细胞粘附分子在大肠癌中的表达及其临床意义
作者：赵玛丽 姚宏 平苏萍 张庆升 王虹 王全红 袁瑞香
单位：赵玛丽(太原市人民医院(030001))；姚宏(太原市人民医院(030001))；平苏萍(太原市人民医院(030001))；张庆升(太原市人民医院(030001))；王虹(太原市人民医院(030001))；王全红(山西省肿瘤医院)；袁瑞香(山西医科大学第二医院)
关键词：
山西医药杂志000120
癌细胞与细胞外基质(ECM)之间的相互作用是肿瘤浸润和转移的一个重要环节，这种相互作用是由存在于细胞膜上的一大类细胞粘附分子(CAMs)来介导的[1]。CAMs不仅参与调节正常细胞的生物学行为，而且对肿瘤细胞的浸润和转移有着重要的影响。根据免疫球蛋白超基因家族中的CD44分子结构上的特点，CAMs可分为五大类，即整合素、钙粘蛋白、免疫球蛋白超基因家族、选择蛋白和CD44分子等[2，3]。本文选择免疫球蛋白超基因家族中的CD44分子的标准型(CD44s)及其变异型CD44v6两种单抗，应用免疫组合的方法对20例正常大肠粘膜和82例大肠癌原发灶组织进行研究，探讨CAMs的表达与大肠癌浸润转移影响及各因素的内在联系。
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1 材料与方法
1.1 材料：选自我院及协作单位1985年1月至1999年2月间大肠癌原发灶组织块共82例，均经病理诊断证实，其中高分化腺癌48例，低分化腺癌34例，20例正常大肠粘膜组织取自大肠癌患者距癌肿边缘10cm以上的正常大肠粘膜组织，各例均有完整的临床病理资料。CD44s、CD44v6单抗及免疫组化S-P试剂盒均购自北京中山生物技术公司。
1.2 方法：组织切片脱蜡水洗，3%H2O2甲醇(试剂A)处理10min，蒸馏水洗3×2min，将切片放入柠檬酸盐缓冲液的容器中，置微波炉进行抗原修复10 min，冷却后蒸馏水洗，PBS洗2次，每张切片滴非免疫性动物血清(试剂B)，室温孵育10 min，分别加CD44s(稀释度1∶100)、CD44v6(稀释度1∶50)抗体于4 ℃过夜。PSB洗3×10 min，滴加生物素标记的第二抗体(试剂C)，室温10 min，PBS洗3×10 min，滴加链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶溶液(试剂D)，室温10 min，PBS洗3×5 min，AEC显色，苏木素复染，水溶性封片剂封片。设阳性对照及同时用PBD替代一抗作阴性对照。
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1.3 判断标准及统计学方法：根据细胞膜、细胞质的着色程度和范围作如下描述：(-)基本不着色或未见阳性细胞；(+)着色淡或着色细胞高于5%，但低于25%；(
)着色适中或着色细胞占25%～50%；(
)着色或着色细胞大于50%。所获半定量数据进行χ2检验和spearman等级相关分析。
2 结 果
2.1 正常大肠粘膜组织，大肠腺癌组织CD44s和CD44v6的表达特征：CD44s在正常大肠粘膜上皮中有10%(2/20)微弱阳性表达，而间质纤维母细胞、平滑肌细胞呈强阳性表达，CD44v6在正常大肠粘膜组织及间质中均无表达。大肠癌中CD44s和CD44v6阳性率分别为91.4%(75/82)和65.8%(54/82)，与正常大肠粘膜组织相比明显增加(P<0.01)。而且阳性物质在细胞膜上呈非均质性着色，明显丧失极性，CD44v6在低分化腺癌中细胞膜、细胞质表达呈强阳性。
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2.2 CD44s和CD44v6表达与大肠癌临床病理特征的关系(见表1)：大肠腺癌CD44s的表达，与肿瘤大小、生长情况等无显著相关性(P均>0.05)，两者的表达运用spearman等级相关分析表明显著相关(r=0.803,P<0.01)。CD44v6阳性率，浸润型显著高于膨胀型，分化差者显著高于分化好者，浸润浆膜层显著高于未穿透浆膜层，伴有淋巴结转移显著高于无淋巴结转移者(P<0.01)。
表1 CD44s和CD44v6表达与大肠癌临床病理特征的关系 分组
例
数
CD44s
CD44v6
阳性
例数
, 百拇医药
阳性率
(%)
P值
阳性
例数
阳性率
(%)
P值
肿瘤大小
≤2 cm
24
21
87.5
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14
58.3
>0.05
>2 cm
58
54
93.1
>0.05
40
69.0
生长方式
膨胀型
29
, http://www.100md.com
26
89.7
9
31.0
浸润型
53
49
92.4
>0.05
45
84.9
<0.01
分化程度
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高分化
48
43
89.6
23
47.9
低分化
34
32
94.1
>0.05
31
91.2
, 百拇医药
<0.01
浸润深度
未浸润浆膜
30
26
86.7
11
36.7
浸润浆膜
52
49
94.1
>0.05
, http://www.100md.com
43
82.7
<0.01
淋巴结转移
无转移
23
21
91.3
6
26.1
有转移
59
54
, 百拇医药
91.5
>0.05
48
81.4
<0.01
3 讨 论
恶性肿瘤的浸润和转移是肿瘤细胞内在特性与细胞外基质相互作用的结果。细胞粘附在肿瘤细胞的浸润过程中起双重作用：一方面，肿瘤细胞必须从原来粘附的原发灶脱离才能浸润，这提示粘附在抑制浸润中的作用；另一方面，肿瘤细胞又需借助粘附才能移动。肿瘤细胞从连续的粘附接触和粘附解除中获得移动的牵引力，浸润和转移的过程首先是粘附和脱粘附的交替过程[4]。本文应用免疫组化方法分析了有代表性的粘附分子CD44s及CD44v6在正常大肠粘膜上皮和大肠癌的表达，发现它们在大肠癌中的表达不同于正常大肠粘膜，而且在癌细胞膜上的分布极性也发生了明显变化，提示不同的细胞粘附分子在大肠癌的浸润和转移过程中起着不同的作用。
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CD44分子参与淋巴细胞归巢和T细胞活化，介导透明质酸及其他基质蛋白的粘附。CD44s在正常大肠粘膜表达阴性，而在大肠癌中则高度表达，Guo等[5]报道结肠癌病人血清CD44增高，手术切除肿瘤后血清CD44水平随之减低，认为血清CD44有可能作为恶性肿瘤病人肿瘤负荷和转移的指标物，可用于大肠癌患者的早期诊断和无症状高危人群筛选。
CD44基因在转录过程中其外显子经过选择性剪接可形成多种变异体[6]，CD44s与肿瘤关系的关系研究较多，可以作为预后不良的指标[7，8]。我们发现CD44v6在大肠癌组织有较高的阳性率，而且这种表达与多种临床病因素有关，浸润型显著高于膨胀型，分化差者显著高于分化好者，浸润浆膜层显著高于未浸润浆膜层，伴有淋巴结转移者显著高于无淋巴结转移者，说明CD44v6的高表达与大肠癌细胞浸润性、低分化趋向和转移潜能密切相关。
作者简介：赵玛丽，女，1953年1月生，副主任医师，太原市人民医院，030001
, 百拇医药
参考文献：
[1] Liotta LA, Rao CN,Barsky SH.Invasion and extracellular matrix. Lab Invest,1983,49:636-639
[2] Pignatelli M,Vessdy CJ.Adhesion molecules:novel molecular tool s in tumor pathology.Hum Pathol,1994,25:849-896
[3] 曹阳,郁宝铭,王瑞年.结直肠癌浸润转移机制的研究进展.肿瘤，1995 ，15：286-288
[4] Aruffo A,Stamenkouic I,Melmick M,et al.CD44 is the principal c ell surface receptor for hyaluronate.Cell,1990,61:1303-1313
, http://www.100md.com
[5] Guo YJ,Lin GL,Wang XN,et al.Potential use of soluble CD44s in serum as indicator of tumor burden and metastasis in patients with gastric or co lon cancer.Cancer Res,1994,54:422
[6] 黄涛，沉岩.选择剪接：一种基因表达的调控方式.国外医学分子生物 学分册，1996，18：11-16
[7] Speiser P,Wanner C,Tempfer C,et al.CD44 is an independent prog nostic factor in early-stage cervical cancer.Int J Cancer,1997,74:185-188
[8] Mulder JM,Krayt PM,Sewnath M,et al.Colorectal cancer prognosis and expression of exon-v6-containing CD44 proteins.Lancet,1994，344:1470-157 2
收稿日期：1999-08-23, 百拇医药
单位：赵玛丽(太原市人民医院(030001))；姚宏(太原市人民医院(030001))；平苏萍(太原市人民医院(030001))；张庆升(太原市人民医院(030001))；王虹(太原市人民医院(030001))；王全红(山西省肿瘤医院)；袁瑞香(山西医科大学第二医院)
关键词：
山西医药杂志000120
癌细胞与细胞外基质(ECM)之间的相互作用是肿瘤浸润和转移的一个重要环节，这种相互作用是由存在于细胞膜上的一大类细胞粘附分子(CAMs)来介导的[1]。CAMs不仅参与调节正常细胞的生物学行为，而且对肿瘤细胞的浸润和转移有着重要的影响。根据免疫球蛋白超基因家族中的CD44分子结构上的特点，CAMs可分为五大类，即整合素、钙粘蛋白、免疫球蛋白超基因家族、选择蛋白和CD44分子等[2，3]。本文选择免疫球蛋白超基因家族中的CD44分子的标准型(CD44s)及其变异型CD44v6两种单抗，应用免疫组合的方法对20例正常大肠粘膜和82例大肠癌原发灶组织进行研究，探讨CAMs的表达与大肠癌浸润转移影响及各因素的内在联系。
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1 材料与方法
1.1 材料：选自我院及协作单位1985年1月至1999年2月间大肠癌原发灶组织块共82例，均经病理诊断证实，其中高分化腺癌48例，低分化腺癌34例，20例正常大肠粘膜组织取自大肠癌患者距癌肿边缘10cm以上的正常大肠粘膜组织，各例均有完整的临床病理资料。CD44s、CD44v6单抗及免疫组化S-P试剂盒均购自北京中山生物技术公司。
1.2 方法：组织切片脱蜡水洗，3%H2O2甲醇(试剂A)处理10min，蒸馏水洗3×2min，将切片放入柠檬酸盐缓冲液的容器中，置微波炉进行抗原修复10 min，冷却后蒸馏水洗，PBS洗2次，每张切片滴非免疫性动物血清(试剂B)，室温孵育10 min，分别加CD44s(稀释度1∶100)、CD44v6(稀释度1∶50)抗体于4 ℃过夜。PSB洗3×10 min，滴加生物素标记的第二抗体(试剂C)，室温10 min，PBS洗3×10 min，滴加链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶溶液(试剂D)，室温10 min，PBS洗3×5 min，AEC显色，苏木素复染，水溶性封片剂封片。设阳性对照及同时用PBD替代一抗作阴性对照。
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1.3 判断标准及统计学方法：根据细胞膜、细胞质的着色程度和范围作如下描述：(-)基本不着色或未见阳性细胞；(+)着色淡或着色细胞高于5%，但低于25%；(
)着色适中或着色细胞占25%～50%；()着色或着色细胞大于50%。所获半定量数据进行χ2检验和spearman等级相关分析。2 结 果
2.1 正常大肠粘膜组织，大肠腺癌组织CD44s和CD44v6的表达特征：CD44s在正常大肠粘膜上皮中有10%(2/20)微弱阳性表达，而间质纤维母细胞、平滑肌细胞呈强阳性表达，CD44v6在正常大肠粘膜组织及间质中均无表达。大肠癌中CD44s和CD44v6阳性率分别为91.4%(75/82)和65.8%(54/82)，与正常大肠粘膜组织相比明显增加(P<0.01)。而且阳性物质在细胞膜上呈非均质性着色，明显丧失极性，CD44v6在低分化腺癌中细胞膜、细胞质表达呈强阳性。
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2.2 CD44s和CD44v6表达与大肠癌临床病理特征的关系(见表1)：大肠腺癌CD44s的表达，与肿瘤大小、生长情况等无显著相关性(P均>0.05)，两者的表达运用spearman等级相关分析表明显著相关(r=0.803,P<0.01)。CD44v6阳性率，浸润型显著高于膨胀型，分化差者显著高于分化好者，浸润浆膜层显著高于未穿透浆膜层，伴有淋巴结转移显著高于无淋巴结转移者(P<0.01)。
表1 CD44s和CD44v6表达与大肠癌临床病理特征的关系 分组
例
数
CD44s
CD44v6
阳性
例数
, 百拇医药
阳性率
(%)
P值
阳性
例数
阳性率
(%)
P值
肿瘤大小
≤2 cm
24
21
87.5
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14
58.3
>0.05
>2 cm
58
54
93.1
>0.05
40
69.0
生长方式
膨胀型
29
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26
89.7
9
31.0
浸润型
53
49
92.4
>0.05
45
84.9
<0.01
分化程度
, http://www.100md.com
高分化
48
43
89.6
23
47.9
低分化
34
32
94.1
>0.05
31
91.2
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<0.01
浸润深度
未浸润浆膜
30
26
86.7
11
36.7
浸润浆膜
52
49
94.1
>0.05
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43
82.7
<0.01
淋巴结转移
无转移
23
21
91.3
6
26.1
有转移
59
54
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91.5
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48
81.4
<0.01
3 讨 论
恶性肿瘤的浸润和转移是肿瘤细胞内在特性与细胞外基质相互作用的结果。细胞粘附在肿瘤细胞的浸润过程中起双重作用：一方面，肿瘤细胞必须从原来粘附的原发灶脱离才能浸润，这提示粘附在抑制浸润中的作用；另一方面，肿瘤细胞又需借助粘附才能移动。肿瘤细胞从连续的粘附接触和粘附解除中获得移动的牵引力，浸润和转移的过程首先是粘附和脱粘附的交替过程[4]。本文应用免疫组化方法分析了有代表性的粘附分子CD44s及CD44v6在正常大肠粘膜上皮和大肠癌的表达，发现它们在大肠癌中的表达不同于正常大肠粘膜，而且在癌细胞膜上的分布极性也发生了明显变化，提示不同的细胞粘附分子在大肠癌的浸润和转移过程中起着不同的作用。
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CD44分子参与淋巴细胞归巢和T细胞活化，介导透明质酸及其他基质蛋白的粘附。CD44s在正常大肠粘膜表达阴性，而在大肠癌中则高度表达，Guo等[5]报道结肠癌病人血清CD44增高，手术切除肿瘤后血清CD44水平随之减低，认为血清CD44有可能作为恶性肿瘤病人肿瘤负荷和转移的指标物，可用于大肠癌患者的早期诊断和无症状高危人群筛选。
CD44基因在转录过程中其外显子经过选择性剪接可形成多种变异体[6]，CD44s与肿瘤关系的关系研究较多，可以作为预后不良的指标[7，8]。我们发现CD44v6在大肠癌组织有较高的阳性率，而且这种表达与多种临床病因素有关，浸润型显著高于膨胀型，分化差者显著高于分化好者，浸润浆膜层显著高于未浸润浆膜层，伴有淋巴结转移者显著高于无淋巴结转移者，说明CD44v6的高表达与大肠癌细胞浸润性、低分化趋向和转移潜能密切相关。
作者简介：赵玛丽，女，1953年1月生，副主任医师，太原市人民医院，030001
, 百拇医药
参考文献：
[1] Liotta LA, Rao CN,Barsky SH.Invasion and extracellular matrix. Lab Invest,1983,49:636-639
[2] Pignatelli M,Vessdy CJ.Adhesion molecules:novel molecular tool s in tumor pathology.Hum Pathol,1994,25:849-896
[3] 曹阳,郁宝铭,王瑞年.结直肠癌浸润转移机制的研究进展.肿瘤，1995 ，15：286-288
[4] Aruffo A,Stamenkouic I,Melmick M,et al.CD44 is the principal c ell surface receptor for hyaluronate.Cell,1990,61:1303-1313
, http://www.100md.com
[5] Guo YJ,Lin GL,Wang XN,et al.Potential use of soluble CD44s in serum as indicator of tumor burden and metastasis in patients with gastric or co lon cancer.Cancer Res,1994,54:422
[6] 黄涛，沉岩.选择剪接：一种基因表达的调控方式.国外医学分子生物 学分册，1996，18：11-16
[7] Speiser P,Wanner C,Tempfer C,et al.CD44 is an independent prog nostic factor in early-stage cervical cancer.Int J Cancer,1997,74:185-188
[8] Mulder JM,Krayt PM,Sewnath M,et al.Colorectal cancer prognosis and expression of exon-v6-containing CD44 proteins.Lancet,1994，344:1470-157 2
收稿日期：1999-08-23, 百拇医药