国产辛伐他汀片药代动力学及生物利用度研究
作者：靖百谦 翁志忠 冯梦林 薛玉英 周文
单位：山东医科大学附属医院药剂科 济南 250012
关键词：辛伐他汀；辛伐他汀酸；高效液相色谱；生物利用度
华西药学杂志990405 提要 12名健康志愿者交叉口服单剂量国产辛伐他汀片和舒降之片剂40 mg，应用HPLC法测定其经时血药浓度。实验数据经3P97程序处理，两制剂口服吸收呈二室模型。辛伐他汀片和舒降之各相关药代动力学参数：Cmax为(105.97±25.98) μg/L和(110.32±27.67) μg/L，Tmax为(1.90±0.37) h和(1.99±0.35) h，AUC为(970.06±117.74)(μg/L*h)和(976.81±150.13)(μg/L.h)，根据辛伐他汀片和舒降之的代谢产物辛伐他汀酸(SVA)血药浓度时间曲线下面积AUC，计算辛伐他汀片相对生物利用度为(98.62±12.01)%。经方差分析及双单侧T检验和(1-2α)置信区间分析，显示两制剂AUC值在制剂间、周期间和个体间均无显著性差异，提示辛伐他汀片和舒降之片具有生物等效性。
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PHARMACOKINETICS AND RELATIVE BIOAVAILABILITY OF
DOMESTIC SIMVASTATIN TABLET IN
HEALTHY VOLUNTEERS
Jing Baiqian Weng Zhizhong Feng Menglin Xue Yuying Zhou Wen
(Department of Pharmacy,Affiliated Hospital, Shandong University of Medical Sciences Jinan 250012)
ABSTRACT A single oral dose of domestic simvastatin tablet or imported simvastatin tablet 40 mg was given to 12 healthy male volunteers in a randomized cross over clinical study. The serum concentrations of simvastatin acid were determined by HPLC.The pharmacokinetics parameters were analyzed by 3P97 software. It was found that the serum concentration-time curve fitted to two-compartment model, and the main pharmacokinetics parameters of domestic and imported tablets were as follows Cmax=(105.97±25.98)μg/L and (110.32±27.67)μg/L, Tmax=(1.90±0.37) h and (1.99±0.35) h, AUC=(970.06±117.74) μg/(L.h) and (976.81±150.13) μg/(L.h). The relative bioavailability of domestic was (98.62±12.01)%. These results suggested that there were no significant difference between the domestic and imported tablets. They are bioequivalent.
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Key Words Simvastatin HPLC Bioavailability Bioequivalent Pharmacokinetics
辛伐他汀(Simvastatin, SV)是3-羟基-3-甲基戊二酰COA还原酶(HMG-COA)抑制剂，为不活泼内酯药物，口服吸收到达肝脏后，大部分转化为活性代谢物，为其相应的β-羟基酸形式，即辛伐他汀酸(SVA)。辛伐他汀能明显降低总胆固醇及LDL胆固醇的量；减少甘油三酯及提高高密度脂蛋白胆固醇的含量[1～3]。临床上，辛伐他汀对治疗杂合家族史高血脂症及伴有肾病综合征高血脂症有明显疗效。
因为SV是一种不具药物活性的药物前体，所以，测定血清中活性代谢产物辛伐他汀β-羟基酸(SVA)的浓度以及它与时间的函数关系，计算有关药代动力学参数，求算相对生物利用度，更有实际意义[4～6，8]。故实验数据均依据于SVA经时血药浓度。单剂量口服给药，用HPLC法测定供试品辛伐他汀片和对照品舒降之中SV和SVA的经时血药浓度，经3P97程序计算相关药动学参数。根据SVA血药浓度时间曲线下面积求出辛伐他汀片相对生物利用度，同时对辛伐他汀片和舒降之的生物等效性进行了分析。
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1 实验部分
1.1 药品与试剂
辛伐他汀片(供试品，青岛海洋大学华海药厂，5 mg/片，批号981101)；舒降之(Zocor，对照品，杭州默沙东制药有限公司，5 mg/片，批号980601)；辛伐他汀及辛伐他汀酸对照品，内标洛伐他汀(青岛华海药厂)。乙腈(色谱纯，天津四友生物医学技术有限公司)；乙酸乙酯(分析纯，杭州化工试剂厂)；乙酸(上海试剂一厂)；双蒸去离子水(自制)。血清(血库)。
1.2 仪器
美国Watersx-3000型高效液相色谱仪，Waters-481型紫外检测器，Waters515型泵，Waters-745型数据处理机；YKH-Ⅱ型旋涡振荡器(江西医疗器械厂)；LXJ-Ⅱ型离心机(上海医用分析仪器厂)。
1.3 方法与结果
, 百拇医药
1.3.1 受试者 12名健康男性，年龄(19.00±0.74)岁，(18～20)岁；平均体重(62.29±2.82) kg，(59～67) kg；平均身高(1.71±2.95) m(1.68-1.78) m。经签署志愿受试协议书，成为本试验健康志愿者。试验前，进行血、尿常规，肝、肾功能，心电图检查及全身生化检查，合格后入选。志愿者本人及家族病史调查，受试者无药物过敏史及变态反应病史，实验前两周内未服用任何药物，试验中禁服其它药物。受试期间禁烟、酒、茶，进统一标准餐，并在指定范围内活动。
1.3.2 试验方法 采用随机分组交叉试验设计方法。受试者随机分为2组，试验前一日晚8 h后禁食，次晨8∶00供试品组与对照品组分别以150 ml温开水口服40 mg辛伐他汀片和舒降之片，2 h后，进统一低脂肪低蛋白标准餐。服药前，取肘静脉血3 ml作为空白对照。服药后，分别于0.5、1.0、1.5、2.0、3.0、4.0、6.0、8.0、12.0，24.0 h，取肘静脉血3 ml。血标本置离心管中，37℃水浴保温孵化1 h，离心分离血清，-20℃冷冻保存至测定。间隔2周后，交叉给药，重复上述试验。
, 百拇医药
1.3.3 血药浓度测定方法 色谱柱Kromasil C18(250 mm×4.6 mm 5μm)；流动相乙腈∶水∶醋酸(70∶30∶0.1，v/v)；流速0.7 ml/min；检测波长238 nm；室温测定。辛伐他汀酸、洛伐他汀、辛伐他汀保留时间分别为9.14、11.56、14.85 min。
血清样本处理 取血清样品1 ml，置5 ml离心管中，依次加入内标液20 μl(洛伐他汀1 μg/L)、乙酸乙酯4 ml，旋涡振荡离心(3 min,3 000 r/min×5 min)。40℃水浴氮气吹干，100 μl流动相溶解残渣，10 μl进样测定。
血清标准曲线 取空白血清0.9 ml，分别加入适量的辛伐他汀酸与洛伐他汀混合标准液，使血清中辛伐他汀酸浓度为25、50、100、250、500、1 000 μg/L。按照血清样品处理方法，提取测定，分析。以辛伐他汀酸与内标洛伐他汀面积比对浓度进行线性回归，标准曲线方程为Y辛伐他汀酸=1.0182X-0.0061，r=0.9997。结果，血清中辛伐他汀酸浓度在50～1 000 μg/L范围内，浓度与面积比有良好线性关系。
, 百拇医药
回收率及精密度试验 取空白血清0.9 ml，按标准曲线制备方法配制50、100、200 μg/L高、中、低三种浓度，辛伐他汀酸血清样品5份，按样品处理，1日内测定。分别于不同日，配制同样血清样品，连续测定，结果见表1、表2。
Table 1 Recovery of SVA in human serum (n=5) Concentration(μg/l-1)
Recovery (%)
RSD(%)
25
104.90±2.03
1.94
100
, 百拇医药
102.09±1.88
1.84
200
99.36±2.98
3.00
Table 2 Precision of SVA in human serum (n=5) Concentration(μg/l)
RSD(%)日内
RSD(%)日间
25
2.56
2.49
, 百拇医药
100
3.59
2.40
200
3.72
2.01
数据处理 采用中国数学药理学分会编制3P97程序处理实验数据，对供试品与对照品的主要药代动力学参数进行统计学处理(配对t检验)，以对照品药-时曲线下面积为标准，计算供试品的相对生物利用度，利用方差分析和双单侧t检验对两种制剂生物等效性进行评价。
药代动力学 12名健康志愿者，随机交叉，单次口服40 mg辛伐他汀片和舒降之后，其平均血药浓度-时间数据经3P97拟合，符合二室模型。经配对t检验，两组参数间差别无统计学意义(P>0.05)。结果表明，国产和进口制剂平均最大血浓Cmax分别为(105.97±25.98)μg/L和(110.32±27.67)μg/L，平均达峰时间Tmax分别为1.90±0.37 h和1.99±0.35 h，平均药-时曲线下面积AUC分别为(970.06±117.74)和(976.81±150.13)μg/(L.h)。
, 百拇医药
辛伐他汀片相对生物利用度 根据以上药代动力学参数，求出辛伐他汀对舒降之相对生物利用度为：
统计数据 对供试品辛伐他汀片和对照品舒降之的研究证明，辛伐他汀片相对舒降之生物利用度为(98.62±12.01)%。经双单侧t检验、方差分析、(1-2α)置信区间分析，两制剂AUC值在制剂间、周期间、个体间均无显著性差异。提示辛伐他汀片和舒降之具有生物等效性，为生物等效制剂。
2 讨论
2.1 据文献[7]，采用乙腈或三氯醋酸沉淀蛋白，上清液直接进样，但血清杂质多，色谱图中杂峰大，后用乙醚或正己烷提取血清中药物，但回收率低，检测灵敏度低。经改进，采用乙酸乙酯提取，可沉淀蛋白，同时分离杂质，且提取较完全(提取回收率在80%以上)，分离效果较好，灵敏度高。用内标法测定，减少了外标法[7]测定中的操作误差。实验选用洛伐他汀为内标(洛伐他汀与辛伐他汀为同系物，色谱行为相似)。据文献[7]中的色谱分析条件选择流动相，但分离效果较差，流动相为乙腈∶水∶醋酸(70∶30∶0.1，v/v)，辛伐他汀与洛伐他汀分离程度好。变异系数均小于5%，方法重现性好，误差小，可靠性好。
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2.2 据文献[8]比较国产辛伐他汀片与进口舒降之片剂进入体内后血中辛伐他汀酸的药代动力学参数。发现，两制剂在人体内吸收、分布、消除都比较接近。国产辛伐他汀片的相对生物利用度为(106.36±12.94)%，经方差分析和双单侧T检验，两种制剂生物等效，国产制剂在临床应用方面与进口片剂相当。
参考文献
1 Germershausen JI, Hunt VM, Bostedor RG, et al.Tissue selectivity of the cholesterol-lowering agents lovastatin, simvastatin and pravastatin in rats in vivo. Biochem Biophys Res Comm, 1989, 158∶667
2 Tsujita Y, Kuroda M, Shimada Y, et al.CS-514, a competitive inhibitor of 3-hydroxy-3-mefhylglutaryl coenzyme Areductase:tissue-selective inhibition of sterol sythesis and hypolipidemia effect on Varions animal species. Biochimica et Biophysica Acta, 1986, 877∶50
, 百拇医药
3 Mosley ST, Kalinowski SS, Schafet BT, et al. Tissue-selective acute effects of inhibitors of 3-hydroxy-3-methylglutaryl coenzyme a reductase on cholesterol biosynthesis in lens. J Lipid Res, 1989, 30∶1411
4 Stubbs RJ, Schwartz MS, gerson RJ, et al. Comparison of plasma profile lovastatin (mevinolin). simvastatin(epistatin) and prarastin(eptastatin)in the dog. Drug Invest, 1990, 2∶18
5 Schwartz MS, Maglietto BK, Stubbs RJ. Anautomated assay for plasma HMG-COA reductase inhibitas AAPS abstrad 4. AAPS Toint Eastern Regional Meeting. Atlantic City, NJ, 1988
6 Albe AW, Chen J, Kuron G, et al. A highly potent competitive inhibitor of HMG-COA reductase and a cholesterol-lowreing agent. Proc Natl Acad Sci USA, 1980, 77∶3957
7 Carlucci. Pharmaceutical and Biomedical Anaglysis. 1992, 10(9)∶693
8 李家泰.临床药理学.第2版.北京：人民卫生出版社.1998.158, http://www.100md.com
单位：山东医科大学附属医院药剂科 济南 250012
关键词：辛伐他汀；辛伐他汀酸；高效液相色谱；生物利用度
华西药学杂志990405 提要 12名健康志愿者交叉口服单剂量国产辛伐他汀片和舒降之片剂40 mg，应用HPLC法测定其经时血药浓度。实验数据经3P97程序处理，两制剂口服吸收呈二室模型。辛伐他汀片和舒降之各相关药代动力学参数：Cmax为(105.97±25.98) μg/L和(110.32±27.67) μg/L，Tmax为(1.90±0.37) h和(1.99±0.35) h，AUC为(970.06±117.74)(μg/L*h)和(976.81±150.13)(μg/L.h)，根据辛伐他汀片和舒降之的代谢产物辛伐他汀酸(SVA)血药浓度时间曲线下面积AUC，计算辛伐他汀片相对生物利用度为(98.62±12.01)%。经方差分析及双单侧T检验和(1-2α)置信区间分析，显示两制剂AUC值在制剂间、周期间和个体间均无显著性差异，提示辛伐他汀片和舒降之片具有生物等效性。
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PHARMACOKINETICS AND RELATIVE BIOAVAILABILITY OF
DOMESTIC SIMVASTATIN TABLET IN
HEALTHY VOLUNTEERS
Jing Baiqian Weng Zhizhong Feng Menglin Xue Yuying Zhou Wen
(Department of Pharmacy,Affiliated Hospital, Shandong University of Medical Sciences Jinan 250012)
ABSTRACT A single oral dose of domestic simvastatin tablet or imported simvastatin tablet 40 mg was given to 12 healthy male volunteers in a randomized cross over clinical study. The serum concentrations of simvastatin acid were determined by HPLC.The pharmacokinetics parameters were analyzed by 3P97 software. It was found that the serum concentration-time curve fitted to two-compartment model, and the main pharmacokinetics parameters of domestic and imported tablets were as follows Cmax=(105.97±25.98)μg/L and (110.32±27.67)μg/L, Tmax=(1.90±0.37) h and (1.99±0.35) h, AUC=(970.06±117.74) μg/(L.h) and (976.81±150.13) μg/(L.h). The relative bioavailability of domestic was (98.62±12.01)%. These results suggested that there were no significant difference between the domestic and imported tablets. They are bioequivalent.
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Key Words Simvastatin HPLC Bioavailability Bioequivalent Pharmacokinetics
辛伐他汀(Simvastatin, SV)是3-羟基-3-甲基戊二酰COA还原酶(HMG-COA)抑制剂，为不活泼内酯药物，口服吸收到达肝脏后，大部分转化为活性代谢物，为其相应的β-羟基酸形式，即辛伐他汀酸(SVA)。辛伐他汀能明显降低总胆固醇及LDL胆固醇的量；减少甘油三酯及提高高密度脂蛋白胆固醇的含量[1～3]。临床上，辛伐他汀对治疗杂合家族史高血脂症及伴有肾病综合征高血脂症有明显疗效。
因为SV是一种不具药物活性的药物前体，所以，测定血清中活性代谢产物辛伐他汀β-羟基酸(SVA)的浓度以及它与时间的函数关系，计算有关药代动力学参数，求算相对生物利用度，更有实际意义[4～6，8]。故实验数据均依据于SVA经时血药浓度。单剂量口服给药，用HPLC法测定供试品辛伐他汀片和对照品舒降之中SV和SVA的经时血药浓度，经3P97程序计算相关药动学参数。根据SVA血药浓度时间曲线下面积求出辛伐他汀片相对生物利用度，同时对辛伐他汀片和舒降之的生物等效性进行了分析。
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1 实验部分
1.1 药品与试剂
辛伐他汀片(供试品，青岛海洋大学华海药厂，5 mg/片，批号981101)；舒降之(Zocor，对照品，杭州默沙东制药有限公司，5 mg/片，批号980601)；辛伐他汀及辛伐他汀酸对照品，内标洛伐他汀(青岛华海药厂)。乙腈(色谱纯，天津四友生物医学技术有限公司)；乙酸乙酯(分析纯，杭州化工试剂厂)；乙酸(上海试剂一厂)；双蒸去离子水(自制)。血清(血库)。
1.2 仪器
美国Watersx-3000型高效液相色谱仪，Waters-481型紫外检测器，Waters515型泵，Waters-745型数据处理机；YKH-Ⅱ型旋涡振荡器(江西医疗器械厂)；LXJ-Ⅱ型离心机(上海医用分析仪器厂)。
1.3 方法与结果
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1.3.1 受试者 12名健康男性，年龄(19.00±0.74)岁，(18～20)岁；平均体重(62.29±2.82) kg，(59～67) kg；平均身高(1.71±2.95) m(1.68-1.78) m。经签署志愿受试协议书，成为本试验健康志愿者。试验前，进行血、尿常规，肝、肾功能，心电图检查及全身生化检查，合格后入选。志愿者本人及家族病史调查，受试者无药物过敏史及变态反应病史，实验前两周内未服用任何药物，试验中禁服其它药物。受试期间禁烟、酒、茶，进统一标准餐，并在指定范围内活动。
1.3.2 试验方法 采用随机分组交叉试验设计方法。受试者随机分为2组，试验前一日晚8 h后禁食，次晨8∶00供试品组与对照品组分别以150 ml温开水口服40 mg辛伐他汀片和舒降之片，2 h后，进统一低脂肪低蛋白标准餐。服药前，取肘静脉血3 ml作为空白对照。服药后，分别于0.5、1.0、1.5、2.0、3.0、4.0、6.0、8.0、12.0，24.0 h，取肘静脉血3 ml。血标本置离心管中，37℃水浴保温孵化1 h，离心分离血清，-20℃冷冻保存至测定。间隔2周后，交叉给药，重复上述试验。
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1.3.3 血药浓度测定方法 色谱柱Kromasil C18(250 mm×4.6 mm 5μm)；流动相乙腈∶水∶醋酸(70∶30∶0.1，v/v)；流速0.7 ml/min；检测波长238 nm；室温测定。辛伐他汀酸、洛伐他汀、辛伐他汀保留时间分别为9.14、11.56、14.85 min。
血清样本处理 取血清样品1 ml，置5 ml离心管中，依次加入内标液20 μl(洛伐他汀1 μg/L)、乙酸乙酯4 ml，旋涡振荡离心(3 min,3 000 r/min×5 min)。40℃水浴氮气吹干，100 μl流动相溶解残渣，10 μl进样测定。
血清标准曲线 取空白血清0.9 ml，分别加入适量的辛伐他汀酸与洛伐他汀混合标准液，使血清中辛伐他汀酸浓度为25、50、100、250、500、1 000 μg/L。按照血清样品处理方法，提取测定，分析。以辛伐他汀酸与内标洛伐他汀面积比对浓度进行线性回归，标准曲线方程为Y辛伐他汀酸=1.0182X-0.0061，r=0.9997。结果，血清中辛伐他汀酸浓度在50～1 000 μg/L范围内，浓度与面积比有良好线性关系。
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回收率及精密度试验 取空白血清0.9 ml，按标准曲线制备方法配制50、100、200 μg/L高、中、低三种浓度，辛伐他汀酸血清样品5份，按样品处理，1日内测定。分别于不同日，配制同样血清样品，连续测定，结果见表1、表2。
Table 1 Recovery of SVA in human serum (n=5) Concentration(μg/l-1)
Recovery (%)
RSD(%)
25
104.90±2.03
1.94
100
, 百拇医药
102.09±1.88
1.84
200
99.36±2.98
3.00
Table 2 Precision of SVA in human serum (n=5) Concentration(μg/l)
RSD(%)日内
RSD(%)日间
25
2.56
2.49
, 百拇医药
100
3.59
2.40
200
3.72
2.01
数据处理 采用中国数学药理学分会编制3P97程序处理实验数据，对供试品与对照品的主要药代动力学参数进行统计学处理(配对t检验)，以对照品药-时曲线下面积为标准，计算供试品的相对生物利用度，利用方差分析和双单侧t检验对两种制剂生物等效性进行评价。
药代动力学 12名健康志愿者，随机交叉，单次口服40 mg辛伐他汀片和舒降之后，其平均血药浓度-时间数据经3P97拟合，符合二室模型。经配对t检验，两组参数间差别无统计学意义(P>0.05)。结果表明，国产和进口制剂平均最大血浓Cmax分别为(105.97±25.98)μg/L和(110.32±27.67)μg/L，平均达峰时间Tmax分别为1.90±0.37 h和1.99±0.35 h，平均药-时曲线下面积AUC分别为(970.06±117.74)和(976.81±150.13)μg/(L.h)。
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辛伐他汀片相对生物利用度 根据以上药代动力学参数，求出辛伐他汀对舒降之相对生物利用度为：
统计数据 对供试品辛伐他汀片和对照品舒降之的研究证明，辛伐他汀片相对舒降之生物利用度为(98.62±12.01)%。经双单侧t检验、方差分析、(1-2α)置信区间分析，两制剂AUC值在制剂间、周期间、个体间均无显著性差异。提示辛伐他汀片和舒降之具有生物等效性，为生物等效制剂。
2 讨论
2.1 据文献[7]，采用乙腈或三氯醋酸沉淀蛋白，上清液直接进样，但血清杂质多，色谱图中杂峰大，后用乙醚或正己烷提取血清中药物，但回收率低，检测灵敏度低。经改进，采用乙酸乙酯提取，可沉淀蛋白，同时分离杂质，且提取较完全(提取回收率在80%以上)，分离效果较好，灵敏度高。用内标法测定，减少了外标法[7]测定中的操作误差。实验选用洛伐他汀为内标(洛伐他汀与辛伐他汀为同系物，色谱行为相似)。据文献[7]中的色谱分析条件选择流动相，但分离效果较差，流动相为乙腈∶水∶醋酸(70∶30∶0.1，v/v)，辛伐他汀与洛伐他汀分离程度好。变异系数均小于5%，方法重现性好，误差小，可靠性好。
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2.2 据文献[8]比较国产辛伐他汀片与进口舒降之片剂进入体内后血中辛伐他汀酸的药代动力学参数。发现，两制剂在人体内吸收、分布、消除都比较接近。国产辛伐他汀片的相对生物利用度为(106.36±12.94)%，经方差分析和双单侧T检验，两种制剂生物等效，国产制剂在临床应用方面与进口片剂相当。
参考文献
1 Germershausen JI, Hunt VM, Bostedor RG, et al.Tissue selectivity of the cholesterol-lowering agents lovastatin, simvastatin and pravastatin in rats in vivo. Biochem Biophys Res Comm, 1989, 158∶667
2 Tsujita Y, Kuroda M, Shimada Y, et al.CS-514, a competitive inhibitor of 3-hydroxy-3-mefhylglutaryl coenzyme Areductase:tissue-selective inhibition of sterol sythesis and hypolipidemia effect on Varions animal species. Biochimica et Biophysica Acta, 1986, 877∶50
, 百拇医药
3 Mosley ST, Kalinowski SS, Schafet BT, et al. Tissue-selective acute effects of inhibitors of 3-hydroxy-3-methylglutaryl coenzyme a reductase on cholesterol biosynthesis in lens. J Lipid Res, 1989, 30∶1411
4 Stubbs RJ, Schwartz MS, gerson RJ, et al. Comparison of plasma profile lovastatin (mevinolin). simvastatin(epistatin) and prarastin(eptastatin)in the dog. Drug Invest, 1990, 2∶18
5 Schwartz MS, Maglietto BK, Stubbs RJ. Anautomated assay for plasma HMG-COA reductase inhibitas AAPS abstrad 4. AAPS Toint Eastern Regional Meeting. Atlantic City, NJ, 1988
6 Albe AW, Chen J, Kuron G, et al. A highly potent competitive inhibitor of HMG-COA reductase and a cholesterol-lowreing agent. Proc Natl Acad Sci USA, 1980, 77∶3957
7 Carlucci. Pharmaceutical and Biomedical Anaglysis. 1992, 10(9)∶693
8 李家泰.临床药理学.第2版.北京：人民卫生出版社.1998.158, http://www.100md.com