尼卡地平对戊四唑化学性点燃的拮抗作用
作者：王蕾 张芳 岳旺
单位：王蕾(266021 青岛大学 医学院药理学教研室)；张芳(266021 青岛大学 医学院药理学教研室)；岳旺(266021 青岛大学 医学院药理学教研室)
关键词：尼卡地平；戊四唑；点燃模型；钙通道阻滞剂；癫痫
脑与神经疾病杂志000305 摘 要 目的：研究二氢吡啶类钙通道阻滞剂尼卡地平对大鼠戊四唑(PTZ)化学性点燃(kindling)的拮抗作用。 方法： 建立大鼠PTZ化学性点燃模型， 观察尼卡地平对PTZ点燃发展进程和点燃发作的影响。 结果： 尼卡地平2mg.kg-1ip明显抑制PTZ点燃的发展进程(P<0.001)； 2～20mg.kg-1ip显著抑制PTZ点燃发作(P<0.01), 并呈量效关系； 尼卡地平20mg.kg-1ip对小鼠PTZ惊厥有保护作用(P<0.01)。结论： 尼卡地平对PTZ化学性点燃的发展和发作有拮抗作用。
, http://www.100md.com
Antagonism of nicardipine against pentylentetrazol kindling in rats
Wang Lei Zhang Fang Yue Wang
(Department of pharamacology,Medical college,Qingdao University,Qingdao 266021)
Abstract Objective： To study the antagonism of dihydropyridine calcium channel blocker nicardipine against pentylenetetrazol (PTZ) kindling. Methods: PTZ kindling model was established in rats, to investigate the effects of nicardipine on kindling development and kindled seizures.Results:Nicardipine 2mg.kg-1 ip significantly delayed the development of PTZ kindling (P<0.001)，2～20mg.kg-1 ip dose-dependently inhibited the seizure severity in PTZ kindled rats (P<0.01).Nicardipine 20 mg.kg-1 ip had protective effects in ptz-induced seizures of mice.Conclusion: The results suggested that nicardipine had antagonism against PTZ-kindling in rats.
, http://www.100md.com
Key words nicardipine pentylenetetrazol kindling model calcium channel blocker epilepsy▲
尼卡地平(nicardipine)是二氢吡啶类L-型钙通道阻滞剂，是临床常用于治疗心、脑血管疾病的新一代钙拮抗剂。Ca2+内流与癫痫发作密切相关[1]。点燃(kindling)模型是研究人类慢性癫痫的理想模型[2]，包括脑核团电刺激点燃和化学性点燃，前者与复杂性部分性发作相似[3]，后者与原发性癫痫全身性发作相似[4]。其它癫痫模型的研究已有报道[5]，但戊四唑化学性点燃模型的作用未见报道，本文为戊四唑点燃模型研究尼卡地平的抗癫痫作用。
材料和方法
一、材料：Wistar大鼠，雌性，体重190±10g；昆明种小鼠，体重22±2g，雌雄兼有，均由青岛市药品检验所动物中心提供。
, http://www.100md.com
尼卡地平(nicardipine)、戊四唑(pentylenetetrazole,PTZ)、Sigma公司产品；二甲基亚砜(dimethylsulphoxide,DMSO)、上海亨达精细化学品有限公司产品。
二、方法
1.大鼠PTZ化学性点燃模型的制备：用生理盐水新鲜配制1.75%的PTZ溶液，隔日ip亚惊厥剂量的PTZ 35mg.kg-1，注射容积为2mg.kg-1，观察每次ip后1h内的行为变化。行为发作指标按Ono法[6]分Ⅵ级，即0级：无反应；Ⅰ级：点头或头部抽搐；Ⅱ级：全身肌阵挛；Ⅲ级：头部抽搐伴前肢阵挛；Ⅳ级：阵挛惊厥伴后肢站立；Ⅴ级：跌倒；Ⅵ级：全身强直-阵挛性惊厥。连续出现5次Ⅱ级或Ⅱ级以上者，即为点燃(kindled)大鼠。
2.尼卡地平对PTZ点燃发展进程的影响：健康大鼠随机均分2组(n=8)，尼卡地平组2mg.kg-1ip，溶媒对照组ip等量DMSO，30min后ip PTZ35mg.kg-1，观察1h内Ono分级，记录发作潜伏期和持续时间，计算Ono分级与给药次数的关系。
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3.尼卡地平对PTZ点燃发作的作用：取点燃大鼠，分别ip尼卡地平2，5，7.5，10，20mg.kg-1(n=7)，30min后ip PTZ35mg.kg-1，注射容积均为2ml.kg-1，观察1h内Ono分级，计算给药前后Ⅵ级(全身强直-阵挛发作)发生百分率。实验前ip等量DMSO作自身对照。
4.尼卡地平对小鼠戊四唑惊厥的作用：小鼠随机均分4组(n=10)，分别ip尼卡地平2，10，20mg.kg-1或DMSO预处理。30min后sc惊厥剂量的PTZ85mg.kg-1[7]。PTZ需新鲜溶于生理盐水，注射容积均为10ml.kg-1。以出现阵挛性惊厥为指标，记录惊厥发生率、强直发生率及死亡率。
, 百拇医药 5.统计学处理：数据均用x±s，组间均数的比较采用配对t检验，记数资料用卡方检验。
结 果
1.尼卡平对PTZ点燃发展进程的抑制作用：对照组ip亚惊厥剂量PTZ，在25.0±3.0次后即出现Ⅴ-Ⅵ级反应，尼卡地平组则在ipPTZ44.6±2.6次后才达到Ⅴ-Ⅵ级，所需ipPTZ次数显著高于对照组(n=8,P<0.001)，尼卡地平对点燃达Ono各级所需的ipPTZ次数见表1。
表1 尼卡地平对PTZ点燃Ono各分级的影响(x±s，n=8)
Ⅰ-Ⅱ
Ⅲ-Ⅳ
Ⅴ-Ⅵ
DMSO
, http://www.100md.com
5.6±1.4
17.0±1.2
25.0±3.0
尼卡地平
8.6±2.6**
25.4±4.0***
44.6±2.6***
与DMSO溶媒对照组比较**P<0.01,***P<0.001
2.尼卡地平对PTZ点燃发作的拮抗作用：尼卡地平2～20mg.kg-1ip显著降低点燃发作的Ono分级，并呈量效关系(n=7，P<0.01)。在10，20mg.kg-1ip时，OnoⅥ级反应百分率明显下降(P<0.01)，见表2。表2 尼卡地平对大鼠PTZ点燃的作用(x±s,n=7) 剂量
, http://www.100md.com
(mg.kg-1)
Ono分级
Ⅵ级发作保护率
(%)
给药前
给药后
2.0
4.9±1.5
3.9±1.5
28.6
5.0
5.4±1.1
, 百拇医药
3.3±1.7*
57.1
7.5
5.1±1.5
3.0±2.1*
57.1
10.0
5.6±1.3
3.0±1.4**
71.4*
20.0
, 百拇医药 5.1±1.5
2.4±0.8**
71.4**
与给药前对照组比较 *P<0.05,**P<0.01
3.尼卡地平对小鼠PTZ惊厥的抑制作用：尼卡地平10，20mg.kg-1ip，可分别显著延长惊厥发作阵挛相和强直相的潜伏期(P<0.01)，见表3。表3 尼卡地平对小鼠PTZ惊厥的保护作用(x±s,n=10)
剂量
(mg.kg-1)
阵挛潜伏期
, 百拇医药
(min)
强直潜伏期
(min)
DMSO
13.0±6.9
18.1±12.3
尼卡地平
2.0
18.2±8.6
31.6±9.4
10.0
23.8±10.9*
, http://www.100md.com
43.9±22.4*
20.0
26.9±5.3***
48.6±21.8**
与DMSO溶媒对照组比较 *P<0.05,**P<0.01,***P<0.001
讨 论
化学性点燃是指反复给予亚惊厥剂量致惊剂，逐渐诱发的慢性癫痫发作[8]，PTZ作为工具药常用于化学性点燃[9]。该点燃模型可外周给药，在脑内不形成致痫灶[8]，一旦形成即具永久性，是研究人类原发性癫痫全身性发作的理想模型[4]。
, http://www.100md.com
Ca2+不仅是重要的细胞内第二信使，还参与对多种递质合成与释放的调控。已证明Ca2+内流参与各种癫痫发作[1]。二氢吡啶类钙通道阻滞剂尼卡地平易通过血脑屏障。本文在PTZ化学性点燃模型的研究证明：尼卡地平在低剂量可明显抑制大鼠PTZ点燃发展的进程，2～20mg.kg-1ip能显著降低化学性点燃的发作强度，降低Ⅵ级反应的发生率，并呈量效关系；此外，对小鼠的PTZ急性惊厥也有保护作用。以上结果表明钙通道滞剂对急慢性癫痫发作有明显的拮抗作用。
多数抗癫痫药物的作用机制与Ca2+等离子通道和抑制性神经递质GABA密切相关[10]。本文用尼卡地平在PTZ点燃模型和杏仁核点燃模型获得相似的拮抗效果，并证明尼卡地平抗点燃效应与其阻断Ca2+内流、升高脑内GABA含量有关(待发表)，这与经典的抗癫痫药物苯妥英钠、苯巴比妥即阻断Ca2+通道又能提高GABA功能的新机理相吻合[11]。
, 百拇医药
综上所述，尼卡地平在多种癫痫模型都有拮抗作用，又兼有抗脑缺血、缺氧和增强记忆等现有的抗癫痫药所不具有的优点，这对开发钙拮剂治疗某些癫痫的临床新用途有重要意义。
本题为山东省卫生厅青年基金资助课题(1999CA2CBA1)
参 考 文 献
1，Meldrum B, Champman AG, et al. Research Progress in epilepsy. London: Pitman, 1983∶133～138.
2，Moshe SL, Ludring N, et al. Recnt Advances in Epilepsy London: Churchil Livingstone, 1988∶21～28.
3，Albertson TE, Peterson SL, et al. Neuropharmacology, 1980,19∶643～652.
, 百拇医药
4，Loscher W, Schimidt D. Epilepsy Res, 1988,2∶145～156.
5，Meger FB, Anderson RE, et al. Epilepsia, 1990,31(1)∶68～74.
6，Palmer GC, Stagnitto ML, et al. Epilepsia, 1993,34(2)∶372～380.
7，徐叔云， 卞如濂主编. 药理实验方法学， 第二版， 人民卫生出版社， 1991，676～678.
8，Fisher RS. Animal model of the epilepsis. Brain Res. Rev, 1989,14∶245～278.
9，Tanabe K, Yue W, et al. Anticonvulsant activities and properties of topiramate. J Yonago Med Ass. 1991,42,330～346.
10，McNamara JO. In:Goodman & Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics. 9 th edition. New York: The McGraw-Hill Companies, 1996,461～486.
11，Ffrench-Mullen JMH, Barker JH, et al. J Neuroscience, 1993,13∶3211～3221.
(2000-03-06 收稿), http://www.100md.com
单位：王蕾(266021 青岛大学 医学院药理学教研室)；张芳(266021 青岛大学 医学院药理学教研室)；岳旺(266021 青岛大学 医学院药理学教研室)
关键词：尼卡地平；戊四唑；点燃模型；钙通道阻滞剂；癫痫
脑与神经疾病杂志000305 摘 要 目的：研究二氢吡啶类钙通道阻滞剂尼卡地平对大鼠戊四唑(PTZ)化学性点燃(kindling)的拮抗作用。 方法： 建立大鼠PTZ化学性点燃模型， 观察尼卡地平对PTZ点燃发展进程和点燃发作的影响。 结果： 尼卡地平2mg.kg-1ip明显抑制PTZ点燃的发展进程(P<0.001)； 2～20mg.kg-1ip显著抑制PTZ点燃发作(P<0.01), 并呈量效关系； 尼卡地平20mg.kg-1ip对小鼠PTZ惊厥有保护作用(P<0.01)。结论： 尼卡地平对PTZ化学性点燃的发展和发作有拮抗作用。
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Antagonism of nicardipine against pentylentetrazol kindling in rats
Wang Lei Zhang Fang Yue Wang
(Department of pharamacology,Medical college,Qingdao University,Qingdao 266021)
Abstract Objective： To study the antagonism of dihydropyridine calcium channel blocker nicardipine against pentylenetetrazol (PTZ) kindling. Methods: PTZ kindling model was established in rats, to investigate the effects of nicardipine on kindling development and kindled seizures.Results:Nicardipine 2mg.kg-1 ip significantly delayed the development of PTZ kindling (P<0.001)，2～20mg.kg-1 ip dose-dependently inhibited the seizure severity in PTZ kindled rats (P<0.01).Nicardipine 20 mg.kg-1 ip had protective effects in ptz-induced seizures of mice.Conclusion: The results suggested that nicardipine had antagonism against PTZ-kindling in rats.
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Key words nicardipine pentylenetetrazol kindling model calcium channel blocker epilepsy▲
尼卡地平(nicardipine)是二氢吡啶类L-型钙通道阻滞剂，是临床常用于治疗心、脑血管疾病的新一代钙拮抗剂。Ca2+内流与癫痫发作密切相关[1]。点燃(kindling)模型是研究人类慢性癫痫的理想模型[2]，包括脑核团电刺激点燃和化学性点燃，前者与复杂性部分性发作相似[3]，后者与原发性癫痫全身性发作相似[4]。其它癫痫模型的研究已有报道[5]，但戊四唑化学性点燃模型的作用未见报道，本文为戊四唑点燃模型研究尼卡地平的抗癫痫作用。
材料和方法
一、材料：Wistar大鼠，雌性，体重190±10g；昆明种小鼠，体重22±2g，雌雄兼有，均由青岛市药品检验所动物中心提供。
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尼卡地平(nicardipine)、戊四唑(pentylenetetrazole,PTZ)、Sigma公司产品；二甲基亚砜(dimethylsulphoxide,DMSO)、上海亨达精细化学品有限公司产品。
二、方法
1.大鼠PTZ化学性点燃模型的制备：用生理盐水新鲜配制1.75%的PTZ溶液，隔日ip亚惊厥剂量的PTZ 35mg.kg-1，注射容积为2mg.kg-1，观察每次ip后1h内的行为变化。行为发作指标按Ono法[6]分Ⅵ级，即0级：无反应；Ⅰ级：点头或头部抽搐；Ⅱ级：全身肌阵挛；Ⅲ级：头部抽搐伴前肢阵挛；Ⅳ级：阵挛惊厥伴后肢站立；Ⅴ级：跌倒；Ⅵ级：全身强直-阵挛性惊厥。连续出现5次Ⅱ级或Ⅱ级以上者，即为点燃(kindled)大鼠。
2.尼卡地平对PTZ点燃发展进程的影响：健康大鼠随机均分2组(n=8)，尼卡地平组2mg.kg-1ip，溶媒对照组ip等量DMSO，30min后ip PTZ35mg.kg-1，观察1h内Ono分级，记录发作潜伏期和持续时间，计算Ono分级与给药次数的关系。
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3.尼卡地平对PTZ点燃发作的作用：取点燃大鼠，分别ip尼卡地平2，5，7.5，10，20mg.kg-1(n=7)，30min后ip PTZ35mg.kg-1，注射容积均为2ml.kg-1，观察1h内Ono分级，计算给药前后Ⅵ级(全身强直-阵挛发作)发生百分率。实验前ip等量DMSO作自身对照。
4.尼卡地平对小鼠戊四唑惊厥的作用：小鼠随机均分4组(n=10)，分别ip尼卡地平2，10，20mg.kg-1或DMSO预处理。30min后sc惊厥剂量的PTZ85mg.kg-1[7]。PTZ需新鲜溶于生理盐水，注射容积均为10ml.kg-1。以出现阵挛性惊厥为指标，记录惊厥发生率、强直发生率及死亡率。
, 百拇医药 5.统计学处理：数据均用x±s，组间均数的比较采用配对t检验，记数资料用卡方检验。
结 果
1.尼卡平对PTZ点燃发展进程的抑制作用：对照组ip亚惊厥剂量PTZ，在25.0±3.0次后即出现Ⅴ-Ⅵ级反应，尼卡地平组则在ipPTZ44.6±2.6次后才达到Ⅴ-Ⅵ级，所需ipPTZ次数显著高于对照组(n=8,P<0.001)，尼卡地平对点燃达Ono各级所需的ipPTZ次数见表1。
表1 尼卡地平对PTZ点燃Ono各分级的影响(x±s，n=8)
Ⅰ-Ⅱ
Ⅲ-Ⅳ
Ⅴ-Ⅵ
DMSO
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5.6±1.4
17.0±1.2
25.0±3.0
尼卡地平
8.6±2.6**
25.4±4.0***
44.6±2.6***
与DMSO溶媒对照组比较**P<0.01,***P<0.001
2.尼卡地平对PTZ点燃发作的拮抗作用：尼卡地平2～20mg.kg-1ip显著降低点燃发作的Ono分级，并呈量效关系(n=7，P<0.01)。在10，20mg.kg-1ip时，OnoⅥ级反应百分率明显下降(P<0.01)，见表2。表2 尼卡地平对大鼠PTZ点燃的作用(x±s,n=7) 剂量
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(mg.kg-1)
Ono分级
Ⅵ级发作保护率
(%)
给药前
给药后
2.0
4.9±1.5
3.9±1.5
28.6
5.0
5.4±1.1
, 百拇医药
3.3±1.7*
57.1
7.5
5.1±1.5
3.0±2.1*
57.1
10.0
5.6±1.3
3.0±1.4**
71.4*
20.0
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2.4±0.8**
71.4**
与给药前对照组比较 *P<0.05,**P<0.01
3.尼卡地平对小鼠PTZ惊厥的抑制作用：尼卡地平10，20mg.kg-1ip，可分别显著延长惊厥发作阵挛相和强直相的潜伏期(P<0.01)，见表3。表3 尼卡地平对小鼠PTZ惊厥的保护作用(x±s,n=10)
剂量
(mg.kg-1)
阵挛潜伏期
, 百拇医药
(min)
强直潜伏期
(min)
DMSO
13.0±6.9
18.1±12.3
尼卡地平
2.0
18.2±8.6
31.6±9.4
10.0
23.8±10.9*
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43.9±22.4*
20.0
26.9±5.3***
48.6±21.8**
与DMSO溶媒对照组比较 *P<0.05,**P<0.01,***P<0.001
讨 论
化学性点燃是指反复给予亚惊厥剂量致惊剂，逐渐诱发的慢性癫痫发作[8]，PTZ作为工具药常用于化学性点燃[9]。该点燃模型可外周给药，在脑内不形成致痫灶[8]，一旦形成即具永久性，是研究人类原发性癫痫全身性发作的理想模型[4]。
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Ca2+不仅是重要的细胞内第二信使，还参与对多种递质合成与释放的调控。已证明Ca2+内流参与各种癫痫发作[1]。二氢吡啶类钙通道阻滞剂尼卡地平易通过血脑屏障。本文在PTZ化学性点燃模型的研究证明：尼卡地平在低剂量可明显抑制大鼠PTZ点燃发展的进程，2～20mg.kg-1ip能显著降低化学性点燃的发作强度，降低Ⅵ级反应的发生率，并呈量效关系；此外，对小鼠的PTZ急性惊厥也有保护作用。以上结果表明钙通道滞剂对急慢性癫痫发作有明显的拮抗作用。
多数抗癫痫药物的作用机制与Ca2+等离子通道和抑制性神经递质GABA密切相关[10]。本文用尼卡地平在PTZ点燃模型和杏仁核点燃模型获得相似的拮抗效果，并证明尼卡地平抗点燃效应与其阻断Ca2+内流、升高脑内GABA含量有关(待发表)，这与经典的抗癫痫药物苯妥英钠、苯巴比妥即阻断Ca2+通道又能提高GABA功能的新机理相吻合[11]。
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综上所述，尼卡地平在多种癫痫模型都有拮抗作用，又兼有抗脑缺血、缺氧和增强记忆等现有的抗癫痫药所不具有的优点，这对开发钙拮剂治疗某些癫痫的临床新用途有重要意义。
本题为山东省卫生厅青年基金资助课题(1999CA2CBA1)
参 考 文 献
1，Meldrum B, Champman AG, et al. Research Progress in epilepsy. London: Pitman, 1983∶133～138.
2，Moshe SL, Ludring N, et al. Recnt Advances in Epilepsy London: Churchil Livingstone, 1988∶21～28.
3，Albertson TE, Peterson SL, et al. Neuropharmacology, 1980,19∶643～652.
, 百拇医药
4，Loscher W, Schimidt D. Epilepsy Res, 1988,2∶145～156.
5，Meger FB, Anderson RE, et al. Epilepsia, 1990,31(1)∶68～74.
6，Palmer GC, Stagnitto ML, et al. Epilepsia, 1993,34(2)∶372～380.
7，徐叔云， 卞如濂主编. 药理实验方法学， 第二版， 人民卫生出版社， 1991，676～678.
8，Fisher RS. Animal model of the epilepsis. Brain Res. Rev, 1989,14∶245～278.
9，Tanabe K, Yue W, et al. Anticonvulsant activities and properties of topiramate. J Yonago Med Ass. 1991,42,330～346.
10，McNamara JO. In:Goodman & Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics. 9 th edition. New York: The McGraw-Hill Companies, 1996,461～486.
11，Ffrench-Mullen JMH, Barker JH, et al. J Neuroscience, 1993,13∶3211～3221.
(2000-03-06 收稿), http://www.100md.com