c-erbB-2 DNA在乳癌中的相关性研究
作者：董永红 王玉仙 匡玉庭 张志德 高敏 郭钟行
单位：董永红(山西省人民医院 030012)国；王玉仙(山西省人民医院 030012)；匡玉庭(苏州医学院附属第一医院)；张志德(苏州医学院附属第一医院)；高敏(苏州医学院附属第一医院)；郭钟行(苏州医学院附属第一医院)
关键词：乳癌；c-erbB-2；流式细胞仪；DNA倍体
山西医药杂志000409 【摘要】目的 探索c-erbB-2在乳癌中的表达及其与流式细胞仪DNA的相关性。方法 运用免疫组织化学检测70例乳癌c-erbB-2过度表达情况，同时行流式细胞仪DNA检测。结果 c-erbB-2过度表达率为30%(21∶70)，其中浸润性癌中36.4%(20∶55)，非浸润性癌中6.7%(1∶15)。c-erbB-2与ER、PR呈强负相关(P<0.001)，与DNA倍体呈正相关(P=0.021)，与SPF呈正相关(P=0.013 9)，与年龄、淋巴结状态、肿瘤分期无明显相关性，与PF间无明显相关(P=0.061 7)。结论 c-erbB-2、DNA相关性研究阐释了乳癌的生物学特性，为术后辅助治疗提供了重要线索。
, 百拇医药
Study on relationship between c-erbB-2 and DNA contents in primary breast carcinoma
Dong Yonghong Wang Yuxian Kuang Yuting et al
(People′s Hospital of Shanxi Province,Taiyuan,030012,China)
【Abstract】Objective To study the proto-oncogene c-erbB-2 overexpression in primary breast carcinoma and the relationship between c-erbB-2 expression and other prognostic factors.Methods The immunohistochemistry (IHC) for c-erbB-2 oncoprotein was performed on formalin-fixed,paraffin-embedded sections of 70 primary breast carcinomas resected in mastectomy.Flow cytometry (FCM) DNA analysis was performed on fresh tumors of 30 patients and paraffin-embedded primary tumors of 40 patients.Results There were 55 infiltrating tumors and 15 noninfiltrating ones,of the seventy 21 had c-erbB-2 overexpression (30%), and of the twenty-one 20 were infiltrating (20∶55;36.4%) and 1 was noninfiltrating (1∶15;6.7%). There existed a positive correlation between c-erbB-2 and DNA ploidy (P=0.021) as well as SPF (P=0.013 9),but a significant negative correlation between c-erbB-2 and both estrogen and progesterone receptors (P<0.000 1).No relationship between c-erbB-2 and age,axillary lymph node status as well as tumor staging; there was a borderline relationship between c-erbB-2 and SPF.Conclusion The study on relationship between c-erbB-2 and DNA ploidy may interpret biological characteristics of breast carcinoma and provide an important clue for clinical practice in primary breast carcinoma.
, 百拇医药
【Key words】Breast carcinoma; c-erbB-2; Flow cytometry; DNA ploidy
原癌基因c-erbB-2，又称为HER-2或neu(HER-2/neu)，标码了一种185 000的透膜糖蛋白，其结构与表皮生长因子受体相似。c-erbB-2癌蛋白约在15%～20%的浸润性乳癌中过度表达，其对乳癌的预后价值颇有争议。乳癌肿瘤细胞流式细胞仪(FCM)测定出的DNA倍体和S期百分比(SPF)可预测患者无复发生存期(RFS)和总生存期(OS)。近来有作者把SPF和G2、M期结合起来，统称为增生期百分比(proliferation fraction,PF),认为它是一项独立的预后指标。本研究通过对70例原发性乳癌采用免疫组织化学方法(IHC)观察c-erbB-2过度表达情况，与传统预后因素作相关性分析，并与肿瘤细胞DNA倍体、SPF和PF作相关性研究，以期判断它们的预后价值。
1 资料与方法
, 百拇医药
70例乳癌均系原发性，分别取自苏州医学院附属第一医院(30例)和长治医学院附属医院(40例)。均为根治术后取材，临床资料完整。平均年龄51.3岁。
c-erbB-2 IHC染色如Hsu等[1]所述。结果按光镜下免疫染色的定位和强度而定，中等或强烈的膜染色方法计为阳性细胞。本研究以染色阳性细胞数≥20%定为c-erbB-2癌基因的过度表达，为保证结果可靠性，染色设阳性对照。
DNA FCM测定由中国科学院上海分院细胞生物所FACS室测定，FCM型号为FACStar Plus(Becton Dickinson,CA)，处理样本后数据由B.D公司Cellfit软件处理后于直方图下打印相应数据。新鲜标本CV值稳定在3%～5%之间，石蜡包埋组织标本稳定在8%以内。
c-erbB-2与其他预后因素关系采用SPSS/PC+软件包，用Spearman等级相关检验。
, 百拇医药
2 结 果
2.1 c-erbB-2的IHC染色：70例原发性乳癌中21例细胞膜染色符合诊断阳性标准，阳性率30%。其中浸润性乳腺癌55例中20例(36.4%)表达阳性，非浸润性癌15例仅1例(6.7%)表达阳性。
2.2 乳腺癌组织FCM DNA测定：按照Balslev[2]DNA倍体分类方法，把DNA倍体分为三组，Ⅰ组(整倍体组)二倍体、四倍体；Ⅱ组(超倍体组)超二倍体、超四倍体；Ⅲ组(亚倍体组)亚二倍体组、亚三倍体组、亚四倍体。分别以9%和12.5%为界把SPF和PF分为二组。结果整倍体组共15例(21.4%)，超倍体组共16例(22.9%)和亚倍体组39例(55.7%)，SPF低于9%者25例(35.7%)，高于9%者45例(64.3%)。PF低于和高于界值者分别为21例(30%)和49例(70%)。
2.3 c-erbB-2与各预后因素的相关性研究：见表1。
, 百拇医药
表1 c-erbB-2过度表达与各预后因素的相关性 项 目
c-erbB-2+
c-erbB-2-
RR值
P值
例数
%
例数
%
年龄
<45岁
10
14.3
, 百拇医药
19
27.1
45～60岁
4
5.7
19
27.1
NS
>60岁
7
10
11
15.7
, 百拇医药
肿瘤大小
<2 cm
5
7.1
8
11.4
2～5 cm
15
21.4
40
57.1
-0.167 4
0.166 0
, 百拇医药
≥5 cm
1
1.4
1
1.4
淋巴结状态
N-
11
15.7
24
34.3
-0.031 2
0.797 8
, http://www.100md.com
N+
10
14.3
25
35.7
肿瘤分级
Ⅰ
13
18.6
22
31.4
Ⅱ
8
, 百拇医药 11.4
25
35.7
-0.167 9
0.164 8
Ⅲ
0
2
2.9
ER
+
7
10
, 百拇医药 48
68.6
-0.721 8
<0.000 1
-
14
20
1
1.4
RP
+
5
7.1
, 百拇医药 40
57.1
-0.553 0
<0.000 1
-
16
22.9
9
12.9
DNA倍体
Ⅰ
2
2.9
, 百拇医药
14
20
Ⅱ
3
4.3
13
18.6
0.275 6
0.021 0
Ⅲ
16
22.9
23
, http://www.100md.com
32.9
SPF
<9%
2
2.9
23
32.9
0.292 8
0.013 9
≥9%
19
27.1
26
, 百拇医药
37.1
PF
<12.5%
3
4.3
18
25.7
0.224 5
0.061 7
≥12.5%
18
25.7
31
, 百拇医药
44.3
注：
NS：无统计学意义。
3 讨 论
3.1 c-erbB-2在乳腺癌中的表达：本回顾性研究就70例以手术切除作为第一线治疗措施的原发性乳腺癌，通过IHC检测其c-erbB-2基因过度表达，发现30%病人肿瘤细胞表达阳性，与文献[3]报道的20%～30%相吻合。
3.2 c-erbB-2和传统预后因素的相关性：关于c-erbB-2过度表达与传统预后因素的相关性，目前多数观点倾向于与激素受体状态呈强负相关，与年龄无关，而与肿瘤大小、分级及淋巴结转移相关性争议较多。本研究中c-erbB-2与年龄无相关[4]，与ER、PR呈负相关[5]，c-erbB-2与肿瘤大小无关，同文献[5，6]一致。Schimellpenning观察到肿瘤大于5 cm和小于5 cm者HER-2阳性率趋向一致[7]。大多数研究认为c-erbB-2和腋淋巴结转移间不存在联系[6]，一篇报告认为，在原发性乳癌中淋巴转移多发生在该基因复制数在3个以上者中[5]，但另两篇同类文献则认为基因复制份数和淋巴结转移无关[4]，我们的观点同大多数研究结论一致。IHC c-erbB-2测定和组织学分级之间没有相关性，与文献[5]的结论一致，另有研究认为HER-2在分化差的组织中有明显过度趋势[7]。
, http://www.100md.com
近年研究一直把激素受体状态作为内分泌治疗适应证及预后指标，但常常在临床上发现患者出现对内分泌治疗从有效到无效的转变。Gotteland等[8]认为可能在用药过程中产生了异常功能性的受体，从而使40%ER(+)病人失去内分泌治疗，他从ER蛋白表达和mRNA水平入手，以二者之比值1.5为界把ER值分为二组：ER*R1、ER*R2，观察患者对内分泌治疗的敏感性，随访生存期限，得出ER*R2为一个预后差的指标，换言之，ER IHC呈强阳性者的内分泌治疗效果及预后逊于中度阳性者，本组研究中部分病人显示此现象。
c-erbB-2表达和ER、PR呈强负相关性有其明显的理论和临床意义。ER阳性、c-erbB-2阴性患者以内分泌疗法为主；ER阳性、c-erbB-2阳性患者内分泌治疗加化疗联合应用；而ER阴性、c-erbB-2阳性者，以化疗为主；ER阴性、c-erbB-2阴性患者，根据肿块大小及腋淋巴结情况选择治疗方案。
, 百拇医药
3.3 c-erbB-2和FCM DNA的相关性：本组研究中，亚倍体Ⅲ组共39例，占55.7%，超倍体Ⅱ组共22例，占22.9%，即不包括四倍体在内异倍体共占78.6%，说明多数乳腺癌肿瘤细胞呈异倍体生长。相关性研究发现c-erbB-2和DNA倍体呈正相关[9，10](P=0.021)，证实c-erbB-2和肿瘤分化差有关，c-erbB-2表达和SPF的正相关性(P=0.013 9)则意味着该癌基因表达时伴随肿瘤细胞增生活跃，细胞周期短，预示预后差。但美中不足的是c-erbB-2和PF间的相关性P值接近临界(P=0.061 7)，未能显示出差异性，可能和病例少有关。
在研究中发现亚倍体的患者(Ⅲ组)常伴有高SPF，PR阴性，往往伴有c-erbB-2表达率偏高，随访该部分病人RFS和OS均短。因此设想随c-erbB-2基因过度表达，细胞增生旺盛，分化差而致预后差，复发早且复发后进展迅速。
作者简介：董永红，男，1967年5月生，主治医师，山西省人民医院，030012
, 百拇医药
参考文献
1，Hsu SM,Raine L,Fanger H.Use of avidin-biotin-peroxidase complex (ABC) in immunoperoxidase techniques:a comparison between ABC and unlabeled antibody (PAP) procedures.J Histochem Cytochem,1981,29:577-580
2，Balslev I,Christensen Ib J,Rasmussen BB,et al.Flow cytometric DNA ploidy defines patients with poor prognosis in node-negative breast cancer.Int J Cancer,1994,56:16-25
3，Datic C,Muraca R,Tazartes O,et al.C-erbB-2 and ras expression levels in breast cancer are correlated and show a co-operative association with unfavorable clinical outcome.Int J Cancer,1991,47:833-838.
, 百拇医药
4，Clark GM,McGuire WJ.Follow-up study of HER-2/neu amplification in primary breast cancer.Cancer Res,1991,51:944-948
5，Seshadri R,Firgaira FA,Horsfall DJ,et al.Clinical significance of HER-2/neu oncogene amplification in primary breast cancer.J Clin Oncol,1993,11:1936-1942
6，Walker RA,Dearing SJ,Lane DP,et al.Expression of P53 protein in infiltrating and in-situ breast carcinomas.J Pathol,1991,165:203-211
, http://www.100md.com
7，Schimmelpenning H,Eriksson ET,Falkmer UG,et al.Prognostic significance of immunohistochemical c-erbB-2 proto-oncogene expression and nuclear DNA content in human breast cancer.Eur J Surg Oncol,1992,18:530-537
8，Gotteland M,May E,May-Levin F,et al.Estrogen receptor (ER) in human breast cancer.Cancer,1994,74:864-871
9，Bacus SS,Bacus JW,Slamon DJ,et al.HER-2/neu oncogene expression and DNA ploidy analysis in breast cancer.Arch Pathol Lab Med,1990,114:164-169
10，Leal CB,Schmitt FC,Bento MJ,et al.Ductal carcinoma in situ of the breast:histologic categorization and its relationship to ploidy and immunohistochemical expression of hormone receptors,P53,and c-erbB-2 protein.Cancer,1995,75:2123-2131
收稿日期：2000-04-21, http://www.100md.com
单位：董永红(山西省人民医院 030012)国；王玉仙(山西省人民医院 030012)；匡玉庭(苏州医学院附属第一医院)；张志德(苏州医学院附属第一医院)；高敏(苏州医学院附属第一医院)；郭钟行(苏州医学院附属第一医院)
关键词：乳癌；c-erbB-2；流式细胞仪；DNA倍体
山西医药杂志000409 【摘要】目的 探索c-erbB-2在乳癌中的表达及其与流式细胞仪DNA的相关性。方法 运用免疫组织化学检测70例乳癌c-erbB-2过度表达情况，同时行流式细胞仪DNA检测。结果 c-erbB-2过度表达率为30%(21∶70)，其中浸润性癌中36.4%(20∶55)，非浸润性癌中6.7%(1∶15)。c-erbB-2与ER、PR呈强负相关(P<0.001)，与DNA倍体呈正相关(P=0.021)，与SPF呈正相关(P=0.013 9)，与年龄、淋巴结状态、肿瘤分期无明显相关性，与PF间无明显相关(P=0.061 7)。结论 c-erbB-2、DNA相关性研究阐释了乳癌的生物学特性，为术后辅助治疗提供了重要线索。
, 百拇医药
Study on relationship between c-erbB-2 and DNA contents in primary breast carcinoma
Dong Yonghong Wang Yuxian Kuang Yuting et al
(People′s Hospital of Shanxi Province,Taiyuan,030012,China)
【Abstract】Objective To study the proto-oncogene c-erbB-2 overexpression in primary breast carcinoma and the relationship between c-erbB-2 expression and other prognostic factors.Methods The immunohistochemistry (IHC) for c-erbB-2 oncoprotein was performed on formalin-fixed,paraffin-embedded sections of 70 primary breast carcinomas resected in mastectomy.Flow cytometry (FCM) DNA analysis was performed on fresh tumors of 30 patients and paraffin-embedded primary tumors of 40 patients.Results There were 55 infiltrating tumors and 15 noninfiltrating ones,of the seventy 21 had c-erbB-2 overexpression (30%), and of the twenty-one 20 were infiltrating (20∶55;36.4%) and 1 was noninfiltrating (1∶15;6.7%). There existed a positive correlation between c-erbB-2 and DNA ploidy (P=0.021) as well as SPF (P=0.013 9),but a significant negative correlation between c-erbB-2 and both estrogen and progesterone receptors (P<0.000 1).No relationship between c-erbB-2 and age,axillary lymph node status as well as tumor staging; there was a borderline relationship between c-erbB-2 and SPF.Conclusion The study on relationship between c-erbB-2 and DNA ploidy may interpret biological characteristics of breast carcinoma and provide an important clue for clinical practice in primary breast carcinoma.
, 百拇医药
【Key words】Breast carcinoma; c-erbB-2; Flow cytometry; DNA ploidy
原癌基因c-erbB-2，又称为HER-2或neu(HER-2/neu)，标码了一种185 000的透膜糖蛋白，其结构与表皮生长因子受体相似。c-erbB-2癌蛋白约在15%～20%的浸润性乳癌中过度表达，其对乳癌的预后价值颇有争议。乳癌肿瘤细胞流式细胞仪(FCM)测定出的DNA倍体和S期百分比(SPF)可预测患者无复发生存期(RFS)和总生存期(OS)。近来有作者把SPF和G2、M期结合起来，统称为增生期百分比(proliferation fraction,PF),认为它是一项独立的预后指标。本研究通过对70例原发性乳癌采用免疫组织化学方法(IHC)观察c-erbB-2过度表达情况，与传统预后因素作相关性分析，并与肿瘤细胞DNA倍体、SPF和PF作相关性研究，以期判断它们的预后价值。
1 资料与方法
, 百拇医药
70例乳癌均系原发性，分别取自苏州医学院附属第一医院(30例)和长治医学院附属医院(40例)。均为根治术后取材，临床资料完整。平均年龄51.3岁。
c-erbB-2 IHC染色如Hsu等[1]所述。结果按光镜下免疫染色的定位和强度而定，中等或强烈的膜染色方法计为阳性细胞。本研究以染色阳性细胞数≥20%定为c-erbB-2癌基因的过度表达，为保证结果可靠性，染色设阳性对照。
DNA FCM测定由中国科学院上海分院细胞生物所FACS室测定，FCM型号为FACStar Plus(Becton Dickinson,CA)，处理样本后数据由B.D公司Cellfit软件处理后于直方图下打印相应数据。新鲜标本CV值稳定在3%～5%之间，石蜡包埋组织标本稳定在8%以内。
c-erbB-2与其他预后因素关系采用SPSS/PC+软件包，用Spearman等级相关检验。
, 百拇医药
2 结 果
2.1 c-erbB-2的IHC染色：70例原发性乳癌中21例细胞膜染色符合诊断阳性标准，阳性率30%。其中浸润性乳腺癌55例中20例(36.4%)表达阳性，非浸润性癌15例仅1例(6.7%)表达阳性。
2.2 乳腺癌组织FCM DNA测定：按照Balslev[2]DNA倍体分类方法，把DNA倍体分为三组，Ⅰ组(整倍体组)二倍体、四倍体；Ⅱ组(超倍体组)超二倍体、超四倍体；Ⅲ组(亚倍体组)亚二倍体组、亚三倍体组、亚四倍体。分别以9%和12.5%为界把SPF和PF分为二组。结果整倍体组共15例(21.4%)，超倍体组共16例(22.9%)和亚倍体组39例(55.7%)，SPF低于9%者25例(35.7%)，高于9%者45例(64.3%)。PF低于和高于界值者分别为21例(30%)和49例(70%)。
2.3 c-erbB-2与各预后因素的相关性研究：见表1。
, 百拇医药
表1 c-erbB-2过度表达与各预后因素的相关性 项 目
c-erbB-2+
c-erbB-2-
RR值
P值
例数
%
例数
%
年龄
<45岁
10
14.3
, 百拇医药
19
27.1
45～60岁
4
5.7
19
27.1
NS
>60岁
7
10
11
15.7
, 百拇医药
肿瘤大小
<2 cm
5
7.1
8
11.4
2～5 cm
15
21.4
40
57.1
-0.167 4
0.166 0
, 百拇医药
≥5 cm
1
1.4
1
1.4
淋巴结状态
N-
11
15.7
24
34.3
-0.031 2
0.797 8
, http://www.100md.com
N+
10
14.3
25
35.7
肿瘤分级
Ⅰ
13
18.6
22
31.4
Ⅱ
8
, 百拇医药 11.4
25
35.7
-0.167 9
0.164 8
Ⅲ
0
2
2.9
ER
+
7
10
, 百拇医药 48
68.6
-0.721 8
<0.000 1
-
14
20
1
1.4
RP
+
5
7.1
, 百拇医药 40
57.1
-0.553 0
<0.000 1
-
16
22.9
9
12.9
DNA倍体
Ⅰ
2
2.9
, 百拇医药
14
20
Ⅱ
3
4.3
13
18.6
0.275 6
0.021 0
Ⅲ
16
22.9
23
, http://www.100md.com
32.9
SPF
<9%
2
2.9
23
32.9
0.292 8
0.013 9
≥9%
19
27.1
26
, 百拇医药
37.1
PF
<12.5%
3
4.3
18
25.7
0.224 5
0.061 7
≥12.5%
18
25.7
31
, 百拇医药
44.3
注：
NS：无统计学意义。
3 讨 论
3.1 c-erbB-2在乳腺癌中的表达：本回顾性研究就70例以手术切除作为第一线治疗措施的原发性乳腺癌，通过IHC检测其c-erbB-2基因过度表达，发现30%病人肿瘤细胞表达阳性，与文献[3]报道的20%～30%相吻合。
3.2 c-erbB-2和传统预后因素的相关性：关于c-erbB-2过度表达与传统预后因素的相关性，目前多数观点倾向于与激素受体状态呈强负相关，与年龄无关，而与肿瘤大小、分级及淋巴结转移相关性争议较多。本研究中c-erbB-2与年龄无相关[4]，与ER、PR呈负相关[5]，c-erbB-2与肿瘤大小无关，同文献[5，6]一致。Schimellpenning观察到肿瘤大于5 cm和小于5 cm者HER-2阳性率趋向一致[7]。大多数研究认为c-erbB-2和腋淋巴结转移间不存在联系[6]，一篇报告认为，在原发性乳癌中淋巴转移多发生在该基因复制数在3个以上者中[5]，但另两篇同类文献则认为基因复制份数和淋巴结转移无关[4]，我们的观点同大多数研究结论一致。IHC c-erbB-2测定和组织学分级之间没有相关性，与文献[5]的结论一致，另有研究认为HER-2在分化差的组织中有明显过度趋势[7]。
, http://www.100md.com
近年研究一直把激素受体状态作为内分泌治疗适应证及预后指标，但常常在临床上发现患者出现对内分泌治疗从有效到无效的转变。Gotteland等[8]认为可能在用药过程中产生了异常功能性的受体，从而使40%ER(+)病人失去内分泌治疗，他从ER蛋白表达和mRNA水平入手，以二者之比值1.5为界把ER值分为二组：ER*R1、ER*R2，观察患者对内分泌治疗的敏感性，随访生存期限，得出ER*R2为一个预后差的指标，换言之，ER IHC呈强阳性者的内分泌治疗效果及预后逊于中度阳性者，本组研究中部分病人显示此现象。
c-erbB-2表达和ER、PR呈强负相关性有其明显的理论和临床意义。ER阳性、c-erbB-2阴性患者以内分泌疗法为主；ER阳性、c-erbB-2阳性患者内分泌治疗加化疗联合应用；而ER阴性、c-erbB-2阳性者，以化疗为主；ER阴性、c-erbB-2阴性患者，根据肿块大小及腋淋巴结情况选择治疗方案。
, 百拇医药
3.3 c-erbB-2和FCM DNA的相关性：本组研究中，亚倍体Ⅲ组共39例，占55.7%，超倍体Ⅱ组共22例，占22.9%，即不包括四倍体在内异倍体共占78.6%，说明多数乳腺癌肿瘤细胞呈异倍体生长。相关性研究发现c-erbB-2和DNA倍体呈正相关[9，10](P=0.021)，证实c-erbB-2和肿瘤分化差有关，c-erbB-2表达和SPF的正相关性(P=0.013 9)则意味着该癌基因表达时伴随肿瘤细胞增生活跃，细胞周期短，预示预后差。但美中不足的是c-erbB-2和PF间的相关性P值接近临界(P=0.061 7)，未能显示出差异性，可能和病例少有关。
在研究中发现亚倍体的患者(Ⅲ组)常伴有高SPF，PR阴性，往往伴有c-erbB-2表达率偏高，随访该部分病人RFS和OS均短。因此设想随c-erbB-2基因过度表达，细胞增生旺盛，分化差而致预后差，复发早且复发后进展迅速。
作者简介：董永红，男，1967年5月生，主治医师，山西省人民医院，030012
, 百拇医药
参考文献
1，Hsu SM,Raine L,Fanger H.Use of avidin-biotin-peroxidase complex (ABC) in immunoperoxidase techniques:a comparison between ABC and unlabeled antibody (PAP) procedures.J Histochem Cytochem,1981,29:577-580
2，Balslev I,Christensen Ib J,Rasmussen BB,et al.Flow cytometric DNA ploidy defines patients with poor prognosis in node-negative breast cancer.Int J Cancer,1994,56:16-25
3，Datic C,Muraca R,Tazartes O,et al.C-erbB-2 and ras expression levels in breast cancer are correlated and show a co-operative association with unfavorable clinical outcome.Int J Cancer,1991,47:833-838.
, 百拇医药
4，Clark GM,McGuire WJ.Follow-up study of HER-2/neu amplification in primary breast cancer.Cancer Res,1991,51:944-948
5，Seshadri R,Firgaira FA,Horsfall DJ,et al.Clinical significance of HER-2/neu oncogene amplification in primary breast cancer.J Clin Oncol,1993,11:1936-1942
6，Walker RA,Dearing SJ,Lane DP,et al.Expression of P53 protein in infiltrating and in-situ breast carcinomas.J Pathol,1991,165:203-211
, http://www.100md.com
7，Schimmelpenning H,Eriksson ET,Falkmer UG,et al.Prognostic significance of immunohistochemical c-erbB-2 proto-oncogene expression and nuclear DNA content in human breast cancer.Eur J Surg Oncol,1992,18:530-537
8，Gotteland M,May E,May-Levin F,et al.Estrogen receptor (ER) in human breast cancer.Cancer,1994,74:864-871
9，Bacus SS,Bacus JW,Slamon DJ,et al.HER-2/neu oncogene expression and DNA ploidy analysis in breast cancer.Arch Pathol Lab Med,1990,114:164-169
10，Leal CB,Schmitt FC,Bento MJ,et al.Ductal carcinoma in situ of the breast:histologic categorization and its relationship to ploidy and immunohistochemical expression of hormone receptors,P53,and c-erbB-2 protein.Cancer,1995,75:2123-2131
收稿日期：2000-04-21, http://www.100md.com