胰岛素在输液及联合用药中的稳定性考察
作者：陈 洁 赵 郁 余江平* 朱 洪 李正义
单位：华西医科大学附一院 成都 610041
关键词：胰岛素；放射免疫法；联合用药；稳定性
华西药学杂志990545 提要 以放射免疫法测定胰岛素在几种输液中，及其与硝酸甘油、氯化钾、硫酸镁、九维他、胞二磷胆碱、丹参注射液等联合应用时，室温放置0、1、2、4、6、8 h后效价变化情况。结果表明胰岛素在10%的葡萄糖注射液中降解最快，与胞二磷胆碱及九维他合用时也不稳定。
胰岛素常用于糖尿病酮症的酸中毒、高血钾症、高渗性非酮症糖尿病昏迷、糖尿病性肝肿大及糖尿病外科手术等的临床抢救，或与其他药物联用。实验考察其在输液中放置及联合用药时的稳定性，旨在为临床合理用药提供依据。
1 实验部分
, http://www.100md.com
1.1 仪器与试药
FJ-2003/01C Gamma Ria Counter(国营262厂)；LXJ-Ⅱ离心沉淀机(上海医疗器械三厂)；YKH-Ⅰ型液体快速混匀器(江西医疗器械厂)；DY-Ⅲ定量移液器(上海求精玻璃仪器厂)。免疫活性胰岛素放免试剂盒(华西糖尿病科技开发研究所，批号9804，9805，9806)；牛血清白蛋白(四川大学生化技术实验厂)；胰岛素注射液(华西医科大学制药厂，批号970402)；硝酸甘油注射液(广州明兴制药厂，批号970703)；10%氯化钾注射液(浙江泰康制药有限公司，批号970729)；25%硫酸镁注射液(无锡第七制药厂，批号9608282)；复方丹参注射液(华西医科大学制药厂，批号980104)；九维他注射液(上海第一制药厂，批号970511)；胞二磷胆碱注射液(广州白云山制药厂，批号9712011)；0.9%NS、5%GS、10%GS、5%GNS(自制)；其余试剂均为分析纯。
1.2 方法[1，2]
, 百拇医药
1.2.1 试剂配置 取Na2HPO4.12H2O 13.1 g，NaH2PO4.2H2O 0.53 g，硫柳汞0.05 g，加重蒸水至1 000 ml，溶解即得0.04 mol/L磷酸盐缓冲液(pH7.8，PB液)；取聚乙二醇6000 36 g，加PB液至100 ml，再加吐温-20 0.1 ml，混匀即得36%PEG溶液；取0.01 g牛血清白蛋白用PB液溶解，使终体积为10 ml即得保温液；载体蛋白为正常人血清。
1.2.2 样品组成(表1)
表1 胰岛素与各注射液配伍情况 编号
样品组成
1
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胰岛素2U，生理盐水100 ml
2
胰岛素2U，5%葡萄糖注射液100 ml
3
胰岛素2U，10%葡萄糖注射液100 ml
4
胰岛素2U，5%葡萄糖氯化钠注射液100 ml
5
胰岛素2U，硝酸甘油5 mg，5%葡萄糖注射液100 ml
6
胰岛素2U，复方丹参注射液10 ml，5%葡萄糖氯化钠注射液100 ml
, 百拇医药
7
胰岛素2U，九维他1支，5%葡萄糖氯化钠注射液100 ml
8
胰岛素2U，胞二磷胆碱250 mg，5%葡萄糖注射液100 ml
9
胰岛素2U，25%硫酸镁4 ml，10%氯化钾4 ml，5%葡萄糖注射液100 ml
1.2.3 操作程序 用100 ml量瓶按表1配成100 ml溶液，放置0、1、2、4、6、8 h后取样40 μl，纯水稀释至10 ml，混匀，取100 μl按表2加样测定。充分混匀，4℃静置20 min，离心(3 000 r/min)，弃上清液，测定沉淀的放射性CPM值。
表2 放免法测定胰岛素各管加样操作表(ml)。 试剂
, http://www.100md.com
T管
NSB管
样品管
(1-9)
标准曲线管
(S0-S7)
质控管
蒸馏水
0.1
标准液
0.1
对应各0.1
, http://www.100md.com 样品液
对应各0.1
质控液
对应各0.1
抗体
0.1
0.1
0.1
125Ⅰ标
胰岛素
0.1
0.1
0.1
, http://www.100md.com
0.1
0.1
混匀，4℃冰箱放置18～24 h
载体蛋白
0.1
0.1
0.1
36%PEG
0.4
0.4
0.4
0.4
蒸馏水
, 百拇医药
0.1
1.3 结果
1.3.1 试验条件优选 分别采用保温液、PB液、重蒸水稀释，其结合率分别为14.17%、18.89%、22.07%，胰岛素浓度为5 μU/ml，重蒸水有最大结合率。由图1可见，PEG的最终浓度增加到18%时能达到最大结合率。
图1 结合率与PEG浓度的关系
1.3.2 样品稀释试验 一份样品成倍稀释为5个浓度，其测定值与样品用量呈线性关系，Y=-3.933+86.18X r=0.9993。
1.4 样品测定
按表1配置样品液1～9号，按表2中的顺序操作、测定，结果见图2。
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图2 胰岛素在输液中的稳定性
2 结果与讨论
2.1 由图2可看出，胰岛素在生理盐水、5%葡萄糖注射液、5%葡萄糖氯化钠注射液中，及与硝酸甘油、硫酸镁、氯化钾、复方丹参注射液等联合应用时，8 h内效价变化小于10%，而在10%葡萄糖注射液中随时间延长其效价下降，8 h下降超过40%，与九维他及胞二磷胆碱联用，8 h内分别下降38%、49%。
2.2 由于输液中胰岛素浓度低于高效液相法测定最低限度，故文中参照血清中胰岛素测定法——放射免疫法，优选了试验条件，以重蒸水为稀释液，PEG终浓度为18%时有较高的胰岛素抗原-抗体结合率。
2.3 曾有报道胰岛素制剂的稳定性[2]，而未见其在输液中的稳定性报道。本试验可为临床的胰岛素合理应用提供依据。
* 华西医科大学1993级临床药学专业毕业生
参考文献
1 邓尚平，周文碧，熊忠云.胰岛素放射免疫分析实验条件的选择和方法学鉴定.四川医学院学报，1982，13(4)∶345
2 乔德水，毛璞.胰岛素注射液的稳定性考察.中国生化药物杂志，1993，64(2)∶20, http://www.100md.com(陈 洁 赵 郁 余江平* 朱 洪 李正义)
单位：华西医科大学附一院 成都 610041
关键词：胰岛素；放射免疫法；联合用药；稳定性
华西药学杂志990545 提要 以放射免疫法测定胰岛素在几种输液中，及其与硝酸甘油、氯化钾、硫酸镁、九维他、胞二磷胆碱、丹参注射液等联合应用时，室温放置0、1、2、4、6、8 h后效价变化情况。结果表明胰岛素在10%的葡萄糖注射液中降解最快，与胞二磷胆碱及九维他合用时也不稳定。
胰岛素常用于糖尿病酮症的酸中毒、高血钾症、高渗性非酮症糖尿病昏迷、糖尿病性肝肿大及糖尿病外科手术等的临床抢救，或与其他药物联用。实验考察其在输液中放置及联合用药时的稳定性，旨在为临床合理用药提供依据。
1 实验部分
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1.1 仪器与试药
FJ-2003/01C Gamma Ria Counter(国营262厂)；LXJ-Ⅱ离心沉淀机(上海医疗器械三厂)；YKH-Ⅰ型液体快速混匀器(江西医疗器械厂)；DY-Ⅲ定量移液器(上海求精玻璃仪器厂)。免疫活性胰岛素放免试剂盒(华西糖尿病科技开发研究所，批号9804，9805，9806)；牛血清白蛋白(四川大学生化技术实验厂)；胰岛素注射液(华西医科大学制药厂，批号970402)；硝酸甘油注射液(广州明兴制药厂，批号970703)；10%氯化钾注射液(浙江泰康制药有限公司，批号970729)；25%硫酸镁注射液(无锡第七制药厂，批号9608282)；复方丹参注射液(华西医科大学制药厂，批号980104)；九维他注射液(上海第一制药厂，批号970511)；胞二磷胆碱注射液(广州白云山制药厂，批号9712011)；0.9%NS、5%GS、10%GS、5%GNS(自制)；其余试剂均为分析纯。
1.2 方法[1，2]
, 百拇医药
1.2.1 试剂配置 取Na2HPO4.12H2O 13.1 g，NaH2PO4.2H2O 0.53 g，硫柳汞0.05 g，加重蒸水至1 000 ml，溶解即得0.04 mol/L磷酸盐缓冲液(pH7.8，PB液)；取聚乙二醇6000 36 g，加PB液至100 ml，再加吐温-20 0.1 ml，混匀即得36%PEG溶液；取0.01 g牛血清白蛋白用PB液溶解，使终体积为10 ml即得保温液；载体蛋白为正常人血清。
1.2.2 样品组成(表1)
表1 胰岛素与各注射液配伍情况 编号
样品组成
1
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胰岛素2U，生理盐水100 ml
2
胰岛素2U，5%葡萄糖注射液100 ml
3
胰岛素2U，10%葡萄糖注射液100 ml
4
胰岛素2U，5%葡萄糖氯化钠注射液100 ml
5
胰岛素2U，硝酸甘油5 mg，5%葡萄糖注射液100 ml
6
胰岛素2U，复方丹参注射液10 ml，5%葡萄糖氯化钠注射液100 ml
, 百拇医药
7
胰岛素2U，九维他1支，5%葡萄糖氯化钠注射液100 ml
8
胰岛素2U，胞二磷胆碱250 mg，5%葡萄糖注射液100 ml
9
胰岛素2U，25%硫酸镁4 ml，10%氯化钾4 ml，5%葡萄糖注射液100 ml
1.2.3 操作程序 用100 ml量瓶按表1配成100 ml溶液，放置0、1、2、4、6、8 h后取样40 μl，纯水稀释至10 ml，混匀，取100 μl按表2加样测定。充分混匀，4℃静置20 min，离心(3 000 r/min)，弃上清液，测定沉淀的放射性CPM值。
表2 放免法测定胰岛素各管加样操作表(ml)。 试剂, http://www.100md.com
T管
NSB管
样品管
(1-9)
标准曲线管
(S0-S7)
质控管
蒸馏水
0.1
标准液
0.1
对应各0.1
, http://www.100md.com 样品液
对应各0.1
质控液
对应各0.1
抗体
0.1
0.1
0.1
125Ⅰ标
胰岛素
0.1
0.1
0.1
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0.1
0.1
混匀，4℃冰箱放置18～24 h
载体蛋白
0.1
0.1
0.1
36%PEG
0.4
0.4
0.4
0.4
蒸馏水
, 百拇医药
0.1
1.3 结果
1.3.1 试验条件优选 分别采用保温液、PB液、重蒸水稀释，其结合率分别为14.17%、18.89%、22.07%，胰岛素浓度为5 μU/ml，重蒸水有最大结合率。由图1可见，PEG的最终浓度增加到18%时能达到最大结合率。
图1 结合率与PEG浓度的关系
1.3.2 样品稀释试验 一份样品成倍稀释为5个浓度，其测定值与样品用量呈线性关系，Y=-3.933+86.18X r=0.9993。
1.4 样品测定
按表1配置样品液1～9号，按表2中的顺序操作、测定，结果见图2。
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图2 胰岛素在输液中的稳定性
2 结果与讨论
2.1 由图2可看出，胰岛素在生理盐水、5%葡萄糖注射液、5%葡萄糖氯化钠注射液中，及与硝酸甘油、硫酸镁、氯化钾、复方丹参注射液等联合应用时，8 h内效价变化小于10%，而在10%葡萄糖注射液中随时间延长其效价下降，8 h下降超过40%，与九维他及胞二磷胆碱联用，8 h内分别下降38%、49%。
2.2 由于输液中胰岛素浓度低于高效液相法测定最低限度，故文中参照血清中胰岛素测定法——放射免疫法，优选了试验条件，以重蒸水为稀释液，PEG终浓度为18%时有较高的胰岛素抗原-抗体结合率。
2.3 曾有报道胰岛素制剂的稳定性[2]，而未见其在输液中的稳定性报道。本试验可为临床的胰岛素合理应用提供依据。
* 华西医科大学1993级临床药学专业毕业生
参考文献
1 邓尚平，周文碧，熊忠云.胰岛素放射免疫分析实验条件的选择和方法学鉴定.四川医学院学报，1982，13(4)∶345
2 乔德水，毛璞.胰岛素注射液的稳定性考察.中国生化药物杂志，1993，64(2)∶20, http://www.100md.com(陈 洁 赵 郁 余江平* 朱 洪 李正义)