喷雾干燥牛血清白蛋白微球中地塞米松磷酸钠和5-氟尿嘧啶的含量测定
作者：吴伟 陆彬
单位：华西医科大学药学院 成都 610041
关键词：地塞米松磷酸钠；5-氟尿嘧啶；牛血清白蛋白；微球；双波长紫外分光光度法
华西药学杂志990420 提要 用等吸收双波长紫外分光光度法测定了喷雾干燥牛血清白蛋白微球中地塞米松磷酸钠和5-氟尿嘧啶的含量。回收率及重现性均好。方法快捷、准确。
DETERMINATION OF DEXAMETHASONE SODIUM PHOSPHATE
AND 5-FLUOROURACIL IN SPRAY-DRIED BOVINE
SERUM ALBUMIN MICROSPHERES
, http://www.100md.com
Wu Wei Lu Bin
(School of Pharmacy, West China University of Medical Sciences Chengdu 610041)
ABSTRACT Drug content of dexamethasone sodium phosphate and 5-fluorouracil in spray-dried bovine serum albumin microspheres was determined by a dual wavelength ultraviolet spectrophotometry with λ256nm and λ286nm as equal absorbance wavelengths. The method is rapid, convenient, accurate and sensitive and shows good recovery and reproducibility.
, 百拇医药
Key Words Dexamethasone sodium phosphate 5-fluorouracil Bovine serum albumin Microsphere
Dual wavelength ultraviolet spectrophotometry
白蛋白(albumin)为天然高分子物质，通过化学交联或加热变性后可以具有缓释作用，且体内可被酶系降解，已被用作药物缓释给药系统的载体材料[1]。测定乳化法制备经化学交联或加热变性的白蛋白微球中药物的含量时，一般采用酸或酶降解后测定，往往降解不完全或降解物对测定有较大干扰[2，3]。利用喷雾干燥法[4]制备未经化学交联或加热变性的白蛋白微球在水中可以溶解的特点，以等吸收双波长紫外分光光度法测定牛血清白蛋白微球中地塞米松磷酸钠和5-氟尿嘧啶的含量，结果良好。
, 百拇医药 1 仪器与试药
UV-250型紫外分光光度计(日本岛津)；电子分析天平(Sartorius，德国)。
地塞米松磷酸钠化学对照品(中国药品生物制品检定所)溶液，配制成400 μg/ml(A)；5-氟尿嘧啶化学对照品(中国药品生物制品检定所)溶液，配制成80 μg/ml(B)；牛血清白蛋白(BSA，上海丽珠东风生物技术有限公司)溶液，配制成160 μg/ml(C)；地塞米松磷酸钠和5-氟尿嘧啶牛血清白蛋白微球用Buchi 190型喷雾干燥器(瑞士)喷雾干燥而成。
2 实验方法与结果
2.1 测定条件的选择
分别量取A、B液各1 ml及C液5 ml置10 ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀后于λ200nm～λ300nm间进行紫外扫描(图1)，BSA在λ256nm及λ286nm处有等吸收，即ABSA-256nm=ABSA-286nm，选作测定波长。混合组分的吸光度
, 百拇医药
A混-256nm=A药物-256nm+ABSA-256nm=E药物-256nmCL+ABSA-256nm，A混-286nm=A药物-286nm+ABSA-286nm=E药物-286nmCL+ABSA-256nm。所以ΔA=A混-256nm-A混-286nm=(E药物-256nm-E药物-286nm)CL，ΔA与药物浓度c成正比，BSA无干扰，故可用来定量。
Fig 1 Ultraviolet spectrum of dexamethasone sodium phosphate(a),5-fluorouracil(b) and bovine serum albumin(c) in deionized water
, 百拇医药
2.2 标准曲线
精密量取A，B液一定体积用去离子水配制成一系列浓度，于λ256nm及λ286nm处测定吸光度，以吸光度差ΔA对浓度c(μg/ml)进行线性回归，回归方程与相关系数为：ΔA=-0.006283+0.01462c,r=0.9996(地塞米松磷酸钠，n=5)；ΔA=-0.01980+0.03917C,r=0.9997(5-氟尿嘧啶，n=5)。
2.3 回收率
精密量取一定量A，B液，加5 ml的C液，置10 ml量瓶中，用去离子水稀释至刻度，摇匀，在λ256nm及λ286nm处测定吸光度，计算差值ΔA，按回归方程计算回收率，结果见表1，2。
Table 1 Determination recovery of dexamethasone sodium phosphate Amount
, 百拇医药
1
2
3
4
5
6
Added(mg)
0.1070
0.1070
0.2140
0.2140
0.3210
0.3210
, http://www.100md.com
Detected(mg)
0.1065
0.1083
0.2144
0.2141
0.3222
0.3198
Recovery(%)
99.53
101.27
100.19
100.05
, http://www.100md.com
100.37
99.63
Mean recovery:(100.16±0.60)%Table 2 Determination recovery of 5-fluorouracil Amount
1
2
3
4
5
6
Added(mg)
0.0829
, 百拇医药
0.0829
0.0829
0.1658
0.1658
0.1658
Detected(mg)
0.0820
0.0822
0.0820
0.1659
0.1659
0.1662
, http://www.100md.com
Recovery(%)
98.86
99.17
98.86
100.07
100.07
100.26
Mean recovery=(99.55±0.65)%
2.4 样品测定
精密称取干燥至恒重的地塞米松磷酸钠和5-氟尿嘧啶BSA微球约90 mg，置25ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，用去离子水稀释50倍后，按“2.3”项下测定(表3，4)。
, 百拇医药
Table 3 Determination results of dexamethasone sodium phosphate in bovine serum albumin microspheres(%) Lot No.
1
2
3
Mean±SD
970903Ⅲ
13.12
12.70
12.77
12.86±0.23
, 百拇医药
970903Ⅵ
20.23
20.49
20.48
20.40±0.15
970903Ⅶ
33.73
34.15
33.99
33.96±0.22
Table 4 Determination results of 5-fluorouracil in bovine
, 百拇医药
serum albumin microspheres(%) Lot No.
1
2
3
Mean±SD
980224
11.12
11.35
11.48
11.32±0.18
980310
6.52
, 百拇医药
6.56
6.76
6.61±0.13
3 讨论
依据喷雾干燥白蛋白微球在水中溶解的性质，选用双波长法，不需分离可以消除BSA的干扰，结果准确。喷雾干燥法制得的白蛋白微球均含有一定量水份，样品须置真空干燥器中放置使水份充分逸出，否则测定会带来负偏差。
为了排除BSA的紫外吸收干扰，曾用乙醇超声提取药物，过滤后测定含量，但提取时间较长，操作不便。也曾先用水溶解微球，再加乙醇使BSA沉淀，除去BSA，但一部分BSA形成较小的胶体，很难用过滤和离心的办法除去。而采用双波长紫外分光光度法，样品用水溶解后直接测定，快捷、方便。该法关键是找到BSA水溶液的等吸收点，比较了高、中、低三种浓度的紫外吸收光谱后，选用λ256nm和λ286nm作为等吸收点，误差较小，并且此二波长处，药物的吸光度有较大差值，灵敏度较高。
, 百拇医药
作者简介：吴伟：药学院1996级药学博士研究生
陆彬：联系人
参考文献
1 Lee TK, Sokolovski TD， Royer GP. Serum albumin beads: an injectable biodegradable system for the sustained release of drugs. Science, 1981, 213∶233
2 Gupta PK, Hung CT， Perrier DG. Albumin microspheres I. Release characteristics of adriamycin. Int J Pharm, 1986, 33∶137
3 Gupta PK, Hung CT. Albumin microspheres I:physico-chemical characteristics. J Microencapsulation, 1989, 6(4)∶427
4 陆彬主编.药物新剂型与新技术.北京：人民卫生出版社，1998.200, 百拇医药
单位：华西医科大学药学院 成都 610041
关键词：地塞米松磷酸钠；5-氟尿嘧啶；牛血清白蛋白；微球；双波长紫外分光光度法
华西药学杂志990420 提要 用等吸收双波长紫外分光光度法测定了喷雾干燥牛血清白蛋白微球中地塞米松磷酸钠和5-氟尿嘧啶的含量。回收率及重现性均好。方法快捷、准确。
DETERMINATION OF DEXAMETHASONE SODIUM PHOSPHATE
AND 5-FLUOROURACIL IN SPRAY-DRIED BOVINE
SERUM ALBUMIN MICROSPHERES
, http://www.100md.com
Wu Wei Lu Bin
(School of Pharmacy, West China University of Medical Sciences Chengdu 610041)
ABSTRACT Drug content of dexamethasone sodium phosphate and 5-fluorouracil in spray-dried bovine serum albumin microspheres was determined by a dual wavelength ultraviolet spectrophotometry with λ256nm and λ286nm as equal absorbance wavelengths. The method is rapid, convenient, accurate and sensitive and shows good recovery and reproducibility.
, 百拇医药
Key Words Dexamethasone sodium phosphate 5-fluorouracil Bovine serum albumin Microsphere
Dual wavelength ultraviolet spectrophotometry
白蛋白(albumin)为天然高分子物质，通过化学交联或加热变性后可以具有缓释作用，且体内可被酶系降解，已被用作药物缓释给药系统的载体材料[1]。测定乳化法制备经化学交联或加热变性的白蛋白微球中药物的含量时，一般采用酸或酶降解后测定，往往降解不完全或降解物对测定有较大干扰[2，3]。利用喷雾干燥法[4]制备未经化学交联或加热变性的白蛋白微球在水中可以溶解的特点，以等吸收双波长紫外分光光度法测定牛血清白蛋白微球中地塞米松磷酸钠和5-氟尿嘧啶的含量，结果良好。
, 百拇医药 1 仪器与试药
UV-250型紫外分光光度计(日本岛津)；电子分析天平(Sartorius，德国)。
地塞米松磷酸钠化学对照品(中国药品生物制品检定所)溶液，配制成400 μg/ml(A)；5-氟尿嘧啶化学对照品(中国药品生物制品检定所)溶液，配制成80 μg/ml(B)；牛血清白蛋白(BSA，上海丽珠东风生物技术有限公司)溶液，配制成160 μg/ml(C)；地塞米松磷酸钠和5-氟尿嘧啶牛血清白蛋白微球用Buchi 190型喷雾干燥器(瑞士)喷雾干燥而成。
2 实验方法与结果
2.1 测定条件的选择
分别量取A、B液各1 ml及C液5 ml置10 ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀后于λ200nm～λ300nm间进行紫外扫描(图1)，BSA在λ256nm及λ286nm处有等吸收，即ABSA-256nm=ABSA-286nm，选作测定波长。混合组分的吸光度
, 百拇医药
A混-256nm=A药物-256nm+ABSA-256nm=E药物-256nmCL+ABSA-256nm，A混-286nm=A药物-286nm+ABSA-286nm=E药物-286nmCL+ABSA-256nm。所以ΔA=A混-256nm-A混-286nm=(E药物-256nm-E药物-286nm)CL，ΔA与药物浓度c成正比，BSA无干扰，故可用来定量。
Fig 1 Ultraviolet spectrum of dexamethasone sodium phosphate(a),5-fluorouracil(b) and bovine serum albumin(c) in deionized water
, 百拇医药
2.2 标准曲线
精密量取A，B液一定体积用去离子水配制成一系列浓度，于λ256nm及λ286nm处测定吸光度，以吸光度差ΔA对浓度c(μg/ml)进行线性回归，回归方程与相关系数为：ΔA=-0.006283+0.01462c,r=0.9996(地塞米松磷酸钠，n=5)；ΔA=-0.01980+0.03917C,r=0.9997(5-氟尿嘧啶，n=5)。
2.3 回收率
精密量取一定量A，B液，加5 ml的C液，置10 ml量瓶中，用去离子水稀释至刻度，摇匀，在λ256nm及λ286nm处测定吸光度，计算差值ΔA，按回归方程计算回收率，结果见表1，2。
Table 1 Determination recovery of dexamethasone sodium phosphate Amount
, 百拇医药
1
2
3
4
5
6
Added(mg)
0.1070
0.1070
0.2140
0.2140
0.3210
0.3210
, http://www.100md.com
Detected(mg)
0.1065
0.1083
0.2144
0.2141
0.3222
0.3198
Recovery(%)
99.53
101.27
100.19
100.05
, http://www.100md.com
100.37
99.63
Mean recovery:(100.16±0.60)%Table 2 Determination recovery of 5-fluorouracil Amount
1
2
3
4
5
6
Added(mg)
0.0829
, 百拇医药
0.0829
0.0829
0.1658
0.1658
0.1658
Detected(mg)
0.0820
0.0822
0.0820
0.1659
0.1659
0.1662
, http://www.100md.com
Recovery(%)
98.86
99.17
98.86
100.07
100.07
100.26
Mean recovery=(99.55±0.65)%
2.4 样品测定
精密称取干燥至恒重的地塞米松磷酸钠和5-氟尿嘧啶BSA微球约90 mg，置25ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，用去离子水稀释50倍后，按“2.3”项下测定(表3，4)。
, 百拇医药
Table 3 Determination results of dexamethasone sodium phosphate in bovine serum albumin microspheres(%) Lot No.
1
2
3
Mean±SD
970903Ⅲ
13.12
12.70
12.77
12.86±0.23
, 百拇医药
970903Ⅵ
20.23
20.49
20.48
20.40±0.15
970903Ⅶ
33.73
34.15
33.99
33.96±0.22
Table 4 Determination results of 5-fluorouracil in bovine
, 百拇医药
serum albumin microspheres(%) Lot No.
1
2
3
Mean±SD
980224
11.12
11.35
11.48
11.32±0.18
980310
6.52
, 百拇医药
6.56
6.76
6.61±0.13
3 讨论
依据喷雾干燥白蛋白微球在水中溶解的性质，选用双波长法，不需分离可以消除BSA的干扰，结果准确。喷雾干燥法制得的白蛋白微球均含有一定量水份，样品须置真空干燥器中放置使水份充分逸出，否则测定会带来负偏差。
为了排除BSA的紫外吸收干扰，曾用乙醇超声提取药物，过滤后测定含量，但提取时间较长，操作不便。也曾先用水溶解微球，再加乙醇使BSA沉淀，除去BSA，但一部分BSA形成较小的胶体，很难用过滤和离心的办法除去。而采用双波长紫外分光光度法，样品用水溶解后直接测定，快捷、方便。该法关键是找到BSA水溶液的等吸收点，比较了高、中、低三种浓度的紫外吸收光谱后，选用λ256nm和λ286nm作为等吸收点，误差较小，并且此二波长处，药物的吸光度有较大差值，灵敏度较高。
, 百拇医药
作者简介：吴伟：药学院1996级药学博士研究生
陆彬：联系人
参考文献
1 Lee TK, Sokolovski TD， Royer GP. Serum albumin beads: an injectable biodegradable system for the sustained release of drugs. Science, 1981, 213∶233
2 Gupta PK, Hung CT， Perrier DG. Albumin microspheres I. Release characteristics of adriamycin. Int J Pharm, 1986, 33∶137
3 Gupta PK, Hung CT. Albumin microspheres I:physico-chemical characteristics. J Microencapsulation, 1989, 6(4)∶427
4 陆彬主编.药物新剂型与新技术.北京：人民卫生出版社，1998.200, 百拇医药