恒河猴海洛因依赖动物模型的建立
作者：张晓冬 郭晓红 郭玲 张肇玫 张正仙 侯云成 郑春兰 曾庆云 蒋家雄
单位：张晓冬 郭晓红 郭 玲 张肇玫 张正仙 侯云成 郑春兰 蒋家雄 昆明 650031 昆明医学院药物依赖研究所；曾庆云 昆明 650032 昆明医学院第一附属医院
关键词：海洛因；恒河猴；模型
中国现代应用药学990604
摘要 目的：用吗啡依赖猴作对比，对海洛因依赖猴模型进行研究。方法：给猴每日3次臀部皮下注射海洛因，连续注射10周。结果：随着注射海洛因时间的延长，猴的戒断症状逐渐加重。结论：本实验可使猴在10周内形成海洛因依赖动物模型，具有成瘾过程平稳、海洛因用量少、成瘾时间缩短等优点。
Establishment of animal model of heroin-dependent macaca mulatta
, 百拇医药
Zhang Xiaodong(Zhang XD),Guo Xiaohong(Guo XH),Guo Ling(Guo L),et al(Institute of Drug Dependence ,Kunming Medical College,Kunming 650031)
ABSTRACT OBJECTIVE：To study heroin-dependent macaca mulatta model through contrast to morphie-dependent Macaca mulatta.METHOD:Macaca mulatta in this study were injected subcutaneously in buttock with heroin three times a day for ten weeks.RESULTS:Withdrawal sympotms deteriorated as injection period of heroin was protracted.CONCLUSION:This study can turn macaca mulatta into heroin-dependent animal model.It has the advantages such as stable addiction process,low dose of heroin,shorter period of addiction and etc.
, 百拇医药
KEY WORDS heroin,macaca mulatte,model
海洛因是危及全球的三大毒品之一，其滥用是令人瞩目而又棘手的问题，对社会、家庭、个人所造成的严重危害，已为国际、国内所关注。寻找对脱毒治疗的有效药物已成为当务之急。进行脱毒药物的筛选研究，动物模型是基础，目前国内外主要采用的是吗啡依赖动物模型。但在临床上，病人主要是海洛因依赖，吗啡依赖仅为医源性所致，人数不多。海洛因为*****，其水溶性更大，吸收较快，并且脂溶性也较大，易于透过血脑屏障进入中枢，而吗啡难于透过血脑屏障，脑中只有较低的浓度。海洛因作用比吗啡强2～3倍，出现欣快比吗啡快，临床上二者依赖强度和治疗难度也有所不同。故采用海洛因依赖模型进行研究可能更接近于临床实际。经过多年努力及多次反复实验，我所建立了海洛因依赖恒河猴动物模型。
1 材料和方法
1.1 材料
, 百拇医药
1.1.1 动物 恒河猴(Macaca mulatta)10只，年龄4.5±1.5岁，雌雄均有，体重(5.6±1.0)kg(中国科学院云南省灵长目实验中心)。随机分为2组，海洛因组，吗啡组，每组5只。
实验猴单笼喂养，由专人负责打扫卫生，每天喂营养配方主食2次，中间喂一次瓜子及水果或蔬菜以保证各种必需营养成份的供给。猴购入后饲养15～30d适应环境后方用于实验。
1.1.2 药品 海洛因：白色粉末，纯度为88.12%(云南省昆明市公安局)。临用时用灭菌蒸馏水溶解。
盐酸吗啡(青海制药厂，批号：951030)，临用时用灭菌蒸馏水溶解。
盐酸纳洛酮(北京四环制药厂，批号：950906)。
1.2 方法
, 百拇医药
1.2.1 海洛因或吗啡依赖猴形成的给药方法 以剂量递增方法形成海洛因依赖猴。恒河猴5只，臀部皮下注射海洛因溶液，每天3次(8:00,13:00,18:00)。起始剂量为0.8mg/(kg.d)，每周递增一倍，从第6周起维持第5周所用剂量直至第10周结束(表1)。
1.2.2 吗啡依赖猴形成的给药方法 参照文献[1]。恒河猴5只，臂部皮下注射吗啡溶液，每天3次(8：00，13：00，18：00)。剂量第1，2，3周分别为3，6和10mg/(kg.d)，从第4周起改为15mg/(kg.d)，维持至第10周结束(表1)。
表1 药物用量表 周 次
海洛因/mg/(kg.d)
吗啡/mg/(kg.d)
, 百拇医药
1
0.8
3
2
1.6
6
3
3.2
10
4
6.4
15
5
12.8
, 百拇医药
15
6
12.8
15
7
12.8
15
8
12.8
15
9
12.8
15
10
, 百拇医药
12.8
15
1.2.3 催促实验 两组猴从注射海洛因或吗啡开始，分别在10，20，30和40d时进行催促实验。用盐酸纳洛酮0.5mg/kg，皮下注射进行催瘾，观察注射盐酸纳洛酮后20min内猴出现的戒断症状。固定专人进行评分，及时了解在依赖形成过程中猴对海洛因或吗啡依赖的程度。
1.2.4 自然戒断实验 注射海洛因或吗啡10周后，停止注射，观察猴的戒断反应。每天定时由专人进行评分，直到戒断症状完全消失为止。
1.2.5 评分方法 制定戒断症状观察表[2]。观察症状共36项：烦躁不安、啼鸣、激惹、稀便、流涎、颜面潮红、面色苍白、意向性震颤、厌食、肌肉僵硬、立毛、抱腹、无力、躺卧、腹泻、跌倒、奇异姿势、行为异常、恶心、呕吐、咬栏、咬骨头、倒立、转圈、翻滚、争斗、精神痿糜、渴求、攻击行为、哈欠、闭目侧卧、呼吸急促、衰竭状态、抽搐、死亡。
, 百拇医药
评分标准：无症状0分，出现症状1分，症状严重2分，症状极重3分。评分人员均由3位通过培训后的专人各自分别对每猴进行观察、评分及记录。评分人员独立计分，不得讨论。将3人对每猴的评分总和除以3，即得催促或自然戒断各猴戒断症状的实际得分。
2 结 果
2.1 催促实验
海洛因组:注射海洛因10d时，进行第1次催促实验，猴已表现出烦躁不安、意向性震颤、奇异姿势、流涎、流涕、激惹、咬栏、稀便、立毛等症状，但症状较轻，得分为3.76±0.51;注射海洛因20d时，进行第2次催促实验，以上症状逐渐加重，得分为5.58±1.20;注射海洛因30d时，进行第3次催促实验，除以上症状加重外，部分猴出现恶心、呕吐、啼鸣、呼吸急促、咬骨头、行为异常、翻滚，得分为12.96±2.24；注射海洛因40d时，以上症状已为严重或极重，部分猴出现争斗、转圈、翻滚、倒立，得分为15.58±1.48。吗啡组：注射吗啡10d时，进行第1次催促实验，猴已表现出烦躁不安、意向性震颤、奇异姿势、闭目侧卧、啼鸣、颜面潮红、恶心，得分为2.7±1.3；注射吗啡20d时，进行第2次催促实验，以上症状逐渐加重，部分猴出现咬骨头、躺卧、咬栏、立毛、激惹，得分为6.4±1.9；注射海洛因30d时，进行第3次催促实验，除以上症状加重外，部分猴出现翻滚、行为异常、争斗，得分为8.2±2.0；注射海洛因40d时，进行第四次催促实验，前述所有症状均为严重或极重，呼吸急促、有的出现倒立，得分为11.2±3.8。
, 百拇医药
从以上两组猴催促实验结果可看出，随着注射海洛因或吗啡时间的延长，猴的戒断症状逐渐加重。
2.2 自然戒断实验
海洛因组:注射海洛因10周后，停用海洛因，进行自然戒断实验。当停用海洛因后14h猴开始出现戒断症状：啼鸣、食欲减退、流涎、流涕、颜面潮红、意向性震颤、厌食、恶心、抱腹、无力、躺卧、奇异姿势、精神痿糜、激惹、呼吸急促等。
吗啡组：注射吗啡10周后，停用吗啡，进行自然戒断实验。当停用吗啡14h后猴开始出现戒断症状：烦躁不安、啼鸣、恶心、意向性震颤、抱腹、躺卧、呕吐、激惹、面色苍白、精神痿糜、渴求、攻击行为、奇异姿势、厌食、颜面潮红、立毛、食欲减退、哈欠、闭目侧卧等。
两组猴戒断症状出现频率和严重程度在停用海洛因后72h达到高峰，第6天后逐渐减轻(表2)。
, http://www.100md.com
表2 猴自然戒断日平均分值表(
±s) 时间/d
海洛因组
吗啡组
1
7.7±3.8
5.5±2.3
2
11.0±2.7
6.5±2.5
3
12.4±2.3
, 百拇医药
6.7±1.1
4
7.6±2.7
3.9±1.0
5
7.0±2.7
3.7±0.8
6
4.9±3.0
2.5±0.3
7
2.1±1.1
1.2±0.2
, 百拇医药
3 讨 论
3.1 猴是最接近人的高等动物，用猴做实验得出的结果对临床用药的指导意义最大。我所近年来，一直进行恒河猴海洛因依赖动物模型的研究工作，并对恒河猴海洛因依赖形成的时间、累计剂量、催促实验戒断反应的量-效、时-效变化及自然戒断反应出现的时-效关系进行了研究。认为海洛因组与吗啡组相比，在依赖形成初期，海洛因具有形成依赖时间短、用药量少、戒断反应程度严重、戒断症状稍有不同，有兴奋表现等特点[2]。本实验在文献[2]的基础上，在海洛因的用量、成瘾时间、催瘾方法、评分方法上进行了改进。具有以下优点：①海洛因用量减少，猴在成瘾过程中状况良好，活动自如，未出现深睡等情况。②成瘾时间缩短，既节约了海洛因用量，又缩短了整个实验周期。③催促实验方法把纳洛酮静脉注射法改为皮下注射法，既不影响实验效果，又降低了实验难度。④在评分方法上采用三人独立记分，科学性、严谨性及可信度均较高。
3.2 与吗啡模型相比，从实验结果可看出：①二者均随着注射海洛因或吗啡时间的延长，依赖的程度逐渐加重，但海洛因组重于吗啡组。②二者均表现为在停止注射海洛因或吗啡后出现各种戒断症状，且戒断症状的出现频率和严重程度在停用海洛因或吗啡后72h达到高峰，6d后逐渐减轻、消失，与临床实际是相符的。③与吗啡组相比，海洛因组具有形成依赖时间短、用药量少、戒断反应程度严重(表2)、戒断症状不完全相同的特点。
综上所述，本实验可使猴在10周内形成海洛因依赖动物模型，具有成瘾过程平稳、海洛因用量少、成瘾时间缩短等优点。
参考文献
1 陆苏南，张有才，王大鹏，等.吗啡依赖猴脱毒药效学实验方法在评价脱毒药疗效中的应用.中国药物依赖性通报，1995，4(4)∶205.
2 郭晓红，张晓冬，徐贵丽，等.海洛因和吗啡对猴的致依赖性比较.中国药物依赖性通报，1997，6(1)∶13.
收稿日期：1998-08-10, 百拇医药
单位：张晓冬 郭晓红 郭 玲 张肇玫 张正仙 侯云成 郑春兰 蒋家雄 昆明 650031 昆明医学院药物依赖研究所；曾庆云 昆明 650032 昆明医学院第一附属医院
关键词：海洛因；恒河猴；模型
中国现代应用药学990604
摘要 目的：用吗啡依赖猴作对比，对海洛因依赖猴模型进行研究。方法：给猴每日3次臀部皮下注射海洛因，连续注射10周。结果：随着注射海洛因时间的延长，猴的戒断症状逐渐加重。结论：本实验可使猴在10周内形成海洛因依赖动物模型，具有成瘾过程平稳、海洛因用量少、成瘾时间缩短等优点。
Establishment of animal model of heroin-dependent macaca mulatta
, 百拇医药
Zhang Xiaodong(Zhang XD),Guo Xiaohong(Guo XH),Guo Ling(Guo L),et al(Institute of Drug Dependence ,Kunming Medical College,Kunming 650031)
ABSTRACT OBJECTIVE：To study heroin-dependent macaca mulatta model through contrast to morphie-dependent Macaca mulatta.METHOD:Macaca mulatta in this study were injected subcutaneously in buttock with heroin three times a day for ten weeks.RESULTS:Withdrawal sympotms deteriorated as injection period of heroin was protracted.CONCLUSION:This study can turn macaca mulatta into heroin-dependent animal model.It has the advantages such as stable addiction process,low dose of heroin,shorter period of addiction and etc.
, 百拇医药
KEY WORDS heroin,macaca mulatte,model
海洛因是危及全球的三大毒品之一，其滥用是令人瞩目而又棘手的问题，对社会、家庭、个人所造成的严重危害，已为国际、国内所关注。寻找对脱毒治疗的有效药物已成为当务之急。进行脱毒药物的筛选研究，动物模型是基础，目前国内外主要采用的是吗啡依赖动物模型。但在临床上，病人主要是海洛因依赖，吗啡依赖仅为医源性所致，人数不多。海洛因为*****，其水溶性更大，吸收较快，并且脂溶性也较大，易于透过血脑屏障进入中枢，而吗啡难于透过血脑屏障，脑中只有较低的浓度。海洛因作用比吗啡强2～3倍，出现欣快比吗啡快，临床上二者依赖强度和治疗难度也有所不同。故采用海洛因依赖模型进行研究可能更接近于临床实际。经过多年努力及多次反复实验，我所建立了海洛因依赖恒河猴动物模型。
1 材料和方法
1.1 材料
, 百拇医药
1.1.1 动物 恒河猴(Macaca mulatta)10只，年龄4.5±1.5岁，雌雄均有，体重(5.6±1.0)kg(中国科学院云南省灵长目实验中心)。随机分为2组，海洛因组，吗啡组，每组5只。
实验猴单笼喂养，由专人负责打扫卫生，每天喂营养配方主食2次，中间喂一次瓜子及水果或蔬菜以保证各种必需营养成份的供给。猴购入后饲养15～30d适应环境后方用于实验。
1.1.2 药品 海洛因：白色粉末，纯度为88.12%(云南省昆明市公安局)。临用时用灭菌蒸馏水溶解。
盐酸吗啡(青海制药厂，批号：951030)，临用时用灭菌蒸馏水溶解。
盐酸纳洛酮(北京四环制药厂，批号：950906)。
1.2 方法
, 百拇医药
1.2.1 海洛因或吗啡依赖猴形成的给药方法 以剂量递增方法形成海洛因依赖猴。恒河猴5只，臀部皮下注射海洛因溶液，每天3次(8:00,13:00,18:00)。起始剂量为0.8mg/(kg.d)，每周递增一倍，从第6周起维持第5周所用剂量直至第10周结束(表1)。
1.2.2 吗啡依赖猴形成的给药方法 参照文献[1]。恒河猴5只，臂部皮下注射吗啡溶液，每天3次(8：00，13：00，18：00)。剂量第1，2，3周分别为3，6和10mg/(kg.d)，从第4周起改为15mg/(kg.d)，维持至第10周结束(表1)。
表1 药物用量表 周 次
海洛因/mg/(kg.d)
吗啡/mg/(kg.d)
, 百拇医药
1
0.8
3
2
1.6
6
3
3.2
10
4
6.4
15
5
12.8
, 百拇医药
15
6
12.8
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8
12.8
15
9
12.8
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12.8
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1.2.3 催促实验 两组猴从注射海洛因或吗啡开始，分别在10，20，30和40d时进行催促实验。用盐酸纳洛酮0.5mg/kg，皮下注射进行催瘾，观察注射盐酸纳洛酮后20min内猴出现的戒断症状。固定专人进行评分，及时了解在依赖形成过程中猴对海洛因或吗啡依赖的程度。
1.2.4 自然戒断实验 注射海洛因或吗啡10周后，停止注射，观察猴的戒断反应。每天定时由专人进行评分，直到戒断症状完全消失为止。
1.2.5 评分方法 制定戒断症状观察表[2]。观察症状共36项：烦躁不安、啼鸣、激惹、稀便、流涎、颜面潮红、面色苍白、意向性震颤、厌食、肌肉僵硬、立毛、抱腹、无力、躺卧、腹泻、跌倒、奇异姿势、行为异常、恶心、呕吐、咬栏、咬骨头、倒立、转圈、翻滚、争斗、精神痿糜、渴求、攻击行为、哈欠、闭目侧卧、呼吸急促、衰竭状态、抽搐、死亡。
, 百拇医药
评分标准：无症状0分，出现症状1分，症状严重2分，症状极重3分。评分人员均由3位通过培训后的专人各自分别对每猴进行观察、评分及记录。评分人员独立计分，不得讨论。将3人对每猴的评分总和除以3，即得催促或自然戒断各猴戒断症状的实际得分。
2 结 果
2.1 催促实验
海洛因组:注射海洛因10d时，进行第1次催促实验，猴已表现出烦躁不安、意向性震颤、奇异姿势、流涎、流涕、激惹、咬栏、稀便、立毛等症状，但症状较轻，得分为3.76±0.51;注射海洛因20d时，进行第2次催促实验，以上症状逐渐加重，得分为5.58±1.20;注射海洛因30d时，进行第3次催促实验，除以上症状加重外，部分猴出现恶心、呕吐、啼鸣、呼吸急促、咬骨头、行为异常、翻滚，得分为12.96±2.24；注射海洛因40d时，以上症状已为严重或极重，部分猴出现争斗、转圈、翻滚、倒立，得分为15.58±1.48。吗啡组：注射吗啡10d时，进行第1次催促实验，猴已表现出烦躁不安、意向性震颤、奇异姿势、闭目侧卧、啼鸣、颜面潮红、恶心，得分为2.7±1.3；注射吗啡20d时，进行第2次催促实验，以上症状逐渐加重，部分猴出现咬骨头、躺卧、咬栏、立毛、激惹，得分为6.4±1.9；注射海洛因30d时，进行第3次催促实验，除以上症状加重外，部分猴出现翻滚、行为异常、争斗，得分为8.2±2.0；注射海洛因40d时，进行第四次催促实验，前述所有症状均为严重或极重，呼吸急促、有的出现倒立，得分为11.2±3.8。
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从以上两组猴催促实验结果可看出，随着注射海洛因或吗啡时间的延长，猴的戒断症状逐渐加重。
2.2 自然戒断实验
海洛因组:注射海洛因10周后，停用海洛因，进行自然戒断实验。当停用海洛因后14h猴开始出现戒断症状：啼鸣、食欲减退、流涎、流涕、颜面潮红、意向性震颤、厌食、恶心、抱腹、无力、躺卧、奇异姿势、精神痿糜、激惹、呼吸急促等。
吗啡组：注射吗啡10周后，停用吗啡，进行自然戒断实验。当停用吗啡14h后猴开始出现戒断症状：烦躁不安、啼鸣、恶心、意向性震颤、抱腹、躺卧、呕吐、激惹、面色苍白、精神痿糜、渴求、攻击行为、奇异姿势、厌食、颜面潮红、立毛、食欲减退、哈欠、闭目侧卧等。
两组猴戒断症状出现频率和严重程度在停用海洛因后72h达到高峰，第6天后逐渐减轻(表2)。
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表2 猴自然戒断日平均分值表(
±s) 时间/d海洛因组
吗啡组
1
7.7±3.8
5.5±2.3
2
11.0±2.7
6.5±2.5
3
12.4±2.3
, 百拇医药
6.7±1.1
4
7.6±2.7
3.9±1.0
5
7.0±2.7
3.7±0.8
6
4.9±3.0
2.5±0.3
7
2.1±1.1
1.2±0.2
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3 讨 论
3.1 猴是最接近人的高等动物，用猴做实验得出的结果对临床用药的指导意义最大。我所近年来，一直进行恒河猴海洛因依赖动物模型的研究工作，并对恒河猴海洛因依赖形成的时间、累计剂量、催促实验戒断反应的量-效、时-效变化及自然戒断反应出现的时-效关系进行了研究。认为海洛因组与吗啡组相比，在依赖形成初期，海洛因具有形成依赖时间短、用药量少、戒断反应程度严重、戒断症状稍有不同，有兴奋表现等特点[2]。本实验在文献[2]的基础上，在海洛因的用量、成瘾时间、催瘾方法、评分方法上进行了改进。具有以下优点：①海洛因用量减少，猴在成瘾过程中状况良好，活动自如，未出现深睡等情况。②成瘾时间缩短，既节约了海洛因用量，又缩短了整个实验周期。③催促实验方法把纳洛酮静脉注射法改为皮下注射法，既不影响实验效果，又降低了实验难度。④在评分方法上采用三人独立记分，科学性、严谨性及可信度均较高。
3.2 与吗啡模型相比，从实验结果可看出：①二者均随着注射海洛因或吗啡时间的延长，依赖的程度逐渐加重，但海洛因组重于吗啡组。②二者均表现为在停止注射海洛因或吗啡后出现各种戒断症状，且戒断症状的出现频率和严重程度在停用海洛因或吗啡后72h达到高峰，6d后逐渐减轻、消失，与临床实际是相符的。③与吗啡组相比，海洛因组具有形成依赖时间短、用药量少、戒断反应程度严重(表2)、戒断症状不完全相同的特点。
综上所述，本实验可使猴在10周内形成海洛因依赖动物模型，具有成瘾过程平稳、海洛因用量少、成瘾时间缩短等优点。
参考文献
1 陆苏南，张有才，王大鹏，等.吗啡依赖猴脱毒药效学实验方法在评价脱毒药疗效中的应用.中国药物依赖性通报，1995，4(4)∶205.
2 郭晓红，张晓冬，徐贵丽，等.海洛因和吗啡对猴的致依赖性比较.中国药物依赖性通报，1997，6(1)∶13.
收稿日期：1998-08-10, 百拇医药