益宫散结口服液质量标准的研究
作者：罗 毅 张 洪 马俊玲 张先洲 徐绍新*
单位：湖北医科大学附属一医院药学部 武汉 430060
关键词：益宫散结口服液；薄层色谱；芍药苷；薄层扫描
益宫散结口服液质量标准的研究 提要 对益宫散结口服液中的生物碱类活性成分进行了检识，对主要药味丹参、赤芍、川芎和当归进行了薄层鉴别，并采用薄层扫描法测定了芍药苷的含量。方法简便、结果准确、重复性好，可用于控制产品质量。
STUDIES ON THE QUALITY CRITERIONS FOR
YIGONG SHANJIE ORAL LIQUID
Luo Yi Zhang Hong Ma Junling Zhang Xianzhou Xu Shaoxin
, 百拇医药
(Department of Pharmacy, the First Affiliated Hospital of Hubei Medical College Wuhan 430060)
ABSTRACT The active component alkaloid in Yigong Shanjie oral liquid was detected by chemical reaction. The main ingredients Radix Salviae Miltorerhizae, Radix Paeoniae Rubra, Rhizoma Chuanxiong and Radix Angelicae Sinensis in it were identified by TLC. The content of paeoniflorin was determined by TLC-scanning. The methods were simple, accurate and reproducible.They can be used to control the quality of this preparation.
, 百拇医药
Key Words Yigong Shanjie oral liquid TLC Paeoniflorin TLC-scanning
益宫散结口服液是由丹参、赤芍、川芎、当归、益母草、桃仁、红花、炙甲片等12味中药制成，具有活血化淤、消膜散结之功效，尤对子宫内膜异常增生症有独特疗效。为控制产品质量，保证临床疗效的稳定，特建立了该制剂的定性、定量检测方法。
1 实验部分
1.1 仪器与试药
紫外分析仪(上海分析仪器厂)；CS-9000型薄层扫描仪(日本岛津)；微量定容毛细管(Drumond USA)；PBQ-Ⅱ型薄层自动铺板器(重庆南岸新力实验仪器厂)。硅胶G(青岛海洋化工厂)；丹参、赤芍、当归、川芎对照药材和丹参酮ⅡA、芍药苷、阿魏酸对照品(中国药品生物制品检定所)；益宫散结口服液(自制)；所用试剂均为分析纯。
, http://www.100md.com
1.2 鉴别
1.2.1 生物碱的鉴别 取益宫散结口服液30 ml，加入1%氨水调pH值至9，用乙醚萃取3次(15、10、10 ml)，合并萃取液，挥干，残渣用1%盐酸6 ml溶解，分3份，各加碘化铋钾、碘化汞钾、硅钨酸试液1～2滴，则分别出现橙红色、黄白色、灰白色的沉淀。
1.2.2 丹参的TLC鉴别 取益宫散结口服液20 ml，用乙醚萃取(15 ml×4)，合并萃取液，挥干，残渣加醋酸乙酯1 ml使溶解，作为供试品溶液。同法制备缺丹参的阴性对照液。另取丹参对照药材按益宫散结口服液制法制成口服液，再同上法制备对照药材溶液。再取丹参酮ⅡA对照品，加醋酸乙酯制成每1 ml含0.5 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法，吸取上述4种溶液各3 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯-醋酸乙酯(19∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯(365 nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱和对照药材色谱相应位置上，显相同颜色的荧光斑点(图1)。
, 百拇医药
Fig 1 TLC of Danshen
1 Reference of Tanshinone ⅡA 2 Control of Danshen
3 Negative sample of Danshen 4 Sample
1.2.3 赤芍的TLC鉴别 取该口服液10 ml，水饱和正丁醇萃取(10 ml×4)，合并萃取液，蒸干，残渣加5 ml乙醇溶解，作为供试品溶液。同法制备缺赤芍的阴性对照液。另取赤芍对照药材按该口服液制法制成口服液，同上法制得对照药材溶液。再取芍药苷对照品，加乙醇制成每ml含1 g的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法，吸取上述溶液各3 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇(7∶2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以新鲜配制的5%香草醛硫酸试液，在105℃下烘3 min显色。供试品色谱中，在与对照品色谱和对照药材色谱相应位置上，显相同颜色的斑点(图2)。
, 百拇医药
Fig 2 TLC of Chishao
1 Reference of Paeoniflorin 2 Control of Chishao
3 Nega-tive sample of Chishao 4 Sample
1.2.4 川芎和当归的TLC鉴别 取该口服液10 ml，乙醚萃取(15 ml×3)，合并萃取液，挥干，残渣用2 ml甲醇溶解，作为供试品溶液。同法制备缺川芎及当归的阴性对照液。另取川芎、当归对照药材分别制成口服液，再同上法制备川芎对照药材溶液和当归对照药材溶液。再取阿魏酸对照品，加甲醇制成每ml含0.5 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法，吸取上述溶液各3 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-醋酸乙酯-甲酸(5∶4∶0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯(365 nm)下观察。供试品色谱中，在与对照品色谱和对照药材色谱相应位置上，显相同颜色的荧光斑点(图3)。
, http://www.100md.com
Fig 3 TLC of Chuanxiong and Danggui
1 Reference of ferulic acid 2 Control of Chuanxiong
3 Control of Danggui 4 Negative sample of Chuanxiong and Danggui 5 Sample
1.3 芍药苷的含量测定
1.3.1 薄层层析条件 硅胶G-0.5% CMC-Na薄层板，厚0.5 mm，用薄层自动铺板器铺制，105℃活化1 h；氯仿-甲醇(7∶2)展开，展距12 cm；显色剂用5%香草醛硫酸试液，105℃烘3 min。
1.3.2 薄层扫描条件 扫描方式为反射式双波长锯齿扫描；检测波长λS=590 nm，λR=690 nm；线性参数SX=3；狭缝0.4 mm×0.4 mm；灵敏度中。
, http://www.100md.com
1.3.3 标准曲线的绘制 取芍药苷对照品适量，精密称定，加乙醇溶解定容，制成1.02 mg/ml的对照品溶液。精密吸取该溶液1、2、3、4、5 μl分别点于同一薄层板上，展开、显色、扫描测定。以点样量为横坐标，斑点峰面积积分值为纵坐标，结果表明芍药苷在1.02～5.10 μg范围内有良好的线性关系。回归方程为：
Y=-2139.7+28263.2X r=0.9980。
1.3.4 稳定性试验 吸取芍药苷对照品溶液3 μl点于薄层板上，展开，显色，每隔30 min扫描测定1次，共测10次，结果3 h内峰面积积分值
±s=50478.81±1773.59,RSD=2.85%，表明斑点在3 h以内稳定。
, http://www.100md.com 1.3.5 精密度试验 吸取芍药苷对照品溶液，于同一薄层板上点5点，每点3 μl，展开，显色，扫描测定，得峰面积积分值±s=51816.896±1151.43,RSD=2.22%；再对其中一点连续平行扫描测定5次，得±s=53741.884±126.77,RSD=0.23%。表明板内重复性和仪器精密度良好。
1.3.6 回收率试验 精密吸取缺赤芍的空白口服液10 ml，准确加入一定量芍药苷对照品，按样品测定法测定，结果见表1。
Table 1 The results of recovery test (n=3)
, http://www.100md.com
No.
Added
(mg)
Measured
(mg)
Recovery
(%)
Average
recovery
(%)
RSD
(%)
1
, 百拇医药
4.08
3.95
96.81
2
4.59
4.56
99.35
3
5.10
4.96
97.25
97.75
1.11
, 百拇医药
4
5.61
5.44
96.97
5
6.12
6.02
98.37
1.3.7 供试品测定 精密吸取品10 ml，用水饱和正丁醇萃取(15 ml×4)，合并萃取液，加无水硫酸钠适量，放置过夜，滤过，并以正丁醇洗涤，滤液与洗液合并，蒸干，残渣加乙醇溶解并定容至5 ml，作为供试品溶液。吸取供试品溶液3 μl，对照品溶液2、4 μl，分别交叉点于同一薄层板上，展开，显色，扫描测定(表2)。 Table 2 Determination results of samples
, http://www.100md.com
Batch
No.
Content of paeoniflorin(mg/ml)
±s
RSD
(%)
1
2
3
970924
0.531
, 百拇医药
0.518
0.520
0.523±0.007
1.34
980312
0.492
0.510
0.498
0.500±0.009
1.83
980505
0.507
, 百拇医药 0.498
0.511
0.505±0.007
1.32
2 讨论
2.1 处方中益母草主要含生物碱类活性成分，试验采用三种生物碱沉淀试剂进行检识，均呈阳性反应，证明了生物碱的存在。
2.2 对丹参、赤芍、川芎和当归进行薄层鉴别时，根据欲测成分的性质而选用相应的提取方法和展开系统，使得薄层斑点分离清晰，阴性对照无干扰，且重现性较好。
2.3 芍药苷的含量测定方法已报道的有高效液相色谱法[1]、薄层扫描法[2]、紫外分光光度法[3]、正交函数分光光度法[4]等。本文以薄层扫描法测定芍药苷的含量作为评价制剂质量的一个指标。样品提取时，根据芍药苷具有较大极性而选用水饱和正丁醇作溶剂；样品经萃取4次后，用薄层层析法已不能检出芍药苷，表明已提取完全。薄层层析时，经筛选确定以氯仿-甲醇(7∶2)为展开剂，分离效果较好，Rf值约0.4。实验测得平均回收率为97.7%，RSD为1.34%，表明方法准确、可靠。 * 湖北医科大学药学系1994级本科生
参考文献
1 李小芳，李玉纯.反相HPLC法测定瘀痛灵口服液中芍药苷的含量.中药材，1996，19(9)∶476
2 吕琳，钱永强，朱宇明等.秦归活络口服液中芍药苷的含量测定.中药新药与临床药理，1996，7(3)∶30
3 刘金旗，薛申如，齐腊梅.四物汤口服液中芍药苷的含量测定.中成药，1993，15(4)∶13
4 杨士伟，马太久，刘战宏.用正交函数分光光度法测定小建中合剂中芍药苷的含量.中成药，1992，14(2)∶10, 百拇医药(罗 毅 张 洪 马俊玲 张先洲 徐绍新*)
单位：湖北医科大学附属一医院药学部 武汉 430060
关键词：益宫散结口服液；薄层色谱；芍药苷；薄层扫描
益宫散结口服液质量标准的研究 提要 对益宫散结口服液中的生物碱类活性成分进行了检识，对主要药味丹参、赤芍、川芎和当归进行了薄层鉴别，并采用薄层扫描法测定了芍药苷的含量。方法简便、结果准确、重复性好，可用于控制产品质量。
STUDIES ON THE QUALITY CRITERIONS FOR
YIGONG SHANJIE ORAL LIQUID
Luo Yi Zhang Hong Ma Junling Zhang Xianzhou Xu Shaoxin
, 百拇医药
(Department of Pharmacy, the First Affiliated Hospital of Hubei Medical College Wuhan 430060)
ABSTRACT The active component alkaloid in Yigong Shanjie oral liquid was detected by chemical reaction. The main ingredients Radix Salviae Miltorerhizae, Radix Paeoniae Rubra, Rhizoma Chuanxiong and Radix Angelicae Sinensis in it were identified by TLC. The content of paeoniflorin was determined by TLC-scanning. The methods were simple, accurate and reproducible.They can be used to control the quality of this preparation.
, 百拇医药
Key Words Yigong Shanjie oral liquid TLC Paeoniflorin TLC-scanning
益宫散结口服液是由丹参、赤芍、川芎、当归、益母草、桃仁、红花、炙甲片等12味中药制成，具有活血化淤、消膜散结之功效，尤对子宫内膜异常增生症有独特疗效。为控制产品质量，保证临床疗效的稳定，特建立了该制剂的定性、定量检测方法。
1 实验部分
1.1 仪器与试药
紫外分析仪(上海分析仪器厂)；CS-9000型薄层扫描仪(日本岛津)；微量定容毛细管(Drumond USA)；PBQ-Ⅱ型薄层自动铺板器(重庆南岸新力实验仪器厂)。硅胶G(青岛海洋化工厂)；丹参、赤芍、当归、川芎对照药材和丹参酮ⅡA、芍药苷、阿魏酸对照品(中国药品生物制品检定所)；益宫散结口服液(自制)；所用试剂均为分析纯。
, http://www.100md.com
1.2 鉴别
1.2.1 生物碱的鉴别 取益宫散结口服液30 ml，加入1%氨水调pH值至9，用乙醚萃取3次(15、10、10 ml)，合并萃取液，挥干，残渣用1%盐酸6 ml溶解，分3份，各加碘化铋钾、碘化汞钾、硅钨酸试液1～2滴，则分别出现橙红色、黄白色、灰白色的沉淀。
1.2.2 丹参的TLC鉴别 取益宫散结口服液20 ml，用乙醚萃取(15 ml×4)，合并萃取液，挥干，残渣加醋酸乙酯1 ml使溶解，作为供试品溶液。同法制备缺丹参的阴性对照液。另取丹参对照药材按益宫散结口服液制法制成口服液，再同上法制备对照药材溶液。再取丹参酮ⅡA对照品，加醋酸乙酯制成每1 ml含0.5 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法，吸取上述4种溶液各3 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯-醋酸乙酯(19∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯(365 nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱和对照药材色谱相应位置上，显相同颜色的荧光斑点(图1)。
, 百拇医药
Fig 1 TLC of Danshen
1 Reference of Tanshinone ⅡA 2 Control of Danshen
3 Negative sample of Danshen 4 Sample
1.2.3 赤芍的TLC鉴别 取该口服液10 ml，水饱和正丁醇萃取(10 ml×4)，合并萃取液，蒸干，残渣加5 ml乙醇溶解，作为供试品溶液。同法制备缺赤芍的阴性对照液。另取赤芍对照药材按该口服液制法制成口服液，同上法制得对照药材溶液。再取芍药苷对照品，加乙醇制成每ml含1 g的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法，吸取上述溶液各3 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇(7∶2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以新鲜配制的5%香草醛硫酸试液，在105℃下烘3 min显色。供试品色谱中，在与对照品色谱和对照药材色谱相应位置上，显相同颜色的斑点(图2)。
, 百拇医药
Fig 2 TLC of Chishao
1 Reference of Paeoniflorin 2 Control of Chishao
3 Nega-tive sample of Chishao 4 Sample
1.2.4 川芎和当归的TLC鉴别 取该口服液10 ml，乙醚萃取(15 ml×3)，合并萃取液，挥干，残渣用2 ml甲醇溶解，作为供试品溶液。同法制备缺川芎及当归的阴性对照液。另取川芎、当归对照药材分别制成口服液，再同上法制备川芎对照药材溶液和当归对照药材溶液。再取阿魏酸对照品，加甲醇制成每ml含0.5 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法，吸取上述溶液各3 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-醋酸乙酯-甲酸(5∶4∶0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯(365 nm)下观察。供试品色谱中，在与对照品色谱和对照药材色谱相应位置上，显相同颜色的荧光斑点(图3)。
, http://www.100md.com
Fig 3 TLC of Chuanxiong and Danggui
1 Reference of ferulic acid 2 Control of Chuanxiong
3 Control of Danggui 4 Negative sample of Chuanxiong and Danggui 5 Sample
1.3 芍药苷的含量测定
1.3.1 薄层层析条件 硅胶G-0.5% CMC-Na薄层板，厚0.5 mm，用薄层自动铺板器铺制，105℃活化1 h；氯仿-甲醇(7∶2)展开，展距12 cm；显色剂用5%香草醛硫酸试液，105℃烘3 min。
1.3.2 薄层扫描条件 扫描方式为反射式双波长锯齿扫描；检测波长λS=590 nm，λR=690 nm；线性参数SX=3；狭缝0.4 mm×0.4 mm；灵敏度中。
, http://www.100md.com
1.3.3 标准曲线的绘制 取芍药苷对照品适量，精密称定，加乙醇溶解定容，制成1.02 mg/ml的对照品溶液。精密吸取该溶液1、2、3、4、5 μl分别点于同一薄层板上，展开、显色、扫描测定。以点样量为横坐标，斑点峰面积积分值为纵坐标，结果表明芍药苷在1.02～5.10 μg范围内有良好的线性关系。回归方程为：
Y=-2139.7+28263.2X r=0.9980。
1.3.4 稳定性试验 吸取芍药苷对照品溶液3 μl点于薄层板上，展开，显色，每隔30 min扫描测定1次，共测10次，结果3 h内峰面积积分值
±s=50478.81±1773.59,RSD=2.85%，表明斑点在3 h以内稳定。, http://www.100md.com 1.3.5 精密度试验 吸取芍药苷对照品溶液，于同一薄层板上点5点，每点3 μl，展开，显色，扫描测定，得峰面积积分值
±s=51816.896±1151.43,RSD=2.22%；再对其中一点连续平行扫描测定5次，得±s=53741.884±126.77,RSD=0.23%。表明板内重复性和仪器精密度良好。1.3.6 回收率试验 精密吸取缺赤芍的空白口服液10 ml，准确加入一定量芍药苷对照品，按样品测定法测定，结果见表1。
Table 1 The results of recovery test (n=3)
, http://www.100md.com
No.
Added
(mg)
Measured
(mg)
Recovery
(%)
Average
recovery
(%)
RSD
(%)
1
, 百拇医药
4.08
3.95
96.81
2
4.59
4.56
99.35
3
5.10
4.96
97.25
97.75
1.11
, 百拇医药
4
5.61
5.44
96.97
5
6.12
6.02
98.37
1.3.7 供试品测定 精密吸取品10 ml，用水饱和正丁醇萃取(15 ml×4)，合并萃取液，加无水硫酸钠适量，放置过夜，滤过，并以正丁醇洗涤，滤液与洗液合并，蒸干，残渣加乙醇溶解并定容至5 ml，作为供试品溶液。吸取供试品溶液3 μl，对照品溶液2、4 μl，分别交叉点于同一薄层板上，展开，显色，扫描测定(表2)。 Table 2 Determination results of samples
, http://www.100md.com
Batch
No.
Content of paeoniflorin(mg/ml)
±sRSD
(%)
1
2
3
970924
0.531
, 百拇医药
0.518
0.520
0.523±0.007
1.34
980312
0.492
0.510
0.498
0.500±0.009
1.83
980505
0.507
, 百拇医药 0.498
0.511
0.505±0.007
1.32
2 讨论
2.1 处方中益母草主要含生物碱类活性成分，试验采用三种生物碱沉淀试剂进行检识，均呈阳性反应，证明了生物碱的存在。
2.2 对丹参、赤芍、川芎和当归进行薄层鉴别时，根据欲测成分的性质而选用相应的提取方法和展开系统，使得薄层斑点分离清晰，阴性对照无干扰，且重现性较好。
2.3 芍药苷的含量测定方法已报道的有高效液相色谱法[1]、薄层扫描法[2]、紫外分光光度法[3]、正交函数分光光度法[4]等。本文以薄层扫描法测定芍药苷的含量作为评价制剂质量的一个指标。样品提取时，根据芍药苷具有较大极性而选用水饱和正丁醇作溶剂；样品经萃取4次后，用薄层层析法已不能检出芍药苷，表明已提取完全。薄层层析时，经筛选确定以氯仿-甲醇(7∶2)为展开剂，分离效果较好，Rf值约0.4。实验测得平均回收率为97.7%，RSD为1.34%，表明方法准确、可靠。 * 湖北医科大学药学系1994级本科生
参考文献
1 李小芳，李玉纯.反相HPLC法测定瘀痛灵口服液中芍药苷的含量.中药材，1996，19(9)∶476
2 吕琳，钱永强，朱宇明等.秦归活络口服液中芍药苷的含量测定.中药新药与临床药理，1996，7(3)∶30
3 刘金旗，薛申如，齐腊梅.四物汤口服液中芍药苷的含量测定.中成药，1993，15(4)∶13
4 杨士伟，马太久，刘战宏.用正交函数分光光度法测定小建中合剂中芍药苷的含量.中成药，1992，14(2)∶10, 百拇医药(罗 毅 张 洪 马俊玲 张先洲 徐绍新*)