N-甲基亚硝基脲诱发大白鼠膀胱肿瘤病理学动态观察
作者：刘红耀 张旭 刘春 王东文 米振国 佟锦 李春华 李柄太 范健
单位：刘红耀(山西医科大学第一医院(030001))；张旭(山西医科大学第一医院(030001))；刘春(山西医科大学第一医院(030001))；王东文(山西医科大学第一医院(030001))；米振国(山西医科大学第一医院(030001))；佟锦(山西医科大学第一医院(030001))；李春华(山西医科大学)；李柄太(山西医科大学)；范健(山西医科大学)
关键词：化学致癌剂；N-甲基亚硝基脲；动物模型；膀胱肿瘤
山西医药杂志000111 摘 要：目的 研究N-甲基亚硝基脲(MNU)诱发大白鼠膀胱肿瘤的发生、发 展过程。方法 以MNU为诱癌剂，进行大白鼠膀胱灌注，对其诱发的膀胱肿 瘤过程的不同时期进行动态观察。结果 第1次MNU灌注后第2周8/10只出现 单纯增生，第6周9/10只表现为乳头状肿瘤，第8周10/10只出现膀胱癌，主要为表浅膀胱癌 ，第10周6/10只为浸润癌。结论 MNU诱发的肿瘤发生、发展经历了从单纯 增生→乳头状、结节状良性增生→乳头状肿瘤→非浸润癌→浸润癌这样一个典型病理
, http://www.100md.com
过程。
MNU-induced bladder tumor and its pathologically dynamic obser vations in rats
Liu Hongyao,Zhang Xu,Liu Chun,et al
(The First H ospital of Shanxi Medical University,Taiyuan，030001,China)
Abstract：Objective To study the pathologically dynamic a lterations in experimental animal model of bladder tumors induced by MNU.M ethods Bladder tumors were induced in female Wistar rats by intravesical irrigation of the carcinogen,N-methyl-nitrosourea (MNU).The morphological alte rations of bladder epithelial cells were studied by light microscopy on weeks 2, 4,6,8 and 10 after the MNU irrigation.Results Since the MNU irrigat ion 8 of the ten rats had simple hyperplasia on the second week;9 of them had be nign papilloma on the sixth week;all of them had carcinoma on the eighth week;an d 6 of them suffered from invasive carcinoma on the tenth week.Conclusion The study showed there runs a typical pathologic process induced by MNU as follows：simple hyperplasia,papillary or nodular hyperplasia,benign papilloma ,noninvasive carcinoma and invasive carcinoma.The histopathological features of animal are basically similar to those of the human.
, 百拇医药
Key words：Carcinogen; N-methyl-nitrosourea; Experimen tal animal model； Bladder tumor
膀胱肿瘤是泌尿外科最常见的肿瘤，其防治研究需要建立合适 的肿瘤模型，N-甲基亚硝基脲(MNU)为直接致癌剂，自Hicks首次用来诱导膀胱肿瘤以来， 国外对此研究较多，国内研究较少，本实验就MNU诱发的大白鼠膀胱肿瘤的发生、发展过程 进行了动态观察，现报告如下。
1 材料与方法
1.1 试剂
致癌剂N-甲基亚硝基脲(MNU)，由美国Sigma公司生产，冷藏于-20 ℃冰箱中。
1.2 实验动物及分组
选用Wistar雌性大白鼠，6～7周龄，共60只，体重(160±16) g。将其随机分为两组。A组( 诱癌组)50只MNU膀胱灌注每次2 mg/只，每2周1次，共4次，MNU总量8 mg；B组(对照组)10只 不做特殊处理。
, 百拇医药
1.3 实验方法
1.3.1 MNU溶液的配制：在实验前一天将MNU置于4 ℃冰箱中过夜，以pH=6.0的枸橼酸缓 冲液为溶剂，配成浓度为20 g/L。
1.3.2 MNU膀胱灌注法：用0.6%的戊巴比妥钠腹 腔注射麻醉(30 mg/kg)，麻妥后用1‰ 的新洁尔灭消毒尿道外口，用消毒后的硬膜外导管导尿后，膀胱灌注。
1.3.3 标本采集：于第1次灌注MNU后第2、4、6、8、10周各取诱癌组10只大白鼠，对照 组2只大白鼠将其处死后，立即导尿(尿液做大体肉眼及镜下观察)后注入生理盐水约2 mL， 使膀胱处于扩张状态，剖腹显露膀胱，将其完整切除，纵行切开，观察其大体变化，在病变 明显处多处取材，送光镜观察。
1.3.4 光镜标本制备：将新鲜组织块于10%甲醛中固定24 h，常规石蜡包埋、切片4～5 μm，HE染色。
, 百拇医药
2 结 果
2.1 一般观察
所有灌注MNU的大白鼠，于麻醉后2～2.5 h排尿，4～6 h恢复活动，约12 h后恢复正常。仅 A组1只导尿后，尿道外口溢血，3 d后消失。所有动物处死前，体重、活动无明显差异。
2.2 病理观察
2.2.1 肉眼大体观察：B组所有大白鼠膀胱壁粘膜光滑，新鲜标本为粉红色、有光泽，甲 醛固定后为白色，膀胱内无溃疡，充血、憩室及赘生物。A组50只大白鼠膀胱壁粘膜均发生 变化，且随MNU作用时间的延长、量的增多，其变化越来越明显：第2～4周膀胱内可见有点 状、片状出血，局部粘膜隆起；第6～8周膀胱壁增厚，其表面可见多发的米粒状小乳头状肿 物。第10周膀胱均见肿物，有的为占据整个膀胱腔，呈菜花状，乳头短，呈红色，局部为竭 色，有的表面溃疡，肿物活动差。
, 百拇医药
2.2.2 光镜结果：B组所有大白鼠膀胱粘膜上皮由2～3层移行上皮细胞组成，细胞扁平大 小一致，排列有序，核圆形、浅染，粘膜细胞核浆比例1∶4～6。由内向外依次为粘膜层、 固有层、肌层和浆肌层。A组大白鼠膀胱壁粘膜均渐进性发生不同程度变化，表现为：第2周 膀胱粘膜层增厚5～7层，基底细胞活跃，可达2～3层，但全层极向分明，无异形性，细胞大 小、核浆比例基本正常。第4周镜下为膀胱粘膜增厚，乳头为圆锥形，乳头项窄底宽，细胞 排列一致，极向分明，细胞无异形性。第6周可见乳头状瘤，乳头表面被覆上皮细胞与正常 粘膜上皮结构基本相同3～5层，分化正常，排列整齐，乳头质纤细，由少量结缔组织构成， 含较多薄壁毛细血管。第8周发生癌变，表现为乳头彼此粘连，细胞数目5层以上，核排列紧 密大小不一，间质纤细，由少量结缔组织构成，核染色呈粗颗粒状堆积核膜下。第10周异形 明显，表现为细胞大小不一，排列紊乱，极向消失，核大，形态不一，核畸形，核染色质呈 粗粒状，分布不均匀，常堆积于核膜下，核膜增厚，核仁肥大，核浆比例大，可见核分裂象 ，有的表现为癌细胞高度未分化，移行上皮结构特征完全消失，呈弥漫分布或排列成实体性 癌巢，癌细胞多形性明显，大小悬殊。癌细胞侵犯粘膜固有层及肌层。除A组3只大白鼠输尿 管下端局部增厚，病理为增生，及1只大白鼠左肾积水，病理变化为肾萎缩，其余各组其他 脏器未见异常，淋巴结未见转移灶。
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3 讨 论
早在1938年文献[1]等用己萘胺喂狗诱发了膀胱肿瘤。文献[2，3]1964年报道了在饮水 中加用N-丁基-N-(4-羟丁基)亚硝胺(BBN)40周诱发了膀胱肿瘤，1967年Erturk[1 ]报道了N-[4-(5-硝基-2-呋喃基)-2-噻唑基]甲酰胺(FANFT)诱发膀胱肿瘤，但 上述方法均需经口给予，因饮水瓶常有漏水现象，用量不易确切，不利于对照和统计处理， 且有需时长(20周)、费用昂贵等缺点，Hicks[4]首次报道了MNU经膀胱灌注诱发了 膀胱肿瘤实验模型，与BBN、FANFT相比较，MNU诱发肿瘤方法简单，用量少，诱瘤需时短。
3.1 MNU诱发大白鼠膀胱肿瘤的病理过程
MNU分子式CH3N(NO)CONH2，属亚硝基化合物中的亚硝酰胺类，为直接致癌剂，多数学者 认为与细胞内某些结构的烷基化有关，它能使细胞大分子，特别是核酸的鸟嘌呤分子发生烷 化作用(甲基化作用)。MNU自发分解与溶液pH值有关[5]，pH=6时其半衰期为300 min，pH=7时72 min，pH=8时为6 min。本实验采用pH=6枸橼酸缓冲液为溶剂，30 min内用完。 其半衰期较Hicks[4]采用的pH=7的缓冲液相对长，确保MNU在膀胱内的作用时间， 增强了MNU的诱癌作用，本实验采用戊巴比妥钠麻醉，经尿道用硬膜外导管导尿后灌入MNU， 95%的大白鼠于麻醉后2～2.5 h方排尿，满足MNU在膀胱内保留2 h，排除了Serers等[ 5]及Hicks[4]灌入后钳夹尿道2 h可能造成的损伤。本实验采用多次灌注法，符 合Rous和Kidd提出的恶性肿瘤发生的两个阶段即启动阶段及促癌阶段理论，而这一理论对临 床及预防医学中防癌、治癌有指导意义。本实验采用MNU多次膀胱灌注法，大白鼠膀胱壁粘 膜渐进性发生不同程度变化，其肿瘤发生、发展与人类肿瘤相似经历了从单纯增生→乳头状 、结节状良性增生→乳头状肿瘤→非浸润癌→浸润癌这样一个典型病理过程。在给药6～8周 的标本中可见上述各种不同阶段的病理变化同时存在，提示大白鼠膀胱肿瘤在时间与空间上 具有多病灶的特点。Irving等[6]研究表明，MNU分次灌入膀胱内其诱癌率与MNU总 量或灌入次数正相关，且诱癌需时与MNU总剂量负相关。Serers等[5]报道了少量多 次MNU灌入膀胱其肿瘤发生率较大量少次的显著增高。
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3.2 MNU诱癌的特异性及人膀胱肿瘤性质比较
本实验诱癌组结果表明，除膀胱外其他脏器未见肿瘤发生，仅3只输尿管下端局部增厚(1只 管腔狭窄致肾积水)病理检查均为增生，考虑与反流有关，与国外Hicks及Serers一致，证明 MNU膀胱灌注具有膀胱特异性。本实验诱导的膀胱肿瘤组织学形态及病理特征与人膀胱肿瘤 十分相似，都来自粘膜上皮，其中移行上皮癌占80%，较人类膀胱肿瘤中移行上皮癌(90%)低 ，与国外观察相同，20%为鳞癌及鳞癌与移行细胞混合，较人类较高(6%～7%)，考虑与MNU局 部刺激使细胞鳞状化生有关，但观察膀胱癌全切除标本发现膀胱癌中50%为混合性肿瘤。其 中移行上皮和鳞状细胞混合肿瘤为36%。本实验诱癌组未见腺瘤，人类膀胱癌中腺癌最少， 仅约占1%～2%。
总之，MNU诱发的大白鼠膀胱肿瘤病理过程可分为3个阶段，即：上皮增生期(2～3周)、乳头 状瘤形成期(6～8周)和癌变期(8～10周)。
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基金项目：青年基金课题(991024)
作者简介：刘红耀，男，1965年5月生，主 治医师，山西医科大学第一医院，030001
参考文献：
[1] Erturk E,Price JH,Cohen S,et al.The production of carcinomas o f the urinary bladder in rats by feeding N-(4-5-nitro-2-furyl)-2-thiazoly formamide.Cancer Res,1967,27:1988-1998
[2] Ito N,Hiasa Y,Tamai A,et al.Histogensis of urinary bladder tum ors induced by N-butyl-N(4-hydroxybutyl)nitrosamine in rats.GANN,1969,60:401 -410
, 百拇医药
[3] Druckrey H.Selekture Enzengung von Blasenkrebs an Ratten durch Dibutyl and N-Butyl-N-butanol (4)-nitrosamin.Z Krebsforsch,1964,66:280
[4] Hicks RM.Multistage carcinogenesis in the urinary bladder.Br M ed Bull,1980,36:39-46
[5] Serers NJ,Barnes SH,Wright R,et al.Induction of bladder cancer in rats by fractionated intravesicular doses of N-methyl-N-nitrosourea.Br J Cancer,1982,45:337-350
[6] Irving CC,Cox R,Murphy WM,et al.Influence of dose of N-nitros ourea on the induction of urinary bladder cancer in rats.Cancer letter,1979,8(1):3-7
收稿日期：1999-11-02, http://www.100md.com
单位：刘红耀(山西医科大学第一医院(030001))；张旭(山西医科大学第一医院(030001))；刘春(山西医科大学第一医院(030001))；王东文(山西医科大学第一医院(030001))；米振国(山西医科大学第一医院(030001))；佟锦(山西医科大学第一医院(030001))；李春华(山西医科大学)；李柄太(山西医科大学)；范健(山西医科大学)
关键词：化学致癌剂；N-甲基亚硝基脲；动物模型；膀胱肿瘤
山西医药杂志000111 摘 要：目的 研究N-甲基亚硝基脲(MNU)诱发大白鼠膀胱肿瘤的发生、发 展过程。方法 以MNU为诱癌剂，进行大白鼠膀胱灌注，对其诱发的膀胱肿 瘤过程的不同时期进行动态观察。结果 第1次MNU灌注后第2周8/10只出现 单纯增生，第6周9/10只表现为乳头状肿瘤，第8周10/10只出现膀胱癌，主要为表浅膀胱癌 ，第10周6/10只为浸润癌。结论 MNU诱发的肿瘤发生、发展经历了从单纯 增生→乳头状、结节状良性增生→乳头状肿瘤→非浸润癌→浸润癌这样一个典型病理
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过程。
MNU-induced bladder tumor and its pathologically dynamic obser vations in rats
Liu Hongyao,Zhang Xu,Liu Chun,et al
(The First H ospital of Shanxi Medical University,Taiyuan，030001,China)
Abstract：Objective To study the pathologically dynamic a lterations in experimental animal model of bladder tumors induced by MNU.M ethods Bladder tumors were induced in female Wistar rats by intravesical irrigation of the carcinogen,N-methyl-nitrosourea (MNU).The morphological alte rations of bladder epithelial cells were studied by light microscopy on weeks 2, 4,6,8 and 10 after the MNU irrigation.Results Since the MNU irrigat ion 8 of the ten rats had simple hyperplasia on the second week;9 of them had be nign papilloma on the sixth week;all of them had carcinoma on the eighth week;an d 6 of them suffered from invasive carcinoma on the tenth week.Conclusion The study showed there runs a typical pathologic process induced by MNU as follows：simple hyperplasia,papillary or nodular hyperplasia,benign papilloma ,noninvasive carcinoma and invasive carcinoma.The histopathological features of animal are basically similar to those of the human.
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Key words：Carcinogen; N-methyl-nitrosourea; Experimen tal animal model； Bladder tumor
膀胱肿瘤是泌尿外科最常见的肿瘤，其防治研究需要建立合适 的肿瘤模型，N-甲基亚硝基脲(MNU)为直接致癌剂，自Hicks首次用来诱导膀胱肿瘤以来， 国外对此研究较多，国内研究较少，本实验就MNU诱发的大白鼠膀胱肿瘤的发生、发展过程 进行了动态观察，现报告如下。
1 材料与方法
1.1 试剂
致癌剂N-甲基亚硝基脲(MNU)，由美国Sigma公司生产，冷藏于-20 ℃冰箱中。
1.2 实验动物及分组
选用Wistar雌性大白鼠，6～7周龄，共60只，体重(160±16) g。将其随机分为两组。A组( 诱癌组)50只MNU膀胱灌注每次2 mg/只，每2周1次，共4次，MNU总量8 mg；B组(对照组)10只 不做特殊处理。
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1.3 实验方法
1.3.1 MNU溶液的配制：在实验前一天将MNU置于4 ℃冰箱中过夜，以pH=6.0的枸橼酸缓 冲液为溶剂，配成浓度为20 g/L。
1.3.2 MNU膀胱灌注法：用0.6%的戊巴比妥钠腹 腔注射麻醉(30 mg/kg)，麻妥后用1‰ 的新洁尔灭消毒尿道外口，用消毒后的硬膜外导管导尿后，膀胱灌注。
1.3.3 标本采集：于第1次灌注MNU后第2、4、6、8、10周各取诱癌组10只大白鼠，对照 组2只大白鼠将其处死后，立即导尿(尿液做大体肉眼及镜下观察)后注入生理盐水约2 mL， 使膀胱处于扩张状态，剖腹显露膀胱，将其完整切除，纵行切开，观察其大体变化，在病变 明显处多处取材，送光镜观察。
1.3.4 光镜标本制备：将新鲜组织块于10%甲醛中固定24 h，常规石蜡包埋、切片4～5 μm，HE染色。
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2 结 果
2.1 一般观察
所有灌注MNU的大白鼠，于麻醉后2～2.5 h排尿，4～6 h恢复活动，约12 h后恢复正常。仅 A组1只导尿后，尿道外口溢血，3 d后消失。所有动物处死前，体重、活动无明显差异。
2.2 病理观察
2.2.1 肉眼大体观察：B组所有大白鼠膀胱壁粘膜光滑，新鲜标本为粉红色、有光泽，甲 醛固定后为白色，膀胱内无溃疡，充血、憩室及赘生物。A组50只大白鼠膀胱壁粘膜均发生 变化，且随MNU作用时间的延长、量的增多，其变化越来越明显：第2～4周膀胱内可见有点 状、片状出血，局部粘膜隆起；第6～8周膀胱壁增厚，其表面可见多发的米粒状小乳头状肿 物。第10周膀胱均见肿物，有的为占据整个膀胱腔，呈菜花状，乳头短，呈红色，局部为竭 色，有的表面溃疡，肿物活动差。
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2.2.2 光镜结果：B组所有大白鼠膀胱粘膜上皮由2～3层移行上皮细胞组成，细胞扁平大 小一致，排列有序，核圆形、浅染，粘膜细胞核浆比例1∶4～6。由内向外依次为粘膜层、 固有层、肌层和浆肌层。A组大白鼠膀胱壁粘膜均渐进性发生不同程度变化，表现为：第2周 膀胱粘膜层增厚5～7层，基底细胞活跃，可达2～3层，但全层极向分明，无异形性，细胞大 小、核浆比例基本正常。第4周镜下为膀胱粘膜增厚，乳头为圆锥形，乳头项窄底宽，细胞 排列一致，极向分明，细胞无异形性。第6周可见乳头状瘤，乳头表面被覆上皮细胞与正常 粘膜上皮结构基本相同3～5层，分化正常，排列整齐，乳头质纤细，由少量结缔组织构成， 含较多薄壁毛细血管。第8周发生癌变，表现为乳头彼此粘连，细胞数目5层以上，核排列紧 密大小不一，间质纤细，由少量结缔组织构成，核染色呈粗颗粒状堆积核膜下。第10周异形 明显，表现为细胞大小不一，排列紊乱，极向消失，核大，形态不一，核畸形，核染色质呈 粗粒状，分布不均匀，常堆积于核膜下，核膜增厚，核仁肥大，核浆比例大，可见核分裂象 ，有的表现为癌细胞高度未分化，移行上皮结构特征完全消失，呈弥漫分布或排列成实体性 癌巢，癌细胞多形性明显，大小悬殊。癌细胞侵犯粘膜固有层及肌层。除A组3只大白鼠输尿 管下端局部增厚，病理为增生，及1只大白鼠左肾积水，病理变化为肾萎缩，其余各组其他 脏器未见异常，淋巴结未见转移灶。
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3 讨 论
早在1938年文献[1]等用己萘胺喂狗诱发了膀胱肿瘤。文献[2，3]1964年报道了在饮水 中加用N-丁基-N-(4-羟丁基)亚硝胺(BBN)40周诱发了膀胱肿瘤，1967年Erturk[1 ]报道了N-[4-(5-硝基-2-呋喃基)-2-噻唑基]甲酰胺(FANFT)诱发膀胱肿瘤，但 上述方法均需经口给予，因饮水瓶常有漏水现象，用量不易确切，不利于对照和统计处理， 且有需时长(20周)、费用昂贵等缺点，Hicks[4]首次报道了MNU经膀胱灌注诱发了 膀胱肿瘤实验模型，与BBN、FANFT相比较，MNU诱发肿瘤方法简单，用量少，诱瘤需时短。
3.1 MNU诱发大白鼠膀胱肿瘤的病理过程
MNU分子式CH3N(NO)CONH2，属亚硝基化合物中的亚硝酰胺类，为直接致癌剂，多数学者 认为与细胞内某些结构的烷基化有关，它能使细胞大分子，特别是核酸的鸟嘌呤分子发生烷 化作用(甲基化作用)。MNU自发分解与溶液pH值有关[5]，pH=6时其半衰期为300 min，pH=7时72 min，pH=8时为6 min。本实验采用pH=6枸橼酸缓冲液为溶剂，30 min内用完。 其半衰期较Hicks[4]采用的pH=7的缓冲液相对长，确保MNU在膀胱内的作用时间， 增强了MNU的诱癌作用，本实验采用戊巴比妥钠麻醉，经尿道用硬膜外导管导尿后灌入MNU， 95%的大白鼠于麻醉后2～2.5 h方排尿，满足MNU在膀胱内保留2 h，排除了Serers等[ 5]及Hicks[4]灌入后钳夹尿道2 h可能造成的损伤。本实验采用多次灌注法，符 合Rous和Kidd提出的恶性肿瘤发生的两个阶段即启动阶段及促癌阶段理论，而这一理论对临 床及预防医学中防癌、治癌有指导意义。本实验采用MNU多次膀胱灌注法，大白鼠膀胱壁粘 膜渐进性发生不同程度变化，其肿瘤发生、发展与人类肿瘤相似经历了从单纯增生→乳头状 、结节状良性增生→乳头状肿瘤→非浸润癌→浸润癌这样一个典型病理过程。在给药6～8周 的标本中可见上述各种不同阶段的病理变化同时存在，提示大白鼠膀胱肿瘤在时间与空间上 具有多病灶的特点。Irving等[6]研究表明，MNU分次灌入膀胱内其诱癌率与MNU总 量或灌入次数正相关，且诱癌需时与MNU总剂量负相关。Serers等[5]报道了少量多 次MNU灌入膀胱其肿瘤发生率较大量少次的显著增高。
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3.2 MNU诱癌的特异性及人膀胱肿瘤性质比较
本实验诱癌组结果表明，除膀胱外其他脏器未见肿瘤发生，仅3只输尿管下端局部增厚(1只 管腔狭窄致肾积水)病理检查均为增生，考虑与反流有关，与国外Hicks及Serers一致，证明 MNU膀胱灌注具有膀胱特异性。本实验诱导的膀胱肿瘤组织学形态及病理特征与人膀胱肿瘤 十分相似，都来自粘膜上皮，其中移行上皮癌占80%，较人类膀胱肿瘤中移行上皮癌(90%)低 ，与国外观察相同，20%为鳞癌及鳞癌与移行细胞混合，较人类较高(6%～7%)，考虑与MNU局 部刺激使细胞鳞状化生有关，但观察膀胱癌全切除标本发现膀胱癌中50%为混合性肿瘤。其 中移行上皮和鳞状细胞混合肿瘤为36%。本实验诱癌组未见腺瘤，人类膀胱癌中腺癌最少， 仅约占1%～2%。
总之，MNU诱发的大白鼠膀胱肿瘤病理过程可分为3个阶段，即：上皮增生期(2～3周)、乳头 状瘤形成期(6～8周)和癌变期(8～10周)。
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基金项目：青年基金课题(991024)
作者简介：刘红耀，男，1965年5月生，主 治医师，山西医科大学第一医院，030001
参考文献：
[1] Erturk E,Price JH,Cohen S,et al.The production of carcinomas o f the urinary bladder in rats by feeding N-(4-5-nitro-2-furyl)-2-thiazoly formamide.Cancer Res,1967,27:1988-1998
[2] Ito N,Hiasa Y,Tamai A,et al.Histogensis of urinary bladder tum ors induced by N-butyl-N(4-hydroxybutyl)nitrosamine in rats.GANN,1969,60:401 -410
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[3] Druckrey H.Selekture Enzengung von Blasenkrebs an Ratten durch Dibutyl and N-Butyl-N-butanol (4)-nitrosamin.Z Krebsforsch,1964,66:280
[4] Hicks RM.Multistage carcinogenesis in the urinary bladder.Br M ed Bull,1980,36:39-46
[5] Serers NJ,Barnes SH,Wright R,et al.Induction of bladder cancer in rats by fractionated intravesicular doses of N-methyl-N-nitrosourea.Br J Cancer,1982,45:337-350
[6] Irving CC,Cox R,Murphy WM,et al.Influence of dose of N-nitros ourea on the induction of urinary bladder cancer in rats.Cancer letter,1979,8(1):3-7
收稿日期：1999-11-02, http://www.100md.com