银茶胶囊的相关毒理学实验
作者：蒋琳兰 刘演波 赵树进
单位：(广州军区广州总医院 广州510010)
关键词：银茶胶囊；半数致死量；微核试验；精子畸形试验；Ames氏试验
中国医院药学杂志981114 摘要 目的:对本院自制制剂银茶胶囊进行毒理学研究。方法:1.小鼠LD50试验;2.微核试验;3.精子致畸试验;4.Ames氏致突变试验。结果:银茶胶囊灌胃,昆明种小鼠的LD50大于10 g.kg-1,给药5.0 g.kg-1剂量下未发现对小鼠骨髓细胞微核和精子畸形发生率有不良影响,在5 mg.ml-1剂量下,未显示致突变作用。结论:银茶胶囊无明显毒性和致畸及致突变作用。
, http://www.100md.com 银茶胶囊的主要成份为银杏黄酮和茶多酚,该两种成份的单一成份的制剂分别用于治疗心脑血管缺血等多种疾病,取得了显著的疗效[1],但作为一个复方制剂的研究尚未见报道。根据中医学的基础理论和现代药理学的研究,该两种成份在药理学上有协同作用[2,3]。为了提高制剂疗效,使用方便,我们研制了两种成份的复方制剂——银茶胶囊。本文对银茶胶囊进行了系列毒理学试验,现报告如下。
1 实验材料
1.1 药物 银茶胶囊,每粒含银杏叶50%乙醇提取物40 mg,茶叶水提取物40 mg。制备工艺为:将干燥银杏叶提取物和茶叶提取物研细,过五号筛,加入等量预先干燥的淀粉,充分混匀,再按等量递加法将淀粉加至全量,混合制成均匀粉末。送检合格后[4],采用胶囊自动填充机装入2号硬胶囊中,即得(生产批号为950416)。
1.2 动物 昆明种小白鼠,上海医科大学实验动物室提供,雌雄兼用,体重18～22 g。
, 百拇医药
1.3 菌株 鼠伤寒沙门氏菌,美国加州大学Ames氏试验室提供;YA100、TA102、TA97、TA98及S9,由上海医科大学环境卫生教研室制备。
2 方法与结果
2.1 半数致死量测定 选20±2 g重的昆明种小白鼠50只,随机分成5组,每组雌雄各半,分别按1.00,2.15,4.64和10.00 g.kg-1 4个剂量组,将银茶胶囊之内容物混悬于0.5%CMC-Na溶液,同时以0.5%CMC-Na溶液作阴性对照。20 ml.kg-1给小鼠灌胃,灌胃后各剂量组动物均未出现异常。观察饲养1周后,雌性和雄性小白鼠各剂量组均未出现死亡,表明小白鼠的经口LD50大于10 g.kg-1。
, http://www.100md.com
2.2 微核试验[4] 选用体重20±2 g的雌性和雄性昆明小白鼠25只,随机分成5组:3个试验组分别为0.2,1.0,5.0 g.kg-1;阴性对照组用等量蒸馏水;阳性对照组用环磷酰胺50 mg.kg-1灌胃,采用30 h两次给药法。骨髓涂片用甲醇固定,Ciemsa染色,油镜下每只动物观察1 000个嗜多染红细胞,计算含有微核的细胞数,以千分率表示。各组小鼠的微核检出率见表1。经卡方检验,各剂量组及阴性对照组之间无统计学差异,X2=1.31,r=3,P>0.05,阳性对照组与其他各组之间有统计差异,X2=4 751.13,r=1,P<0.05。
表 1 各供试组骨髓细胞物含微核率的比较 组 别
含微核骨
髓细胞
, 百拇医药
不含微核
骨髓细胞
合计
微核发生
率/‰
阴性对照
32
9 968
10 000
3.2
低剂量组
40
9 960
, 百拇医药
10 000
4.0
中剂量组
33
9 967
10 000
3.3
高剂量组
32
9 968
10 000
3.2
阳性对照
, http://www.100md.com
247
9 753
10 000
24.7
总 计
384
49 616
50 000
2.3 小鼠精子畸形试验[5] 选用体重25～35 g的雄性小白鼠进行检测,设3个剂量组,分别为5.0,2.5,1.25 g.kg-1,阳性对照组用环磷酰胺50 mg.kg-1,阴性对照组用等量蒸馏水,连续灌胃5 d。于首次给受试药后的第35天处死小鼠,取副睾作涂片,用甲醇固定,伊红染色,在高倍镜下检查精子的形态有无异常,每只动物观察1 000个精子,小鼠精子畸形检出率见表2。经卡方检验,阴性对照组及各实验组之间的小鼠精子畸形率无差异,X2=3.57,r=3,P>0.05,阳性对照组的精子畸形检出率明显高于其他各组,X2=817.41,r=1,P<0.05。表 2 各组小鼠精子畸形率比较 组 别
, 百拇医药
畸形精子数
正常精子数
合 计
畸形检出
率/‰
阴性对照
73
4 927
5 000
1.46
低剂量组
90
4 910
, http://www.100md.com
5 000
1.80
中剂量组
68
4 932
5 000
1.36
高剂量组
75
4 925
5 000
1.50
阳性对照
, 百拇医药
468
4 532
5 000
9.36
总 计
744
24 226
25 000
2.4 Ames氏试验[6] 取银茶胶囊配制成5种浓度试液(5,10,500 1 000,5 000 μg.ml-1),同时设立了蒸馏水作阴性对照,敌克松、2-氨基芴作阳性对照。实验采用标准平皿掺入法,每皿加入受试液0.1 ml,2 d后用自动菌落计数仪计算每皿的回变菌落数,以检测受试物诱发鼠伤寒沙门氏菌组氨酸营养缺陷型突变株回复突变成野生型的能力。结果显示,样品受试液在各受试剂量下回变菌落数均未大于自发回变数的2倍以上,而阳性对照显示了强烈的诱变作用。3 讨论
, 百拇医药
3.1 本品属中药的复方制剂,其中主药的单方制剂在临床上用于治疗心脑血管疾病,已取得了显著的疗效,无论从药理或理化作用上考虑,其复合制剂均具有良好的协同作用,故对复方制剂进行药理、毒理学的研究具有重要的意义。
3.2 本实验结果显示,银茶胶囊经口给药小白鼠的LD50均大于10 g.kg-1,属基本无毒类;给药5.0 g.kg-1剂量下,未发现对小鼠微核以及精子畸形发生率有不良影响;在5 000 μg.ml-1以下剂量下,未显示致突变作用。
3.3 因本制剂中银杏叶提取物和茶叶提取物的含量均为40 mg/粒,所以实验中各用药量为两个提取物的等同量。
参考文献
1 全国中草药汇编编写组编.全国中草药汇编.第1版.北京:人民卫生出版社,1992:801
, 百拇医药
2 陈万钧,万圣勤.茶多酚药效研究概况.中草药,1993,24(9):493
3 杨义芳,吴国友.银杏叶药理研究概况.现代应用药学,1995,12(5):12;12(6):5
4 刘毓谷主编.卫生毒理学基础.第1版.北京:人民卫生出版社,1986:103
5 黄幸纾,陈星若.环境化学致突变致畸变致癌试验方法.第1版.杭州:浙江科学技术出版社,1985:218
6 Maron DM,Ames BN.Revised methods for the salmonella mutagenicity test.Mutat Res,1983:113
(1997年11月14日收稿), http://www.100md.com
单位：(广州军区广州总医院 广州510010)
关键词：银茶胶囊；半数致死量；微核试验；精子畸形试验；Ames氏试验
中国医院药学杂志981114 摘要 目的:对本院自制制剂银茶胶囊进行毒理学研究。方法:1.小鼠LD50试验;2.微核试验;3.精子致畸试验;4.Ames氏致突变试验。结果:银茶胶囊灌胃,昆明种小鼠的LD50大于10 g.kg-1,给药5.0 g.kg-1剂量下未发现对小鼠骨髓细胞微核和精子畸形发生率有不良影响,在5 mg.ml-1剂量下,未显示致突变作用。结论:银茶胶囊无明显毒性和致畸及致突变作用。
, http://www.100md.com 银茶胶囊的主要成份为银杏黄酮和茶多酚,该两种成份的单一成份的制剂分别用于治疗心脑血管缺血等多种疾病,取得了显著的疗效[1],但作为一个复方制剂的研究尚未见报道。根据中医学的基础理论和现代药理学的研究,该两种成份在药理学上有协同作用[2,3]。为了提高制剂疗效,使用方便,我们研制了两种成份的复方制剂——银茶胶囊。本文对银茶胶囊进行了系列毒理学试验,现报告如下。
1 实验材料
1.1 药物 银茶胶囊,每粒含银杏叶50%乙醇提取物40 mg,茶叶水提取物40 mg。制备工艺为:将干燥银杏叶提取物和茶叶提取物研细,过五号筛,加入等量预先干燥的淀粉,充分混匀,再按等量递加法将淀粉加至全量,混合制成均匀粉末。送检合格后[4],采用胶囊自动填充机装入2号硬胶囊中,即得(生产批号为950416)。
1.2 动物 昆明种小白鼠,上海医科大学实验动物室提供,雌雄兼用,体重18～22 g。
, 百拇医药
1.3 菌株 鼠伤寒沙门氏菌,美国加州大学Ames氏试验室提供;YA100、TA102、TA97、TA98及S9,由上海医科大学环境卫生教研室制备。
2 方法与结果
2.1 半数致死量测定 选20±2 g重的昆明种小白鼠50只,随机分成5组,每组雌雄各半,分别按1.00,2.15,4.64和10.00 g.kg-1 4个剂量组,将银茶胶囊之内容物混悬于0.5%CMC-Na溶液,同时以0.5%CMC-Na溶液作阴性对照。20 ml.kg-1给小鼠灌胃,灌胃后各剂量组动物均未出现异常。观察饲养1周后,雌性和雄性小白鼠各剂量组均未出现死亡,表明小白鼠的经口LD50大于10 g.kg-1。
, http://www.100md.com
2.2 微核试验[4] 选用体重20±2 g的雌性和雄性昆明小白鼠25只,随机分成5组:3个试验组分别为0.2,1.0,5.0 g.kg-1;阴性对照组用等量蒸馏水;阳性对照组用环磷酰胺50 mg.kg-1灌胃,采用30 h两次给药法。骨髓涂片用甲醇固定,Ciemsa染色,油镜下每只动物观察1 000个嗜多染红细胞,计算含有微核的细胞数,以千分率表示。各组小鼠的微核检出率见表1。经卡方检验,各剂量组及阴性对照组之间无统计学差异,X2=1.31,r=3,P>0.05,阳性对照组与其他各组之间有统计差异,X2=4 751.13,r=1,P<0.05。
表 1 各供试组骨髓细胞物含微核率的比较 组 别
含微核骨
髓细胞
, 百拇医药
不含微核
骨髓细胞
合计
微核发生
率/‰
阴性对照
32
9 968
10 000
3.2
低剂量组
40
9 960
, 百拇医药
10 000
4.0
中剂量组
33
9 967
10 000
3.3
高剂量组
32
9 968
10 000
3.2
阳性对照
, http://www.100md.com
247
9 753
10 000
24.7
总 计
384
49 616
50 000
2.3 小鼠精子畸形试验[5] 选用体重25～35 g的雄性小白鼠进行检测,设3个剂量组,分别为5.0,2.5,1.25 g.kg-1,阳性对照组用环磷酰胺50 mg.kg-1,阴性对照组用等量蒸馏水,连续灌胃5 d。于首次给受试药后的第35天处死小鼠,取副睾作涂片,用甲醇固定,伊红染色,在高倍镜下检查精子的形态有无异常,每只动物观察1 000个精子,小鼠精子畸形检出率见表2。经卡方检验,阴性对照组及各实验组之间的小鼠精子畸形率无差异,X2=3.57,r=3,P>0.05,阳性对照组的精子畸形检出率明显高于其他各组,X2=817.41,r=1,P<0.05。表 2 各组小鼠精子畸形率比较 组 别
, 百拇医药
畸形精子数
正常精子数
合 计
畸形检出
率/‰
阴性对照
73
4 927
5 000
1.46
低剂量组
90
4 910
, http://www.100md.com
5 000
1.80
中剂量组
68
4 932
5 000
1.36
高剂量组
75
4 925
5 000
1.50
阳性对照
, 百拇医药
468
4 532
5 000
9.36
总 计
744
24 226
25 000
2.4 Ames氏试验[6] 取银茶胶囊配制成5种浓度试液(5,10,500 1 000,5 000 μg.ml-1),同时设立了蒸馏水作阴性对照,敌克松、2-氨基芴作阳性对照。实验采用标准平皿掺入法,每皿加入受试液0.1 ml,2 d后用自动菌落计数仪计算每皿的回变菌落数,以检测受试物诱发鼠伤寒沙门氏菌组氨酸营养缺陷型突变株回复突变成野生型的能力。结果显示,样品受试液在各受试剂量下回变菌落数均未大于自发回变数的2倍以上,而阳性对照显示了强烈的诱变作用。3 讨论
, 百拇医药
3.1 本品属中药的复方制剂,其中主药的单方制剂在临床上用于治疗心脑血管疾病,已取得了显著的疗效,无论从药理或理化作用上考虑,其复合制剂均具有良好的协同作用,故对复方制剂进行药理、毒理学的研究具有重要的意义。
3.2 本实验结果显示,银茶胶囊经口给药小白鼠的LD50均大于10 g.kg-1,属基本无毒类;给药5.0 g.kg-1剂量下,未发现对小鼠微核以及精子畸形发生率有不良影响;在5 000 μg.ml-1以下剂量下,未显示致突变作用。
3.3 因本制剂中银杏叶提取物和茶叶提取物的含量均为40 mg/粒,所以实验中各用药量为两个提取物的等同量。
参考文献
1 全国中草药汇编编写组编.全国中草药汇编.第1版.北京:人民卫生出版社,1992:801
, 百拇医药
2 陈万钧,万圣勤.茶多酚药效研究概况.中草药,1993,24(9):493
3 杨义芳,吴国友.银杏叶药理研究概况.现代应用药学,1995,12(5):12;12(6):5
4 刘毓谷主编.卫生毒理学基础.第1版.北京:人民卫生出版社,1986:103
5 黄幸纾,陈星若.环境化学致突变致畸变致癌试验方法.第1版.杭州:浙江科学技术出版社,1985:218
6 Maron DM,Ames BN.Revised methods for the salmonella mutagenicity test.Mutat Res,1983:113
(1997年11月14日收稿), http://www.100md.com