用扫描电镜观察宫颈阴道部细胞
作者：戴佩韦 赖炜玲 范建 孔笑眉
单位：戴佩韦(山西医科大学第二医院(030001))；赖炜玲(山西医科大学第二医院(030001))；范建(山西医科大学第二医院(030001))；孔笑眉(太原市红十字血液中心)
关键词：
山西医药杂志000119 宫颈阴道部血管铸型的结构，以扫描电镜(scanning electron microscope,SEM)观察，早已有论述[1]，但以SEM观察该部的细胞学变化，在近年来的文献中尚不多见。我们以另种方法取材、制片，并藉SEM了解该部位的细胞状况，现将方法及结果简介如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料：自我院妇产科门诊及病房选适当的宫颈阴道部病变患者，年龄最大者43岁，最小者35岁。其中宫颈阴道部鳞癌1例，宫颈部非典型增生1例，宫颈部慢性炎1例，并以宫颈阴道部未见异常细胞1例作为对照，以上病变均经病理检验证实。
, 百拇医药
1.2 以清洁木质刮板绕宫颈口轻刮一圈，恰好取材于宫颈阴道部鳞状上皮与宫颈管外口柱状上皮的交界处，并将该部的糜烂区域和可疑病变处均包括在内[2]。取得细胞标本后，薄而均匀地涂布于清洁的盖玻片上，尽量使细胞呈单层分布，切忌用力，以免损伤细胞。尽快投入固定液中，约半小时后，转入缓冲液，并置入4℃冰箱保存、备用。
1.3 自冰箱内保存的缓冲液中取出盖玻片涂片，经2%戊二醛固定液再固定2h，并经常摇动，以达到清洗和固定的双重目的[3]。然后以0.1 mol/L二甲胂酸钠缓冲液冲洗数次，1%锇酸固定1h，再以0.1 mol/L二甲胂酸钠缓冲液冲洗数次，30%～100%乙醇梯度脱水，微波干燥；随后将此盖玻片涂片置入离子溅射仪(型号JFC-1100)喷金，即可在细胞表面喷镀一层厚约10 nm的金属导电层。最后，利用SEM(型号：JEDL生产的JSM-35C)具有的高分辨力、长景深的特点，对涂片细胞进行仔细观察，并拍摄具有鲜明立体感的细胞，供进一步调研时使用。
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2 结 果
在荧光屏上观察细胞的结构，并及时拍摄图片，研究、分析所得信息，获得如下结果。
2.1 患者：女，38岁。妇科窥器检：宫颈阴道部慢性炎。病理镜检：该部非典型增生Ⅱ+级。SEM荧光屏上显示：黑色背景清晰，细胞有明显的立体感，各个细胞散在，未见粘连，且大小不等，呈圆形、卵圆形、长方形或六棱形。细胞膜表面尚光滑，未见胞膜内陷，个别细胞边缘有数个山峰样小突起。另外隐约可见胞核膜尚光滑，与细胞质界限清楚，部分核膜与胞膜紧贴。
2.2 患者：女，43岁。窥器检：未见异常。病理镜检：同临床所见。SEM荧光屏上可见：在暗黑色的背景上，散在多个细胞，呈网状、长条索状排列，三维结构十分明晰，又有散在的扁圆形游离细胞，表面尚光滑，周边胞膜稍有丘陵状、馒头状小突起。偶见个别细胞隐约现出胞核轮廓。
2.3 患者：女，43岁。窥器检：宫颈重度糜烂，病理镜检：宫颈阴道部鳞癌。SEM的图象最为奇特，黑色视野内的癌细胞，其三维图象多为扁圆形，少为圆形，均单个散在，大小不等，表面不光滑。极易见到癌细胞膜表面，散在分布众多的微绒毛及小乳头。此种微绒毛长短不等，粗细不匀，呈鼓锤状、蘑茹状或片块状，不均匀地分布于癌细胞膜表面，多显乳白色半透明状。胞膜面个别区域堆有鸡冠花样、鳞片状突出物，乳白色半透明，外观十分艳丽。又见较多癌细胞伸出伪足，彼此互相接连、交通。该种伪足粗细、长短不一，表面粗糙，多呈半透明状，立体感明晰。少部癌细胞附近有较多的细碎颗粒，成片或散在，大小及外形与微绒毛相似，灰黑色或半透明。
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2.4 患者：女，43岁。窥器检：宫颈鳞状上皮非典型增生。病理镜检：宫颈慢性炎。SEM见：细胞呈扁圆形，单个散在，表面尚光滑，少见乳头分布，未见微绒毛，三维图象清晰，与周围境界分明。
纵观上述4例之SEM所见，以宫颈阴道部鳞癌细胞的外观及形态最具特异性，依据所得图象可以作为病理诊断及细胞学诊断的重要参考资料。
3 讨 论
一般较常用的电镜(electron microscope)包括扫描电镜(SEM)和透射电镜(transmissoin electron microscope, TEM)两种。SEM多用于反映出细胞或组织表面形貌细节的三维扫描图象，并已成为最适于观察、分析各种细胞(样品)表面微细胞结构的一种理想仪器。而TEM则多用于探究、观察细胞或组织内部的细致构造，直至可观察其分子[4]。无论SEM或TEM所得图象均可在荧光屏(板)上进行肉眼观察，并都可拍摄成照片，以供进一步仔细分析与研究细胞的形貌和内部结构。
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根据荧光屏(板)上及照片中所得信息进行综合分析，可以得出细胞、组织形貌的正确诊断[5]。细胞形态多种多样，但在荧光屏上或照片上均由白(亮)→暗(灰)→黑这几种不同系列色素集合而成。亮可以显示细胞的高凸部分，暗则相反。如细胞表面的孔洞、裂隙等，则显黑色。
在SEM所获得的三维图象中，各个肿瘤细胞的外形轮廓清晰，多单个散在，且大小不等。癌细胞膜表面的曲率半径大小不等，致使其表面凹凸不平，未能形成圆滑曲线。又见细胞膜面突出多个微绒毛，长短不一，粗细不匀，呈直线状、扭曲状或蘑茹样。偶见癌细胞膜面向细胞质内陷，深浅、大小不等。有伪足自胞膜伸向远方，与其他邻近的癌细胞互相连接、交通。故SEM所得图象为较大范围的三维(立体)图象，可以获得样品的整体概念。
而TEM所得图象为细胞、组织的内部超微结构。就肿瘤细胞而论，其胞体多数较大，外形各不相同，参差不齐，且和胚胎性细胞多有相似之处[6]。超薄切片可见：胞核异常增大，核畸形，染色质增多且深染，核分裂象也多，以致核/质比值也增大。异常增大的核仁呈多形性，不规则。核仁/核体积的比值加大，核仁内及其周围都可见多少不等的染色质。胞核内之核膜附近以及核质内亦散在染色质，并染色质周颗粒、染色质间颗粒。胞浆成分进入胞核内形成核内的包涵体，并见核膜向核质凹陷。胞浆内分布有分化不良的细胞器，并见大小不等的空泡，以及癌细胞膜形成各式各样的微绒毛。又如：宫颈癌细胞越是分化不良，胞浆中的糖原颗粒、桥粒和张力原纤维越少，而粗面内质网、核蛋白体和线粒体越来越多。由于内质网扩张，线粒体增大，在癌变早期，细胞互相分离，故癌变的浅层细胞容易脱落，在涂片中易于检出。
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诚然，不论SEM或TEM都能观察细胞或组织的细胞结构，包括分子结构，甚至能将细胞(样品)放大2万～20万倍进行观察。但其缺点是：放大倍数越大，所观察到的样品范围越局限，越不能纵览全局及整体状况。所以单纯依靠SEM或TEM作出诊断是不可信的，容易有“管中窥豹”的缺陷。必需同时结合术后的大体所见、临床病情以及光镜下的病理诊断，才能揭示各该病的真面目。
作者简介：戴佩韦，男，1933年7月生，主任医师，山西医科大学第二医院，030001
参考文献：
[1] 王玉清.宫颈癌血管铸型的扫描电镜观察.中华妇产科杂志，1982，17 (2)：100
[2] 天津医学院妇产科.阴道细胞学图谱，天津：天津人民出版社，1983. 273
[3] 王仲涛.组织和细胞扫描电镜图谱.北京：人民卫生出版社，1986.21 1
[4] 郭仁强.电子显微镜与超微结构，北京：人民卫生出版社，1985.4
[5] 马金鑫.描扫电子显微镜入门.北京：科学技术出版社，1985.209
[6] 洪涛.生物医学超微结构与电子显微镜技术，北京：科学出版社，1980 ，498
收稿日期：1999-10-18, http://www.100md.com
单位：戴佩韦(山西医科大学第二医院(030001))；赖炜玲(山西医科大学第二医院(030001))；范建(山西医科大学第二医院(030001))；孔笑眉(太原市红十字血液中心)
关键词：
山西医药杂志000119 宫颈阴道部血管铸型的结构，以扫描电镜(scanning electron microscope,SEM)观察，早已有论述[1]，但以SEM观察该部的细胞学变化，在近年来的文献中尚不多见。我们以另种方法取材、制片，并藉SEM了解该部位的细胞状况，现将方法及结果简介如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料：自我院妇产科门诊及病房选适当的宫颈阴道部病变患者，年龄最大者43岁，最小者35岁。其中宫颈阴道部鳞癌1例，宫颈部非典型增生1例，宫颈部慢性炎1例，并以宫颈阴道部未见异常细胞1例作为对照，以上病变均经病理检验证实。
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1.2 以清洁木质刮板绕宫颈口轻刮一圈，恰好取材于宫颈阴道部鳞状上皮与宫颈管外口柱状上皮的交界处，并将该部的糜烂区域和可疑病变处均包括在内[2]。取得细胞标本后，薄而均匀地涂布于清洁的盖玻片上，尽量使细胞呈单层分布，切忌用力，以免损伤细胞。尽快投入固定液中，约半小时后，转入缓冲液，并置入4℃冰箱保存、备用。
1.3 自冰箱内保存的缓冲液中取出盖玻片涂片，经2%戊二醛固定液再固定2h，并经常摇动，以达到清洗和固定的双重目的[3]。然后以0.1 mol/L二甲胂酸钠缓冲液冲洗数次，1%锇酸固定1h，再以0.1 mol/L二甲胂酸钠缓冲液冲洗数次，30%～100%乙醇梯度脱水，微波干燥；随后将此盖玻片涂片置入离子溅射仪(型号JFC-1100)喷金，即可在细胞表面喷镀一层厚约10 nm的金属导电层。最后，利用SEM(型号：JEDL生产的JSM-35C)具有的高分辨力、长景深的特点，对涂片细胞进行仔细观察，并拍摄具有鲜明立体感的细胞，供进一步调研时使用。
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2 结 果
在荧光屏上观察细胞的结构，并及时拍摄图片，研究、分析所得信息，获得如下结果。
2.1 患者：女，38岁。妇科窥器检：宫颈阴道部慢性炎。病理镜检：该部非典型增生Ⅱ+级。SEM荧光屏上显示：黑色背景清晰，细胞有明显的立体感，各个细胞散在，未见粘连，且大小不等，呈圆形、卵圆形、长方形或六棱形。细胞膜表面尚光滑，未见胞膜内陷，个别细胞边缘有数个山峰样小突起。另外隐约可见胞核膜尚光滑，与细胞质界限清楚，部分核膜与胞膜紧贴。
2.2 患者：女，43岁。窥器检：未见异常。病理镜检：同临床所见。SEM荧光屏上可见：在暗黑色的背景上，散在多个细胞，呈网状、长条索状排列，三维结构十分明晰，又有散在的扁圆形游离细胞，表面尚光滑，周边胞膜稍有丘陵状、馒头状小突起。偶见个别细胞隐约现出胞核轮廓。
2.3 患者：女，43岁。窥器检：宫颈重度糜烂，病理镜检：宫颈阴道部鳞癌。SEM的图象最为奇特，黑色视野内的癌细胞，其三维图象多为扁圆形，少为圆形，均单个散在，大小不等，表面不光滑。极易见到癌细胞膜表面，散在分布众多的微绒毛及小乳头。此种微绒毛长短不等，粗细不匀，呈鼓锤状、蘑茹状或片块状，不均匀地分布于癌细胞膜表面，多显乳白色半透明状。胞膜面个别区域堆有鸡冠花样、鳞片状突出物，乳白色半透明，外观十分艳丽。又见较多癌细胞伸出伪足，彼此互相接连、交通。该种伪足粗细、长短不一，表面粗糙，多呈半透明状，立体感明晰。少部癌细胞附近有较多的细碎颗粒，成片或散在，大小及外形与微绒毛相似，灰黑色或半透明。
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2.4 患者：女，43岁。窥器检：宫颈鳞状上皮非典型增生。病理镜检：宫颈慢性炎。SEM见：细胞呈扁圆形，单个散在，表面尚光滑，少见乳头分布，未见微绒毛，三维图象清晰，与周围境界分明。
纵观上述4例之SEM所见，以宫颈阴道部鳞癌细胞的外观及形态最具特异性，依据所得图象可以作为病理诊断及细胞学诊断的重要参考资料。
3 讨 论
一般较常用的电镜(electron microscope)包括扫描电镜(SEM)和透射电镜(transmissoin electron microscope, TEM)两种。SEM多用于反映出细胞或组织表面形貌细节的三维扫描图象，并已成为最适于观察、分析各种细胞(样品)表面微细胞结构的一种理想仪器。而TEM则多用于探究、观察细胞或组织内部的细致构造，直至可观察其分子[4]。无论SEM或TEM所得图象均可在荧光屏(板)上进行肉眼观察，并都可拍摄成照片，以供进一步仔细分析与研究细胞的形貌和内部结构。
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根据荧光屏(板)上及照片中所得信息进行综合分析，可以得出细胞、组织形貌的正确诊断[5]。细胞形态多种多样，但在荧光屏上或照片上均由白(亮)→暗(灰)→黑这几种不同系列色素集合而成。亮可以显示细胞的高凸部分，暗则相反。如细胞表面的孔洞、裂隙等，则显黑色。
在SEM所获得的三维图象中，各个肿瘤细胞的外形轮廓清晰，多单个散在，且大小不等。癌细胞膜表面的曲率半径大小不等，致使其表面凹凸不平，未能形成圆滑曲线。又见细胞膜面突出多个微绒毛，长短不一，粗细不匀，呈直线状、扭曲状或蘑茹样。偶见癌细胞膜面向细胞质内陷，深浅、大小不等。有伪足自胞膜伸向远方，与其他邻近的癌细胞互相连接、交通。故SEM所得图象为较大范围的三维(立体)图象，可以获得样品的整体概念。
而TEM所得图象为细胞、组织的内部超微结构。就肿瘤细胞而论，其胞体多数较大，外形各不相同，参差不齐，且和胚胎性细胞多有相似之处[6]。超薄切片可见：胞核异常增大，核畸形，染色质增多且深染，核分裂象也多，以致核/质比值也增大。异常增大的核仁呈多形性，不规则。核仁/核体积的比值加大，核仁内及其周围都可见多少不等的染色质。胞核内之核膜附近以及核质内亦散在染色质，并染色质周颗粒、染色质间颗粒。胞浆成分进入胞核内形成核内的包涵体，并见核膜向核质凹陷。胞浆内分布有分化不良的细胞器，并见大小不等的空泡，以及癌细胞膜形成各式各样的微绒毛。又如：宫颈癌细胞越是分化不良，胞浆中的糖原颗粒、桥粒和张力原纤维越少，而粗面内质网、核蛋白体和线粒体越来越多。由于内质网扩张，线粒体增大，在癌变早期，细胞互相分离，故癌变的浅层细胞容易脱落，在涂片中易于检出。
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诚然，不论SEM或TEM都能观察细胞或组织的细胞结构，包括分子结构，甚至能将细胞(样品)放大2万～20万倍进行观察。但其缺点是：放大倍数越大，所观察到的样品范围越局限，越不能纵览全局及整体状况。所以单纯依靠SEM或TEM作出诊断是不可信的，容易有“管中窥豹”的缺陷。必需同时结合术后的大体所见、临床病情以及光镜下的病理诊断，才能揭示各该病的真面目。
作者简介：戴佩韦，男，1933年7月生，主任医师，山西医科大学第二医院，030001
参考文献：
[1] 王玉清.宫颈癌血管铸型的扫描电镜观察.中华妇产科杂志，1982，17 (2)：100
[2] 天津医学院妇产科.阴道细胞学图谱，天津：天津人民出版社，1983. 273
[3] 王仲涛.组织和细胞扫描电镜图谱.北京：人民卫生出版社，1986.21 1
[4] 郭仁强.电子显微镜与超微结构，北京：人民卫生出版社，1985.4
[5] 马金鑫.描扫电子显微镜入门.北京：科学技术出版社，1985.209
[6] 洪涛.生物医学超微结构与电子显微镜技术，北京：科学出版社，1980 ，498
收稿日期：1999-10-18, http://www.100md.com