑点，但其它斑点较多，喷1%香草醛硫酸溶液后，再置紫外光灯(365nm)下检视，则其余大部分斑点不再显荧光，对确定对应斑点较好，故本文确定以喷显色剂后再检识。
4.3 薄荷脑含量测定中，曾用乙醚作为溶剂，结果色谱分离效果比用石油醚(60～90℃)要好，但乙醚易挥发，使测定结果不稳定，所以换用石油醚作溶剂提取，结果稳定性较好。
4.4 本文所用方法简便、快速，重现性和专属性较好，可作为本品的质量控制指标。收稿日期：1998-11-10, 百拇医药
单位：南宁 530021 广西药品检验所
关键词：神女乐洗液；薄层色谱法；气相色谱法；苦参；蛇床子；薄荷脑
中国现代应用药学990620
摘要 目的：建立神女乐洗液的质量控制方法。方法：采用薄层色谱法对其中的苦参、蛇床子进行定性鉴别；并以萘为内标，应用气相色谱法对其中的薄荷脑进行了定量测定。结果：线性范围在0.06312～0.3156μg，平均回收率97.16%(n=5)，RSD为0.90%。结论：鉴别和含量测定方法中各阴性对照均无干扰，含量测定方法灵敏度高，重现性好，可作为该制剂的质量控制标准。
Quality control of Shennule Xiye
Xie Dong(Xie D)
, http://www.100md.com
(Guangxi Province Institute for Drug Control,Nanning 530021)
ABSTRACT OBJECTIVE：A quality control method was established for Shennule Xiye.METHOD:Ingredients sophoras and cnidii were identified by TLC.A GC method for the determinetion of menthol using nahpthalene as internal standard was established.RESULTS:The method was linear within the range of 0.06312～0.3156μg,the average recovery was 97.16%,and the RSD was 0.90%.CONCLUSION:The method is sensitive and highly reproducible,and can be used for the assay of Shennule Xiye.
, 百拇医药
KEY WORDS Shennule Xiye,TLC,GC,sophoras,cnidii,menthol
神女乐洗液是由苦参、地肤子、薄荷油、蛇床子等中药经加工而成的外用液体制剂，具有清热燥湿，杀虫止痒功能，临床上用于湿热带下，皮肤瘙痒症的治疗。为了有效控制神女乐洗液的内在质量，采用TLC法分别对制剂中的主要药物苦参、蛇床子进行了定性鉴别，并应用气相色谱法测定了样品中薄荷脑的含量，为神女乐洗液的质量控制提供了实验依据。
1 仪器与试药
日本岛津GC-9A气相色谱仪；岛津C-R2A数据处理机。槐定碱，薄荷脑对照品(中国药品生物制品检定所)；硅胶G(青岛海洋化工厂)；神女乐洗液(广西右江制药厂)；试剂均为分析纯。药材经黄燮才主任技师鉴定。
2 TLC定性鉴别
, 百拇医药
2.1 薄层板制备
取硅胶G，加0.5%羧甲基纤维素钠溶液，研匀，均匀涂布于玻璃板上，晾干，105℃活化1h，置干燥器中备用。
2.2 供试品溶液制备
取本品10ml，加氨试液调pH值至9～10，加氯仿15ml，振摇提取，分取氯仿液，于水浴上蒸干，残渣加氯仿3ml使溶解，滤过，滤液作为供试品溶液。
2.3 对照品溶液制备
取槐定碱对照品适量，加氯仿制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。
2.4 蛇床子对照药材溶液的制备
取蛇床子对照药材1g，加氯仿15ml及氨试液1ml,冷浸1h，时时振摇，滤过，滤液于水浴上蒸干，残渣加氯仿3ml使溶解，滤过，滤液作为对照药材溶液。
, 百拇医药
2.5 阴性对照溶液制备
按处方比例去除苦参或蛇床子，同供试品溶液制备方法分别制得缺苦参或蛇床子的阴性对照溶液。
2.6 苦参的鉴别
吸取供试品溶液、缺苦参的阴性对照溶液、槐定碱对照品溶液各4μl，分别点于同一薄层板上，以氯仿-甲醇-浓氨试液(30∶3∶0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾溶液。供试品色谱中，与对照品色谱在相应位置上有相同的橙红色斑点，缺苦参的阴性对照溶液无干扰，结果见图1。
1-供试品溶液；2-槐定碱对照品液；3-阴性对照液
2.7 蛇床子的鉴别
, 百拇医药 吸取供试品溶液、缺蛇床子的阴性对照溶液、蛇床子对照药材溶液各10～15μl，分别点于同一薄层板上，以石油醚(60～90℃)-醋酸乙酯(7∶3)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%香草醛硫酸溶液，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的蓝色荧光斑点，缺蛇床子的阴性对照溶液无干扰，结果见图2。
图2 蛇床子TLC图谱
1-供试品溶液；2-蛇床子药材液；3-阴性对照液
3 薄荷脑含量测定
3.1 色谱条件
色谱柱：10% PEG-20M，0.3mm×2m；柱温：118℃；进样口与检测器温度：210℃；气流：N2 30ml/min，H2 60ml/min，空气400ml/min；氢火焰检测器。
, 百拇医药
3.2 标准曲线的制备
3.2.1 内标溶液配制 精密称取萘52.4mg，置50ml量瓶中，加石油醚(60～90℃)使溶解并稀释至刻度，作为内标溶液。3.2.2 薄荷脑对照品溶液的配制 精密称取薄荷脑对照品49.2mg,置50ml量瓶中，加石油醚(60～90℃)使溶解并稀释至刻度，作为原液备用。精密吸取原液2ml，加入内标溶液2ml，加石油醚(60～90℃)稀释至刻度，摇匀，即得。
3.2.3 测定方法 精密吸取薄荷脑原液1，2，3，4和5ml，置50ml量瓶中，加石油醚(60～90℃)稀释至刻度，摇匀。以给定的色谱条件进样3μl，以薄荷脑峰面积与内标峰面积之比为横坐标，薄荷脑含量为纵坐标，绘制标准曲线，其回归方程为：Y(μg)=0.1612944X+0.0007681，r=0.99999。
在0.06312～0.3156μg范围内进样量与峰面积呈良好的线性关系。
, 百拇医药
3.3 干扰实验
按处方规定的配比，制成不含薄荷油的样品，按样品测定项下操作，在给定的条件下分析，试验结果表明，空白样品对测定无影响，结果见图3。
图3 干扰试验气相色谱图
1-溶剂色谱峰；2-样品色谱峰(不加内标)；3-样品色谱峰(加内标)；4-标准品色谱峰(加内标)；5-空白样品色谱峰；a-薄荷脑；b-萘(内标)
3.4 精密度试验
取样品供试液进样5次，测定薄荷脑含量，结果其RSD为0.66%。
3.5稳定性试验
, 百拇医药
取样品供试液每隔2h进样一次，共测定 5次，结果薄荷脑含量平均为0.197mg/ml，RSD为1.21%，表明样品溶液在8h内稳定。
3.6 重现性试验
取同一批样品5份，按样品提取方法同法提取，测定薄荷脑的含量，结果平均含量为0.194%，RSD为1.62%，表明重现性良好。
3.7回收率试验
精密吸取样品15ml，精密加薄荷脑原液(1.052mg/ml)2ml，按样品提取方法制得供试品溶液，测定薄荷脑含量，结果平均回收率为97.16%，RSD为0.90%，见表1。
表1 加样回收率测定结果 编号
样品量/mg
, http://www.100md.com
加入量/mg
测得量/mg
回收率/%
1
2.913
2.104
4.956
97.1
2
2.913
2.104
4.944
96.5
, 百拇医药
3
2.913
2.104
4.983
98.4
4
2.913
2.104
4.937
96.2
5
2.913
2.104
, 百拇医药
4.966
97.6
3.8 样品测定
精密吸取供试品15ml，加石油醚(60～90℃)提取4次(15，10，10和10)，合并提取液，置于50ml量瓶中，加石油醚(60～90℃)稀释至刻度，作为供试品溶液。吸取3μl，进样。以内标法计算，结果见表2。表2 样品测定结果 批 号
薄荷脑含量/mg.ml-1
RSD/%
950420
0.194
1.62
, http://www.100md.com
950422
0.213
1.76
950425
0.205
1.98
980602
0.267
0.97
980702
0.260
0.42
4 讨 论
, http://www.100md.com
4.1 在苦参的鉴别中，曾试用苦参碱作为对照品，但在展开后发现，阴性对照在与苦参碱对照品色谱相应位置有一相同颜色的斑点，故最后采用槐定碱作为对照品。试验中，曾比较了不同的展开系统，如氯仿-甲醇-浓氨试液的不同比例以及甲苯-丙酮-乙醇-浓氨试液(20∶20∶3∶1)、苯-丙酮-甲醇(8∶3∶0.5)等，结果以本文所选用的展开系统较好，斑点完全分离，Rf值适中。
4.2 在蛇床子的薄层鉴别中，曾试用了苯-醋酸乙酯(9∶1)、正己烷-醋酸乙酯(8.5∶1.5)等展开系统，结果以本文所用的展开系统较好，斑点能较好分离，Rf值适中。若展开后直接置紫外光灯(365nm)下检视，虽然供试品色谱与对照药材色谱有相对应的紫色斑点，但其它斑点较多，喷1%香草醛硫酸溶液后，再置紫外光灯(365nm)下检视，则其余大部分斑点不再显荧光，对确定对应斑点较好，故本文确定以喷显色剂后再检识。
4.3 薄荷脑含量测定中，曾用乙醚作为溶剂，结果色谱分离效果比用石油醚(60～90℃)要好，但乙醚易挥发，使测定结果不稳定，所以换用石油醚作溶剂提取，结果稳定性较好。
4.4 本文所用方法简便、快速，重现性和专属性较好，可作为本品的质量控制指标。收稿日期：1998-11-10, 百拇医药