褪黑素对海洛因依赖大鼠NO及SOD水平的影响*
作者：徐贵丽 刘泽源 苏国丽** 赵 晶
单位：成都军区昆明总医院 昆明 650032
关键词：褪黑素；海洛因依赖；一氧化氮；超氧化物歧化酶
华西药学杂志990510 提要 探讨了褪黑素(melatonin,MT)三个剂量[25、75、125 mg/(kg.d)]、美沙酮两个剂量[2、4 mg/(kg.d)]及MT长期保护用药等方法，对按剂量递增法形成的海洛因依赖性大鼠血液中的SOD及NO水平的影响。用药7 d组与自然戒断组比较(t检验)，MT25、75 mg/(kg.d)两组的NO水平明显高于对照组(P<0.05)，MT125 mg/(kg.d)组则有非常显著的差异(P<0.001)，美沙酮组与对照组比较无统计学差异。以上各组SOD水平与对照组比较均无统计学意义。MT长期用药组与单用海洛因组比较，其NO、SOD水平均明显升高(P<0.001)。
, 百拇医药
EFFETS OF MELATONIN ON NO AND SOD LEVEL
IN HEROIN-DEPENDENT RATS
Xu Guili Liu Zeyuan Shu Guoli Zhao Jing
(Kunming General Hospital in Chengdu Military Region Kunming 650032)
ABSTRACT NO and SOD levels in heroin-dependent rats by gradually increasing doses of heroin were observed after using melatonin in three doses[25,75,125 mg/(kg.d)],methadone in two doses for 7 days and MT in multiple dose group. The results showed that NO level in MT group [25,75 mg/(kg.d),7 days] increased compared with that of control group (P<0.05).While MT in 125 mg/(kg.d) improved obviously (P<0.001),SOD was not different among every group in 7 days. NO and SOD levels in MT multiple dose group was quite different compared with that of heroin group (P<0.001).
, http://www.100md.com
Key Words Melatonin Heroin-dependent SOD NO
松果体起源于神经外胚层，直接受交感神经支配。越来越多的实验数据证明，松果体是一个具有多种生理活性的器官，它所分泌的褪黑素(MT)毒性小，可影响诸多内分泌腺。现已得知，海洛因依赖患者体内神经、受体、内分泌及免疫功能都发生了一系列相应的变化并有明显的早衰现象，与MT的作用范围有很多吻合点。现通过MT对海洛因依赖性大鼠血液NO及SOD影响的研究，从生化方面探讨MT对海洛因依赖是否有一定的作用。
1 实验部分
1.1 材料与仪器
Wistar大鼠(中科院昆明动物所)72只，♀
各半，体重(224±21.2) g。MT(Sigma公司)；海洛因(昆明市公安局)纯度88.5%；美沙酮(云南省卫生厅药政处，批号960429)。超氧化物歧化酶(SOD-1)放免分析试剂盒(北京北方生物技术研究所)；NO测定试剂盒(北京邦定生物医学公司)。FJ-2008自动γ免疫计数仪(国营六二六厂)；UV-2201型紫外可见分光光度计(日本岛津)；LDZ5-2自动平衡离心机(北京医用离心机厂)。
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1.2 方法
1.2.1 大鼠海洛因依赖模型的建立 初始剂量为1.0 mg/(kg.d)给大鼠sc海洛因(生理盐水溶解)，每日两次(8 am、8 pm)，按日递增0.25 mg/(kg.d)(25℃左右，室内空气流通)，连续递增给药28 d，剂量达8.0 mg/(kg.d)时，保持该剂量42 d，即依赖模型建立。
1.2.2 实验动物分组 大鼠按体重均衡原则随机分为9组，每组8只。自然戒断(A)组，海洛因依赖大鼠模型建立42 d后，停止sc海洛因，每天给予0.5%西黄蓍胶液0.5 ml两次，ig(8 am、8 pm)；美沙酮高、低[4、2 mg/(kg.d)]剂量(B、C)组，海洛因依赖大鼠模型建立42 d后，停止sc海洛因，给予美沙酮(0.5%西黄蓍胶液研磨成均匀悬液)，分两次ig(8 am、8 pm)。MT低、中、高[25、75 mg/(kg.d)]剂量(D、E、F)组，给药方法同B、C组。以上6组均给药7 d，第8天 8 am取大鼠眶静脉血。海洛因成瘾(O)组每天按体重sc海洛因49 d后，取血同上各组；生理盐水对照(H)组每天sc生理盐水0.5 ml 49 d后，取血同上各组；MT保护(G)组每天按体重sc海洛因的同时，给予MT 75 mg/(kg.d)(0.5%西黄蓍胶液研磨成均匀悬液)ig，49 d后取血。大鼠取血麻醉方法，均以乙醚吸入麻醉。
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1.2.3 大鼠血液生化指标的测定 取大鼠眶静脉血1 ml，分离血清，按药盒说明书操作，用分光光度法测定血清NO。取大鼠眶静脉血1 ml，分离血清，按药盒说明书测定血清SOD。
1.3 结果
1.3.1 给药组测定结果 各组取血后测定有关生化指标，结果与A组比较，进行t检验。SOD数值无统计学意义。NO值与A组比较，D、E组有显著差异(P<0.05)，F组有非常显著性差异(P<0.001)，结果见表1。
Table 1 Level of NO and SOD after 7 days therapy on heroin-dependent rats Groups
Drug doses
[mg/(kg.d)]
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NO
(μmol/ml)
SOD
(ng/ml)
A
NS
0.79±0.16
40.89±13.10
B
Methdone 2
0.79±0.16
29.12±7.15
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C
Methdone 4
0.73±0.21
39.59±11.26
D
MT 25
0.97±0.09*
31.64±8.23
E
MT 75
1.05±0.19*
33.88±12.23
, 百拇医药
F
MT 125
1.34±0.17△
34.99±8.09
*P<0.05,△P<0.001 compared with A group; MT=melatonin
1.3.2 H、O、G组测定结果 取血后测定有关生化指标，各组结果与O组比较，进行t检验。G组SOD水平与O组比较，存在高度显著性差异(P<0.001)；H组SOD及NO水平与O组比较，存在高度显著性差异(P<0.001)，结果见表2。
Table 2 Influence of Melatonin on NO and SOD level
, 百拇医药
(administration for 49 d) Groups
Doses
[mg/(kg.d)]
NO
(μmol/ml)
SOD
(ng/ml)
H
NS
1.21±0.14
47.33±5.64△
O
, 百拇医药
HR
1.23±0.13
28.50±9.73
G
HR+MT(ig)75
1.93±0.43△
50.47±9.52△
HR＝heroin;△P<0.001 compared with O group
2 讨论
NO是一种自由基性质的气体，有关内皮依赖性血管舒张的研究[1]直接导致了体内NO生物信使作用的发现。NO在心血管、神经、免疫等系统中均发挥重要调节功能。研究表明[2]，NO可能介导了吗啡的镇痛、免疫调节及戒断反应等多种作用。此外，NO与SOD一样具有清除超氧阴离子(O-2)的作用。我们的实验表明，MT具有明显地升高NO水平的作用，而且在7 d治疗后就出现统计学差异。MT用药的三个组与自然戒断组比较都有统计学意义，可能因为NO为一种高效而多样化的生物调节因子，其半衰期短(3～5 s)与生成速度极快有关[3]。MT保护组NO水平明显高于单用海洛因组(P<0.001)，表明长期体外给予MT，也可升高NO水平；而生理盐水组与海洛因组比较无统计学意义，可能因用海洛因时间太长，NO的合成与代谢在体内经自身调节，已处于一种动态平衡之中。
, 百拇医药
据报道[4]，海洛因成瘾者比正常同龄人更易出现衰老。而超氧化物歧化酶(SOD)作为一种重要的氧自由基清除剂与衰老的发生有着极密切的关系。SOD能催化O-2+O2+2H+→H2O2+O2的反应，有效清除并阻止O-2引发的自由基链锁反应，维持机体自由基产生与清除间的动态平衡。但是，由于各种原因导致自由基产生过多，超越了抗氧体系或抗氧体系受到严重损害不足以清除生理水平的自由基时，就会出现失衡现象，引起O-2净水平的增加，导致疾病与衰老的发生。文献报道[5]，海洛因滥用者体内的氧自由基反应及脂质过氧化反应呈明显的病理性加剧。以上实验中，NS对照组的SOD水平明显高于单用海洛因组的SOD水平，证明了这一结论的正确性。MT保护组的SOD水平也明显高于单用海洛因组，证明长期体外给予MT，能对抗海洛因引起的体内氧自由基反应及脂质过氧化反应，升高体内SOD水平，对海洛因造成的机体损伤，有着恢复作用。MT用药组SOD水平与自然戒断组相比无统计学意义，即MT短时间用药没有表现出有升高SOD水平的作用，可能是由于SOD本质为酶类物质，其合成需要一定的时间，7 d用药时间还不足以引起SOD水平的恢复。
, 百拇医药
由结果可见，与美沙酮比较，MT在SOD、NO水平上的作用明显，美沙酮却没有明显作用。可能是由于MT对戒断治疗的机理不同于美沙酮。美沙酮是阿片类物质，其作用是在同一受体部位的替代疗法，对机体许多组织器官还存在着同样抑制的效果。而MT可能是通过其它机制，如镇痛作用，提高机体免疫力以及清除氧自由基等作用来达到其抑制部分戒断症状的作用，对机体功能的恢复具有优越性。
*全军医药科研基金资助；
**贵阳医学院药学系1994级实习生
参考文献
1 Furchgott RF, Iawads ki JV. The obligatory role of the endothelial cells on the relaxation of arterial smooth muscle by aetylcholine. Nature, 1980.288，373
2 钟兹声，孙安阳主编.一氧化氮的生物医学.上海：上海医科大学出版社.1997.102，156
3 王华东，李楚杰.内源性一氧化氮的研究进展.中国病理生理杂志，1994，10(1)∶22
4 罗群，列惠芬，朱波等.海洛因成瘾者红细SOD活性的研究.中国药物依赖性通报，1994，3(2)∶118
5 周君富，郭芳珍，丁德云.海洛因滥用者尿液过氧化脂质含量的探讨.中国药物依赖性通报，1995，4(4)∶232, 百拇医药(徐贵丽 刘泽源 苏国丽** 赵 晶)
单位：成都军区昆明总医院 昆明 650032
关键词：褪黑素；海洛因依赖；一氧化氮；超氧化物歧化酶
华西药学杂志990510 提要 探讨了褪黑素(melatonin,MT)三个剂量[25、75、125 mg/(kg.d)]、美沙酮两个剂量[2、4 mg/(kg.d)]及MT长期保护用药等方法，对按剂量递增法形成的海洛因依赖性大鼠血液中的SOD及NO水平的影响。用药7 d组与自然戒断组比较(t检验)，MT25、75 mg/(kg.d)两组的NO水平明显高于对照组(P<0.05)，MT125 mg/(kg.d)组则有非常显著的差异(P<0.001)，美沙酮组与对照组比较无统计学差异。以上各组SOD水平与对照组比较均无统计学意义。MT长期用药组与单用海洛因组比较，其NO、SOD水平均明显升高(P<0.001)。
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EFFETS OF MELATONIN ON NO AND SOD LEVEL
IN HEROIN-DEPENDENT RATS
Xu Guili Liu Zeyuan Shu Guoli Zhao Jing
(Kunming General Hospital in Chengdu Military Region Kunming 650032)
ABSTRACT NO and SOD levels in heroin-dependent rats by gradually increasing doses of heroin were observed after using melatonin in three doses[25,75,125 mg/(kg.d)],methadone in two doses for 7 days and MT in multiple dose group. The results showed that NO level in MT group [25,75 mg/(kg.d),7 days] increased compared with that of control group (P<0.05).While MT in 125 mg/(kg.d) improved obviously (P<0.001),SOD was not different among every group in 7 days. NO and SOD levels in MT multiple dose group was quite different compared with that of heroin group (P<0.001).
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Key Words Melatonin Heroin-dependent SOD NO
松果体起源于神经外胚层，直接受交感神经支配。越来越多的实验数据证明，松果体是一个具有多种生理活性的器官，它所分泌的褪黑素(MT)毒性小，可影响诸多内分泌腺。现已得知，海洛因依赖患者体内神经、受体、内分泌及免疫功能都发生了一系列相应的变化并有明显的早衰现象，与MT的作用范围有很多吻合点。现通过MT对海洛因依赖性大鼠血液NO及SOD影响的研究，从生化方面探讨MT对海洛因依赖是否有一定的作用。
1 实验部分
1.1 材料与仪器
Wistar大鼠(中科院昆明动物所)72只，♀
各半，体重(224±21.2) g。MT(Sigma公司)；海洛因(昆明市公安局)纯度88.5%；美沙酮(云南省卫生厅药政处，批号960429)。超氧化物歧化酶(SOD-1)放免分析试剂盒(北京北方生物技术研究所)；NO测定试剂盒(北京邦定生物医学公司)。FJ-2008自动γ免疫计数仪(国营六二六厂)；UV-2201型紫外可见分光光度计(日本岛津)；LDZ5-2自动平衡离心机(北京医用离心机厂)。, http://www.100md.com
1.2 方法
1.2.1 大鼠海洛因依赖模型的建立 初始剂量为1.0 mg/(kg.d)给大鼠sc海洛因(生理盐水溶解)，每日两次(8 am、8 pm)，按日递增0.25 mg/(kg.d)(25℃左右，室内空气流通)，连续递增给药28 d，剂量达8.0 mg/(kg.d)时，保持该剂量42 d，即依赖模型建立。
1.2.2 实验动物分组 大鼠按体重均衡原则随机分为9组，每组8只。自然戒断(A)组，海洛因依赖大鼠模型建立42 d后，停止sc海洛因，每天给予0.5%西黄蓍胶液0.5 ml两次，ig(8 am、8 pm)；美沙酮高、低[4、2 mg/(kg.d)]剂量(B、C)组，海洛因依赖大鼠模型建立42 d后，停止sc海洛因，给予美沙酮(0.5%西黄蓍胶液研磨成均匀悬液)，分两次ig(8 am、8 pm)。MT低、中、高[25、75 mg/(kg.d)]剂量(D、E、F)组，给药方法同B、C组。以上6组均给药7 d，第8天 8 am取大鼠眶静脉血。海洛因成瘾(O)组每天按体重sc海洛因49 d后，取血同上各组；生理盐水对照(H)组每天sc生理盐水0.5 ml 49 d后，取血同上各组；MT保护(G)组每天按体重sc海洛因的同时，给予MT 75 mg/(kg.d)(0.5%西黄蓍胶液研磨成均匀悬液)ig，49 d后取血。大鼠取血麻醉方法，均以乙醚吸入麻醉。
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1.2.3 大鼠血液生化指标的测定 取大鼠眶静脉血1 ml，分离血清，按药盒说明书操作，用分光光度法测定血清NO。取大鼠眶静脉血1 ml，分离血清，按药盒说明书测定血清SOD。
1.3 结果
1.3.1 给药组测定结果 各组取血后测定有关生化指标，结果与A组比较，进行t检验。SOD数值无统计学意义。NO值与A组比较，D、E组有显著差异(P<0.05)，F组有非常显著性差异(P<0.001)，结果见表1。
Table 1 Level of NO and SOD after 7 days therapy on heroin-dependent rats Groups
Drug doses
[mg/(kg.d)]
, http://www.100md.com
NO
(μmol/ml)
SOD
(ng/ml)
A
NS
0.79±0.16
40.89±13.10
B
Methdone 2
0.79±0.16
29.12±7.15
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C
Methdone 4
0.73±0.21
39.59±11.26
D
MT 25
0.97±0.09*
31.64±8.23
E
MT 75
1.05±0.19*
33.88±12.23
, 百拇医药
F
MT 125
1.34±0.17△
34.99±8.09
*P<0.05,△P<0.001 compared with A group; MT=melatonin
1.3.2 H、O、G组测定结果 取血后测定有关生化指标，各组结果与O组比较，进行t检验。G组SOD水平与O组比较，存在高度显著性差异(P<0.001)；H组SOD及NO水平与O组比较，存在高度显著性差异(P<0.001)，结果见表2。
Table 2 Influence of Melatonin on NO and SOD level
, 百拇医药
(administration for 49 d) Groups
Doses
[mg/(kg.d)]
NO
(μmol/ml)
SOD
(ng/ml)
H
NS
1.21±0.14
47.33±5.64△
O
, 百拇医药
HR
1.23±0.13
28.50±9.73
G
HR+MT(ig)75
1.93±0.43△
50.47±9.52△
HR＝heroin;△P<0.001 compared with O group
2 讨论
NO是一种自由基性质的气体，有关内皮依赖性血管舒张的研究[1]直接导致了体内NO生物信使作用的发现。NO在心血管、神经、免疫等系统中均发挥重要调节功能。研究表明[2]，NO可能介导了吗啡的镇痛、免疫调节及戒断反应等多种作用。此外，NO与SOD一样具有清除超氧阴离子(O-2)的作用。我们的实验表明，MT具有明显地升高NO水平的作用，而且在7 d治疗后就出现统计学差异。MT用药的三个组与自然戒断组比较都有统计学意义，可能因为NO为一种高效而多样化的生物调节因子，其半衰期短(3～5 s)与生成速度极快有关[3]。MT保护组NO水平明显高于单用海洛因组(P<0.001)，表明长期体外给予MT，也可升高NO水平；而生理盐水组与海洛因组比较无统计学意义，可能因用海洛因时间太长，NO的合成与代谢在体内经自身调节，已处于一种动态平衡之中。
, 百拇医药
据报道[4]，海洛因成瘾者比正常同龄人更易出现衰老。而超氧化物歧化酶(SOD)作为一种重要的氧自由基清除剂与衰老的发生有着极密切的关系。SOD能催化O-2+O2+2H+→H2O2+O2的反应，有效清除并阻止O-2引发的自由基链锁反应，维持机体自由基产生与清除间的动态平衡。但是，由于各种原因导致自由基产生过多，超越了抗氧体系或抗氧体系受到严重损害不足以清除生理水平的自由基时，就会出现失衡现象，引起O-2净水平的增加，导致疾病与衰老的发生。文献报道[5]，海洛因滥用者体内的氧自由基反应及脂质过氧化反应呈明显的病理性加剧。以上实验中，NS对照组的SOD水平明显高于单用海洛因组的SOD水平，证明了这一结论的正确性。MT保护组的SOD水平也明显高于单用海洛因组，证明长期体外给予MT，能对抗海洛因引起的体内氧自由基反应及脂质过氧化反应，升高体内SOD水平，对海洛因造成的机体损伤，有着恢复作用。MT用药组SOD水平与自然戒断组相比无统计学意义，即MT短时间用药没有表现出有升高SOD水平的作用，可能是由于SOD本质为酶类物质，其合成需要一定的时间，7 d用药时间还不足以引起SOD水平的恢复。
, 百拇医药
由结果可见，与美沙酮比较，MT在SOD、NO水平上的作用明显，美沙酮却没有明显作用。可能是由于MT对戒断治疗的机理不同于美沙酮。美沙酮是阿片类物质，其作用是在同一受体部位的替代疗法，对机体许多组织器官还存在着同样抑制的效果。而MT可能是通过其它机制，如镇痛作用，提高机体免疫力以及清除氧自由基等作用来达到其抑制部分戒断症状的作用，对机体功能的恢复具有优越性。
*全军医药科研基金资助；
**贵阳医学院药学系1994级实习生
参考文献
1 Furchgott RF, Iawads ki JV. The obligatory role of the endothelial cells on the relaxation of arterial smooth muscle by aetylcholine. Nature, 1980.288，373
2 钟兹声，孙安阳主编.一氧化氮的生物医学.上海：上海医科大学出版社.1997.102，156
3 王华东，李楚杰.内源性一氧化氮的研究进展.中国病理生理杂志，1994，10(1)∶22
4 罗群，列惠芬，朱波等.海洛因成瘾者红细SOD活性的研究.中国药物依赖性通报，1994，3(2)∶118
5 周君富，郭芳珍，丁德云.海洛因滥用者尿液过氧化脂质含量的探讨.中国药物依赖性通报，1995，4(4)∶232, 百拇医药(徐贵丽 刘泽源 苏国丽** 赵 晶)