恶性肿瘤患者血浆孤啡肽水平的初步观察
作者：马晓兵 石湘芸 费宇行 吴醒身 刘桂芳
单位：海军总医院(北京 100037)
关键词：疼痛，肿瘤；孤啡肽
肿瘤990106 孤啡肽(Orphanin FQ,OFQ)是新近发现的一种神经肽，由17个氨基酸组成，分子量1810道尔顿。最初的动物实验发现侧脑室注射及鞘内注射OFQ，使小鼠运动减少，对伤害性刺激的反应性增高，即有痛敏作用，故又称痛敏肽(Nociceptin)。OFQ结构序列与强啡肽A相似，但在其N端缺少其它内源性阿片肽所特有的酪氨酸，表明OFQ与阿片家族有某种亲缘关系[1，2]。本文对孤啡肽在恶性肿瘤患者中的变化进行了观察，以探讨孤啡肽与恶性肿瘤的关系。
资料和方法
一、临床资料 1996年8月～1996年10月我院经病理证实恶性肿瘤患者35例，其中男性23例、女性12例，年龄最大82岁，最小34岁，平均58.3岁。根据肿瘤发生部位、TNM国际分期和临床分期[3]，肺癌17例，其中Ⅲ期7例，Ⅳ期10例；消化道癌15例，其中胃癌6例、结肠癌5例，食管癌4例。胃、结肠癌Ⅲ期7例，Ⅳ期4例，食管癌4例分期不确定；乳腺癌3例，Ⅰ期1例，Ⅱ期2例。根据主诉伴有不同程度疼痛12例，其中肿瘤所致疼痛10例，肿瘤治疗所致疼痛2例。无疼痛主诉23例。21例正在行抗肿瘤治疗，其中化疗13例，放疗6例，手术2例，其余14例暂行对症治疗。对照组19例，男9例，女10例，年龄19～58岁(平均40.1岁)，选自本院健康工作人员。
, http://www.100md.com
二、血样本处理 均于晨起取空腹肘静脉血5 ml，血液以EDTA-Na抗凝，Aprotinin抑制肽酶活性。4℃离心分离血浆，取血浆以三氟乙酸(TFA)6 ml振摇混匀后再离心，弃沉淀，取上清液过Sep-pak C18柱，用双蒸水冲洗后弃残液，再用75%甲醇(含0.1 % TFA)3 ml洗脱，洗脱液冷却干燥后置-70℃保存待测，测定时用PBS复溶。
三、实验方法 采用特异性放免分析法，药盒由美国Pheonix Pharmac公司惠赠，按说明书程序提供的常规放免测定方法操作。兔抗人OFQ血清与OFQ有100%交叉反应，与脑啡肽、强啡肽、β-内啡肽无交叉反应，标准曲线范围1～128 pg/管，非特异性结合(NSB)4.3%，最大结合率(Bo)36%，全部血样本在一次实验中测定完成。
四、统计学处理 测定结果以均数±标准误(
±s)表示，组间用方差分析及t检验。
, 百拇医药
结 果
一、肿瘤患者血清OFQ水平：本文测定的35例恶性肿瘤患者血浆OFQ含量为60.54±5.91 ng/L，明显高于对照组(8.83±1.31 ng/L)，并有显著性差异(t=3.2637，P<0.01)。
二、不同部位肿瘤患者在血浆OFQ水平(表1)。
表1 不同部位肿瘤患者血浆OFQ含量(±s,ng/L) 部位
例数
OFQ
肺 癌
17
, http://www.100md.com 60.00±7.32
食管癌
4
19.75±4.91
胃 癌
6
74.33±15.83
结肠癌
5
94.60±9.15
乳腺癌
3
33.67±17.51
, 百拇医药
三、肿瘤患者不同临床分期与血浆OFQ水平：用Student-Newman-Keuls法两两比较(见表2)。
四、肿瘤患者疼痛与不疼痛血浆OFQ水平：疼痛患者(n=12)血浆OFQ含量为79.00±8.08 ng/L，不疼痛患者(n=23)50.91±7.28 ng/L，差异显著(t=2.4604，P<0.05)。
五、抗肿瘤治疗组与未治疗组患者血浆OFQ水平：治疗组(n=21)血浆OFQ含量为56.83±7.99 ng/L，未治疗组(n=14)65.96±8.80 ng/L，无明显差异(t=0.7429,P>0.05)。表2 肿瘤患者临床分期与血浆OFQ水平(±s,ng/L) 肿瘤
分期
病例
, 百拇医药
OFQ
q1值
q2值
q3值
q4值
q5
胃肠
Ⅳ①
4
88.25±20.19
Ⅲ②
7
80.86±11.22
, http://www.100md.com
0.5463
肺
Ⅳ③
10
60.10±10.20
2.2047
1.9520
Ⅲ④
7
59.86±11.12
2.0988
1.8204
0.0226
, 百拇医药
乳腺
Ⅱ⑤
2
45.25±22.75
2.3008
2.0579
0.8883
0.8443
Ⅰ
1
10.5＃
食管
未⑥
, http://www.100md.com
4
19.75±4.9181
4.4887
4.5176
2.1603
2.9652
1.3644
注：q1①～②、①～③、①～④、①～⑤、①～⑥；q2②～③、②～④、②～⑤、②～⑥；q3③～④、③～⑤、③～⑥；q4④～⑤、④～⑥；q5 ⑤～⑥；
*P<0.05，＃未做统计处理讨 论
, 百拇医药
1994年Mollereau等克隆出一种新的阿片受体样(opioid receptor-like,ORL)受体[4]。1年后，发现其内源性配体OFQ，ORL受体在大脑皮质、海马、下丘脑等区域有丰富表达，推测该系统参与记忆、认知、内环境稳定等多种生理功能[4，5]。本工作观察了35例恶性肿瘤患者血浆OFQ水平的变化，结果表明恶性肿瘤患者血浆OFQ含量明显高于对照组(P<0.01)。提示OFQ可能参与肿瘤疾病的病理生理过程。本组患者随着临床分期的进展，血浆OFQ含量升高越明显，与病情进展程度和生活质量水平的下降有一定关系，推测躯体、精神心理状态等因素可能对OFQ水平构成影响，血浆OFQ水平升高的幅度有可能为判断癌症病情程度的指标之一。
在不同部位恶性肿瘤患者的血浆OFQ含量中以胃肠癌OFQ水平最高，食管癌OFQ含量最低，两组比较有显著差异(P<0.05)。有研究报道，血浆OFQ水平在肝癌、壶腹癌较高、食管癌亦较低，后者与本组结果一致[6]。动物实验显示，ORL受体的基因转录物mRNA在肝、脾、小肠和肾上腺有所分布[7]，OFQ可能与其它阿片类肽一样属于脑肠肽，参与部分消化系统器官功能调节，并与某些疾病的发病发展过程有关。但其变化的确切机制尚不了解，有待进一步研究阐明。
, 百拇医药
疼痛与不疼痛肿瘤患者的血浆OFQ含量比较有显著差异(P<0.05)。动物实验证明，OFQ主要为痛敏作用[1，2]，新近的动物试验提示，OFQ影响刺激和抑制活动，通过小鼠鞘内注射OFQ的甩尾试验，既可诱导痛敏作用，也可产生镇痛作用，其镇痛作用有明确剂量反应曲线，并很容易被阿片拮抗剂所逆转。显示OFQ存在不同受体介导的痛敏和镇痛作用[8，9]。本组疼痛肿瘤患者血浆OFQ含量升高，提示OFQ可能参与疼痛产生的病理过程。但是OFQ参与痛觉调控的确切机制还不甚清楚。有研究报道，癌症患者不同程度的疼痛对生活质量水平有明显影响[10]，因此血浆OFQ含量升高在有疼痛的肿瘤患者中，其痛觉调控机制可能起重要作用。
总之，OFQ作为一种神经递质，由于其受体的复杂性和中枢分布的广泛性，而具有广泛的生理功能。就其对肿瘤与疼痛关系的调控作用，同样也较为复杂，值得深入研究。
第一作者简介 马晓兵，男，大学本科，主治医师。
, 百拇医药
参 考 文 献
1 Reinscheid RK,Nothacker HP,Bourson A,et al. Orphanin FQ:a neuropeptide that activates an opioid-like G protein-coupled receptor.Science,1995,270:792
2 Meunier JC,Mollereau C,Toll L, et al. Isolation and structure of the endogenous agonist of opioid receptor-like ORL1 receptor.Nature,1995,377:532
3 孙 燕，周际昌.临床肿瘤内科手册(第三版).北京：人民卫生出版社，1996，7：151～154，186～213
, http://www.100md.com
4 Mollereau C,Parmentier M,Mailleux P, et al. ORL1,a novel member of the opioid receptor family cloning,functional expression and localization.FEBS Letters,1994,341：33
5 Sim LJ,Childres SR.Anatomical distribution of mu,delta,and kappa opioid-and onciceptin/orphanin FQ-stimulated 〔35S〕 guanylyl-5′-o-(gamma-thio)-triphosphate binding in guinea pig brain.J Comp Neurol,1997,386(4):562
6 叶剑雄，费宇行，崔立红，等.血浆孤啡肽变化的临床意义.海军总医院学报，1997，10(3)：131
, 百拇医药
7 方 园，韩济生.国内发现全新的阿片受体样受体及其内源性配体.生理科学进展.1996，27(3)：210
8 Rossi GC,Leventhal L,Bolan E,Pasternak GW.Pharmacological characterization of orphanin FQ/nociceptin and its fragments.J Pharmacol Exp Ther,1997,282(2):858
9 Hara N,Minami T,Okuda-Ashitaka E,Sugimoto T,Sakai M, et al. Characterization of nociceptin hyperalgesia and allodynia in conscious mice.British Journal Pharmacology,1997,121(3):401
10 罗 键，孙 燕，吴冠青，等.789例癌症患者疼痛及生活质量的研究.中国疼痛医学杂志，1996，2(3)：152
(收稿：1998-02-20), 百拇医药
单位：海军总医院(北京 100037)
关键词：疼痛，肿瘤；孤啡肽
肿瘤990106 孤啡肽(Orphanin FQ,OFQ)是新近发现的一种神经肽，由17个氨基酸组成，分子量1810道尔顿。最初的动物实验发现侧脑室注射及鞘内注射OFQ，使小鼠运动减少，对伤害性刺激的反应性增高，即有痛敏作用，故又称痛敏肽(Nociceptin)。OFQ结构序列与强啡肽A相似，但在其N端缺少其它内源性阿片肽所特有的酪氨酸，表明OFQ与阿片家族有某种亲缘关系[1，2]。本文对孤啡肽在恶性肿瘤患者中的变化进行了观察，以探讨孤啡肽与恶性肿瘤的关系。
资料和方法
一、临床资料 1996年8月～1996年10月我院经病理证实恶性肿瘤患者35例，其中男性23例、女性12例，年龄最大82岁，最小34岁，平均58.3岁。根据肿瘤发生部位、TNM国际分期和临床分期[3]，肺癌17例，其中Ⅲ期7例，Ⅳ期10例；消化道癌15例，其中胃癌6例、结肠癌5例，食管癌4例。胃、结肠癌Ⅲ期7例，Ⅳ期4例，食管癌4例分期不确定；乳腺癌3例，Ⅰ期1例，Ⅱ期2例。根据主诉伴有不同程度疼痛12例，其中肿瘤所致疼痛10例，肿瘤治疗所致疼痛2例。无疼痛主诉23例。21例正在行抗肿瘤治疗，其中化疗13例，放疗6例，手术2例，其余14例暂行对症治疗。对照组19例，男9例，女10例，年龄19～58岁(平均40.1岁)，选自本院健康工作人员。
, http://www.100md.com
二、血样本处理 均于晨起取空腹肘静脉血5 ml，血液以EDTA-Na抗凝，Aprotinin抑制肽酶活性。4℃离心分离血浆，取血浆以三氟乙酸(TFA)6 ml振摇混匀后再离心，弃沉淀，取上清液过Sep-pak C18柱，用双蒸水冲洗后弃残液，再用75%甲醇(含0.1 % TFA)3 ml洗脱，洗脱液冷却干燥后置-70℃保存待测，测定时用PBS复溶。
三、实验方法 采用特异性放免分析法，药盒由美国Pheonix Pharmac公司惠赠，按说明书程序提供的常规放免测定方法操作。兔抗人OFQ血清与OFQ有100%交叉反应，与脑啡肽、强啡肽、β-内啡肽无交叉反应，标准曲线范围1～128 pg/管，非特异性结合(NSB)4.3%，最大结合率(Bo)36%，全部血样本在一次实验中测定完成。
四、统计学处理 测定结果以均数±标准误(
±s)表示，组间用方差分析及t检验。, 百拇医药
结 果
一、肿瘤患者血清OFQ水平：本文测定的35例恶性肿瘤患者血浆OFQ含量为60.54±5.91 ng/L，明显高于对照组(8.83±1.31 ng/L)，并有显著性差异(t=3.2637，P<0.01)。
二、不同部位肿瘤患者在血浆OFQ水平(表1)。
表1 不同部位肿瘤患者血浆OFQ含量(
±s,ng/L) 部位例数
OFQ
肺 癌
17
, http://www.100md.com 60.00±7.32
食管癌
4
19.75±4.91
胃 癌
6
74.33±15.83
结肠癌
5
94.60±9.15
乳腺癌
3
33.67±17.51
, 百拇医药
三、肿瘤患者不同临床分期与血浆OFQ水平：用Student-Newman-Keuls法两两比较(见表2)。
四、肿瘤患者疼痛与不疼痛血浆OFQ水平：疼痛患者(n=12)血浆OFQ含量为79.00±8.08 ng/L，不疼痛患者(n=23)50.91±7.28 ng/L，差异显著(t=2.4604，P<0.05)。
五、抗肿瘤治疗组与未治疗组患者血浆OFQ水平：治疗组(n=21)血浆OFQ含量为56.83±7.99 ng/L，未治疗组(n=14)65.96±8.80 ng/L，无明显差异(t=0.7429,P>0.05)。表2 肿瘤患者临床分期与血浆OFQ水平(
±s,ng/L) 肿瘤分期
病例
, 百拇医药
OFQ
q1值
q2值
q3值
q4值
q5
胃肠
Ⅳ①
4
88.25±20.19
Ⅲ②
7
80.86±11.22
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0.5463
肺
Ⅳ③
10
60.10±10.20
2.2047
1.9520
Ⅲ④
7
59.86±11.12
2.0988
1.8204
0.0226
, 百拇医药
乳腺
Ⅱ⑤
2
45.25±22.75
2.3008
2.0579
0.8883
0.8443
Ⅰ
1
10.5＃
食管
未⑥
, http://www.100md.com
4
19.75±4.9181
4.4887
4.5176
2.1603
2.9652
1.3644
注：q1①～②、①～③、①～④、①～⑤、①～⑥；q2②～③、②～④、②～⑤、②～⑥；q3③～④、③～⑤、③～⑥；q4④～⑤、④～⑥；q5 ⑤～⑥；
*P<0.05，＃未做统计处理讨 论
, 百拇医药
1994年Mollereau等克隆出一种新的阿片受体样(opioid receptor-like,ORL)受体[4]。1年后，发现其内源性配体OFQ，ORL受体在大脑皮质、海马、下丘脑等区域有丰富表达，推测该系统参与记忆、认知、内环境稳定等多种生理功能[4，5]。本工作观察了35例恶性肿瘤患者血浆OFQ水平的变化，结果表明恶性肿瘤患者血浆OFQ含量明显高于对照组(P<0.01)。提示OFQ可能参与肿瘤疾病的病理生理过程。本组患者随着临床分期的进展，血浆OFQ含量升高越明显，与病情进展程度和生活质量水平的下降有一定关系，推测躯体、精神心理状态等因素可能对OFQ水平构成影响，血浆OFQ水平升高的幅度有可能为判断癌症病情程度的指标之一。
在不同部位恶性肿瘤患者的血浆OFQ含量中以胃肠癌OFQ水平最高，食管癌OFQ含量最低，两组比较有显著差异(P<0.05)。有研究报道，血浆OFQ水平在肝癌、壶腹癌较高、食管癌亦较低，后者与本组结果一致[6]。动物实验显示，ORL受体的基因转录物mRNA在肝、脾、小肠和肾上腺有所分布[7]，OFQ可能与其它阿片类肽一样属于脑肠肽，参与部分消化系统器官功能调节，并与某些疾病的发病发展过程有关。但其变化的确切机制尚不了解，有待进一步研究阐明。
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疼痛与不疼痛肿瘤患者的血浆OFQ含量比较有显著差异(P<0.05)。动物实验证明，OFQ主要为痛敏作用[1，2]，新近的动物试验提示，OFQ影响刺激和抑制活动，通过小鼠鞘内注射OFQ的甩尾试验，既可诱导痛敏作用，也可产生镇痛作用，其镇痛作用有明确剂量反应曲线，并很容易被阿片拮抗剂所逆转。显示OFQ存在不同受体介导的痛敏和镇痛作用[8，9]。本组疼痛肿瘤患者血浆OFQ含量升高，提示OFQ可能参与疼痛产生的病理过程。但是OFQ参与痛觉调控的确切机制还不甚清楚。有研究报道，癌症患者不同程度的疼痛对生活质量水平有明显影响[10]，因此血浆OFQ含量升高在有疼痛的肿瘤患者中，其痛觉调控机制可能起重要作用。
总之，OFQ作为一种神经递质，由于其受体的复杂性和中枢分布的广泛性，而具有广泛的生理功能。就其对肿瘤与疼痛关系的调控作用，同样也较为复杂，值得深入研究。
第一作者简介 马晓兵，男，大学本科，主治医师。
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参 考 文 献
1 Reinscheid RK,Nothacker HP,Bourson A,et al. Orphanin FQ:a neuropeptide that activates an opioid-like G protein-coupled receptor.Science,1995,270:792
2 Meunier JC,Mollereau C,Toll L, et al. Isolation and structure of the endogenous agonist of opioid receptor-like ORL1 receptor.Nature,1995,377:532
3 孙 燕，周际昌.临床肿瘤内科手册(第三版).北京：人民卫生出版社，1996，7：151～154，186～213
, http://www.100md.com
4 Mollereau C,Parmentier M,Mailleux P, et al. ORL1,a novel member of the opioid receptor family cloning,functional expression and localization.FEBS Letters,1994,341：33
5 Sim LJ,Childres SR.Anatomical distribution of mu,delta,and kappa opioid-and onciceptin/orphanin FQ-stimulated 〔35S〕 guanylyl-5′-o-(gamma-thio)-triphosphate binding in guinea pig brain.J Comp Neurol,1997,386(4):562
6 叶剑雄，费宇行，崔立红，等.血浆孤啡肽变化的临床意义.海军总医院学报，1997，10(3)：131
, 百拇医药
7 方 园，韩济生.国内发现全新的阿片受体样受体及其内源性配体.生理科学进展.1996，27(3)：210
8 Rossi GC,Leventhal L,Bolan E,Pasternak GW.Pharmacological characterization of orphanin FQ/nociceptin and its fragments.J Pharmacol Exp Ther,1997,282(2):858
9 Hara N,Minami T,Okuda-Ashitaka E,Sugimoto T,Sakai M, et al. Characterization of nociceptin hyperalgesia and allodynia in conscious mice.British Journal Pharmacology,1997,121(3):401
10 罗 键，孙 燕，吴冠青，等.789例癌症患者疼痛及生活质量的研究.中国疼痛医学杂志，1996，2(3)：152
(收稿：1998-02-20), 百拇医药