巴曲抗栓酶对大鼠肠系膜微动脉血栓的疗效
作者：耿昱 陈怀红 丁德云
单位：耿昱 陈怀红(浙江大学医学院 附属邵逸夫医院 神经内科，浙江 杭州 310016)；丁德云(浙江大学医学院 附属第二医院 神经科， 浙江 杭州 310006)
关键词：巴曲抗栓酶；大鼠；肠系膜动脉；血栓形成；栓塞
中国新药与临床杂志000315 [摘要] 目的：探讨巴曲抗栓酶对大鼠肠系膜微动脉血栓的疗效和作用机制。方法：SD大鼠24只，分成3组，0.9%氯化钠注射液对照组、巴曲抗栓酶8 BU.kg-1和16 BU.kg-1 2个剂量组，每组为8只。分别采用光化学诱导法制作大鼠肠系膜微动脉血栓，经显微电视摄像系统和多媒体计算机图象处理技术相结合，对巴曲抗栓酶的疗效进行定量分析。结果：巴曲抗栓酶8 BU.kg-1组再通率为38%(3/ 8)，平均再通时间为(27±s9) min；16 BU.kg-1组再通率为50%(4/ 8)，平均再通时间为(34±21)min。结论：巴曲抗栓酶对大鼠微动脉血栓具有可靠的治疗效果。
, 百拇医药
[中图分类号]R973.2; R963
[文献标识码]B
[文章编号]1007-7669(2000)03-0202-03
Batroxobin (DF-521) in treatment of micro-artery-thrombosis
of rat mesentery
GENG Yu，CHEN Huai-Hong
(Department of Neurology, Sir Run Run Shaw Hospitl, School of medical, Zhejiang University, Hangzhou ZHEJIANG 310016, China)
, 百拇医药
DING De-Yun
(Department of Neurology, The Second Hospital, School of medical, Zhejiang University, Hangzhou ZHEJIANG 310006, China)
[ABSTRACT] AIM: To evaluate the effect and the mechanism of batroxobin in treatng micro-artery-thrombosis of rat mesentery. METHODS: Twenty-four rats were overagely divided into three groups i.e. 0.9% sodium chloride injection, 8 BU.kg-1 of batroxobin and 16 BU.kg-1 of batroxobin, micro-artery-thrombus formation model was gotten up by the filtered light irradiation and intravascular fluorescein sodium administration. The incidence rate、duration and extent of recanalization in different dosage-groups and control group were measured using computer image subtraction. RESULTS: The rates of recanalization were 38% and 50% in 8 BU.kg-1 of batroxbin and 16 BU.kg-1 of batroxobin group, respectively. The mean time of recanlization was 27±9 min in 8 BU.kg-1 of batroxobin group and 34±21 min in 16 BU.kg-1 of batroxobin group, respectively. CONCLUSION: Batroxobin shows a good curative effect on micro-artery-thrombus of rat mesentery.
, 百拇医药
[KEY WORDS] batroxobin (DF-521); rats; mesenteric arteria; thrombosis; embolism
巴曲抗栓酶 [Batroxobin (DF-521)]是由生物基因工程合成的分子量为36 000的单链蛋白，大量的临床和动物实验表明，其具有显著的抗凝、降酶、去纤、降低血粘度和溶栓多种作用，成功地用于缺血性脑血管疾病的治疗[1]。本文选用活体微血栓模型，结合显微电视成像和计算机处理，动态研究巴曲抗栓酶对大鼠肠系膜微血栓的疗效。
材料和方法 健康Sprague-Dawley大鼠24只，雌雄兼有，平均体重(297±36)g，系由浙江省医学科学院实验动物中心提供，随机分成3组：对照组、中剂量组、高剂量组，每组8只。用1%的戊巴比妥钠按40 mg*kg-1体重作ip麻醉。巴曲抗栓酶(进口许可证号X930498)由日本东菱药品工业株式会社赞助，厂家推荐剂量为：中剂量组(8 BU*kg-1)、高剂量组(16 BU*kg-1)，对照组注入等量0.9 %氯化钠注射液。动物麻醉后，做气管、股静脉和左侧颈总动脉插管。其中，荧光素钠由大腿股静脉插管注入，颈总动脉插管供注入巴曲抗栓酶和0.9%氯化钠注射液用。剖腹，小心取出肠系膜，放入37°C±0.5°C的克氏恒温溶液槽内，将膜铺平在一嵌有玻璃片的圆环上，以固定膜的位置。在显微镜下寻找一条50～80 μm的微动脉作为目标血管，经大鼠股静脉注射荧光素钠(FINa,MW376)50 mg*kg-1，然后用激发光照射，直至微动脉血栓形成后1 min，以形成稳固的血栓。然后按实验要求，经颈总动脉注入巴曲抗栓酶，对照组注入等剂量的0.9 %氯化钠注射液。整个血栓形成和溶解的动态过程用显微电视摄象系统进行拍摄、录象，观察持续时间为3 h，然后将图象输入计算机图象数据采集版进行处理，最终在计算机图象显示器上分析处理巴曲抗栓酶的溶栓的过程[1]。
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结果
1 动态观察显示 闭塞血管开始再通时，很容易再闭塞，常出现再通-闭塞的反复交替过程，此过程治疗组中占69%(11/16)，其中中剂量组占63%(5/8)，高剂量组占75%(6/8)，空白对照组占13%(1/8)；如果再通血管的最大管径大于初始管径的25%，则再通血管不发生再闭塞，否则容易发生再闭塞；本实验治疗组共有25%(4/16)闭塞微动脉曾经出现一过性部分再通。
血管再通率：巴曲抗栓酶8 BU*kg-1的治疗组再通率为38%(3/8)，16 BU*kg-1组再通率为50%(4/8)，对照组无1例再通。
2 血管再通时间 不同剂量组的巴曲抗栓酶治疗后再通时间，见表1。
表1 2剂量组巴曲抗栓酶对大鼠肠系膜微动脉血栓
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治疗后的再通时间 项 目
巴曲抗栓酶
8 BU*kg-1(n=3)
巴曲抗栓酶
16 BU*kg-1(n=4)
20
20
血管再通时间/min
20
20
40
30
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65
再通平均时间/min
27±9
34±21
3 血管再通程度 巴曲抗栓酶治疗后大鼠肠系膜微动脉血管再通程度，见图1，2。
图1 巴曲抗栓酶8 BU*kg-1治疗组中3例大鼠肠系膜微动脉血栓再通血管纵截面血栓面积(A)/初始血栓面积(A0)随时间变化曲线
讨论 活体微动脉血栓模型充分与现代多媒体计算机图象处理技术相结合，成为目前抗血栓药物评价和开发的满意模型之一，该模型既能够对血栓的形成和溶解过程进行动态观察，又能够对抗血栓药物进行定量分析和系统评价[1-3]。光化学诱导形成的血栓主要由血小板组成，为非纤维蛋白-稳定性血栓(no fibrin-stabilized thrombus)，故相对容易脱落，使闭塞血管再通；此外，血管再通开始时，很容易再闭塞，常出现再通-闭塞的反复交替过程，与病理性血栓形成早期的机制非常类似，因此，本研究能够科学、客观地评价巴曲抗栓酶的疗效。
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图2 巴曲抗栓酶16 BU*kg-1治疗组中4例再通血管的纵截面血栓面积(A)/初如血栓面积(A0)随时间变化曲线
再通率是评价溶栓药物效率的最重要的指标之一，再通率越高，说明药物的疗效越肯定。本研究结果表明，巴曲抗栓酶对大鼠微动脉血栓具有可靠的治疗效果，与巴曲抗栓酶对其他部位血栓治疗的效果相似[4]。再通时间是评价溶栓药物的又一重要指标，动物血栓形成后，尽早溶栓使缺血组织恢复灌流至关重要，再灌流恢复越早，组织对缺血造成的损伤则越容易恢复[5]。本文提示，巴曲抗栓酶能够在较短的也是在较为理想的时间内使微动脉血栓溶解，而且在达到治疗剂量后，血栓溶解的时间与药物剂量之间并未显示出明显的依赖关系，说明巴曲抗栓酶是一种较为满意的抗血栓药物。
血栓溶解后常出现部分或完全再通，在一定时间内，如果再通越显著，则再灌注越充足，组织缺血越容易恢复。本研究共有6例血管再通在50%以上，其中2例接近完全再通；另外1例血管再通2.5 h后，再通程度也超过50%(图1)。这充分说明巴曲抗栓酶对早期血栓疗效显著。对微动脉管径和血栓纵截面面积变化进行定量分析还显示：在达到治疗剂量后，血管再通程度与巴曲抗栓酶药物剂量之间无显著正相关。总之，巴曲抗栓酶对大鼠肠系膜微动脉血栓具有肯定的疗效，不同剂量组对照研究还发现：在达到一定的治疗剂量后，血管再通时间和再通程度与药物剂量之间不存在显著的依赖关系，这对临床大剂量应用巴曲抗栓酶及其他同类药物可能出现的出血并发症有借鉴作用。
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[参考文献]
[1] 郑筱祥(Zheng XX),孙 洪(Sun H)，张晓晔(Zhang XY).用荧光素钠建立微血管内血栓模型与计算机分析[J],中华血液学杂志(Chin J Hematol)，1991，12:474.
[2] Reininger AJ, Heinzmann U, Reininger CB, Friedrich P, Wurzingger LJ. Flow mediated fibrin thrombus formation in an endothelium model of asterial branching[J]. Thromb Res, 1994;76:629.
[3] Saniabadi AR, Umemura K, Matsumoto N, Sakuma S, Nakashima M. Veseel wall injury and artenal thombosis induced by a photochemical reaction [J]. Thromb and Haemost, 1995,72:868-872.
[4] 陈清棠(Chen QT).东菱精纯克栓酶(DF-521)治疗急性脑梗塞的临床研究[J].世界医学杂志(Int J Med), 1998,2(1,2):79-80.
[5] 李 玲(LI Ling)，苏镇培(SU ZP),黄如训(Huang RX).高血压大鼠局部脑缺血再灌流边缘区超微结构改变[J].中国神经精神疾病杂志(Chin J Neur Ment Dis),1996,22:193.
[收稿日期]1998-11-23 [接受日期]1999-05-10, 百拇医药
单位：耿昱 陈怀红(浙江大学医学院 附属邵逸夫医院 神经内科，浙江 杭州 310016)；丁德云(浙江大学医学院 附属第二医院 神经科， 浙江 杭州 310006)
关键词：巴曲抗栓酶；大鼠；肠系膜动脉；血栓形成；栓塞
中国新药与临床杂志000315 [摘要] 目的：探讨巴曲抗栓酶对大鼠肠系膜微动脉血栓的疗效和作用机制。方法：SD大鼠24只，分成3组，0.9%氯化钠注射液对照组、巴曲抗栓酶8 BU.kg-1和16 BU.kg-1 2个剂量组，每组为8只。分别采用光化学诱导法制作大鼠肠系膜微动脉血栓，经显微电视摄像系统和多媒体计算机图象处理技术相结合，对巴曲抗栓酶的疗效进行定量分析。结果：巴曲抗栓酶8 BU.kg-1组再通率为38%(3/ 8)，平均再通时间为(27±s9) min；16 BU.kg-1组再通率为50%(4/ 8)，平均再通时间为(34±21)min。结论：巴曲抗栓酶对大鼠微动脉血栓具有可靠的治疗效果。
, 百拇医药
[中图分类号]R973.2; R963
[文献标识码]B
[文章编号]1007-7669(2000)03-0202-03
Batroxobin (DF-521) in treatment of micro-artery-thrombosis
of rat mesentery
GENG Yu，CHEN Huai-Hong
(Department of Neurology, Sir Run Run Shaw Hospitl, School of medical, Zhejiang University, Hangzhou ZHEJIANG 310016, China)
, 百拇医药
DING De-Yun
(Department of Neurology, The Second Hospital, School of medical, Zhejiang University, Hangzhou ZHEJIANG 310006, China)
[ABSTRACT] AIM: To evaluate the effect and the mechanism of batroxobin in treatng micro-artery-thrombosis of rat mesentery. METHODS: Twenty-four rats were overagely divided into three groups i.e. 0.9% sodium chloride injection, 8 BU.kg-1 of batroxobin and 16 BU.kg-1 of batroxobin, micro-artery-thrombus formation model was gotten up by the filtered light irradiation and intravascular fluorescein sodium administration. The incidence rate、duration and extent of recanalization in different dosage-groups and control group were measured using computer image subtraction. RESULTS: The rates of recanalization were 38% and 50% in 8 BU.kg-1 of batroxbin and 16 BU.kg-1 of batroxobin group, respectively. The mean time of recanlization was 27±9 min in 8 BU.kg-1 of batroxobin group and 34±21 min in 16 BU.kg-1 of batroxobin group, respectively. CONCLUSION: Batroxobin shows a good curative effect on micro-artery-thrombus of rat mesentery.
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[KEY WORDS] batroxobin (DF-521); rats; mesenteric arteria; thrombosis; embolism
巴曲抗栓酶 [Batroxobin (DF-521)]是由生物基因工程合成的分子量为36 000的单链蛋白，大量的临床和动物实验表明，其具有显著的抗凝、降酶、去纤、降低血粘度和溶栓多种作用，成功地用于缺血性脑血管疾病的治疗[1]。本文选用活体微血栓模型，结合显微电视成像和计算机处理，动态研究巴曲抗栓酶对大鼠肠系膜微血栓的疗效。
材料和方法 健康Sprague-Dawley大鼠24只，雌雄兼有，平均体重(297±36)g，系由浙江省医学科学院实验动物中心提供，随机分成3组：对照组、中剂量组、高剂量组，每组8只。用1%的戊巴比妥钠按40 mg*kg-1体重作ip麻醉。巴曲抗栓酶(进口许可证号X930498)由日本东菱药品工业株式会社赞助，厂家推荐剂量为：中剂量组(8 BU*kg-1)、高剂量组(16 BU*kg-1)，对照组注入等量0.9 %氯化钠注射液。动物麻醉后，做气管、股静脉和左侧颈总动脉插管。其中，荧光素钠由大腿股静脉插管注入，颈总动脉插管供注入巴曲抗栓酶和0.9%氯化钠注射液用。剖腹，小心取出肠系膜，放入37°C±0.5°C的克氏恒温溶液槽内，将膜铺平在一嵌有玻璃片的圆环上，以固定膜的位置。在显微镜下寻找一条50～80 μm的微动脉作为目标血管，经大鼠股静脉注射荧光素钠(FINa,MW376)50 mg*kg-1，然后用激发光照射，直至微动脉血栓形成后1 min，以形成稳固的血栓。然后按实验要求，经颈总动脉注入巴曲抗栓酶，对照组注入等剂量的0.9 %氯化钠注射液。整个血栓形成和溶解的动态过程用显微电视摄象系统进行拍摄、录象，观察持续时间为3 h，然后将图象输入计算机图象数据采集版进行处理，最终在计算机图象显示器上分析处理巴曲抗栓酶的溶栓的过程[1]。
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结果
1 动态观察显示 闭塞血管开始再通时，很容易再闭塞，常出现再通-闭塞的反复交替过程，此过程治疗组中占69%(11/16)，其中中剂量组占63%(5/8)，高剂量组占75%(6/8)，空白对照组占13%(1/8)；如果再通血管的最大管径大于初始管径的25%，则再通血管不发生再闭塞，否则容易发生再闭塞；本实验治疗组共有25%(4/16)闭塞微动脉曾经出现一过性部分再通。
血管再通率：巴曲抗栓酶8 BU*kg-1的治疗组再通率为38%(3/8)，16 BU*kg-1组再通率为50%(4/8)，对照组无1例再通。
2 血管再通时间 不同剂量组的巴曲抗栓酶治疗后再通时间，见表1。
表1 2剂量组巴曲抗栓酶对大鼠肠系膜微动脉血栓
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治疗后的再通时间 项 目
巴曲抗栓酶
8 BU*kg-1(n=3)
巴曲抗栓酶
16 BU*kg-1(n=4)
20
20
血管再通时间/min
20
20
40
30
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65
再通平均时间/min
27±9
34±21
3 血管再通程度 巴曲抗栓酶治疗后大鼠肠系膜微动脉血管再通程度，见图1，2。
图1 巴曲抗栓酶8 BU*kg-1治疗组中3例大鼠肠系膜微动脉血栓再通血管纵截面血栓面积(A)/初始血栓面积(A0)随时间变化曲线
讨论 活体微动脉血栓模型充分与现代多媒体计算机图象处理技术相结合，成为目前抗血栓药物评价和开发的满意模型之一，该模型既能够对血栓的形成和溶解过程进行动态观察，又能够对抗血栓药物进行定量分析和系统评价[1-3]。光化学诱导形成的血栓主要由血小板组成，为非纤维蛋白-稳定性血栓(no fibrin-stabilized thrombus)，故相对容易脱落，使闭塞血管再通；此外，血管再通开始时，很容易再闭塞，常出现再通-闭塞的反复交替过程，与病理性血栓形成早期的机制非常类似，因此，本研究能够科学、客观地评价巴曲抗栓酶的疗效。
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图2 巴曲抗栓酶16 BU*kg-1治疗组中4例再通血管的纵截面血栓面积(A)/初如血栓面积(A0)随时间变化曲线
再通率是评价溶栓药物效率的最重要的指标之一，再通率越高，说明药物的疗效越肯定。本研究结果表明，巴曲抗栓酶对大鼠微动脉血栓具有可靠的治疗效果，与巴曲抗栓酶对其他部位血栓治疗的效果相似[4]。再通时间是评价溶栓药物的又一重要指标，动物血栓形成后，尽早溶栓使缺血组织恢复灌流至关重要，再灌流恢复越早，组织对缺血造成的损伤则越容易恢复[5]。本文提示，巴曲抗栓酶能够在较短的也是在较为理想的时间内使微动脉血栓溶解，而且在达到治疗剂量后，血栓溶解的时间与药物剂量之间并未显示出明显的依赖关系，说明巴曲抗栓酶是一种较为满意的抗血栓药物。
血栓溶解后常出现部分或完全再通，在一定时间内，如果再通越显著，则再灌注越充足，组织缺血越容易恢复。本研究共有6例血管再通在50%以上，其中2例接近完全再通；另外1例血管再通2.5 h后，再通程度也超过50%(图1)。这充分说明巴曲抗栓酶对早期血栓疗效显著。对微动脉管径和血栓纵截面面积变化进行定量分析还显示：在达到治疗剂量后，血管再通程度与巴曲抗栓酶药物剂量之间无显著正相关。总之，巴曲抗栓酶对大鼠肠系膜微动脉血栓具有肯定的疗效，不同剂量组对照研究还发现：在达到一定的治疗剂量后，血管再通时间和再通程度与药物剂量之间不存在显著的依赖关系，这对临床大剂量应用巴曲抗栓酶及其他同类药物可能出现的出血并发症有借鉴作用。
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[参考文献]
[1] 郑筱祥(Zheng XX),孙 洪(Sun H)，张晓晔(Zhang XY).用荧光素钠建立微血管内血栓模型与计算机分析[J],中华血液学杂志(Chin J Hematol)，1991，12:474.
[2] Reininger AJ, Heinzmann U, Reininger CB, Friedrich P, Wurzingger LJ. Flow mediated fibrin thrombus formation in an endothelium model of asterial branching[J]. Thromb Res, 1994;76:629.
[3] Saniabadi AR, Umemura K, Matsumoto N, Sakuma S, Nakashima M. Veseel wall injury and artenal thombosis induced by a photochemical reaction [J]. Thromb and Haemost, 1995,72:868-872.
[4] 陈清棠(Chen QT).东菱精纯克栓酶(DF-521)治疗急性脑梗塞的临床研究[J].世界医学杂志(Int J Med), 1998,2(1,2):79-80.
[5] 李 玲(LI Ling)，苏镇培(SU ZP),黄如训(Huang RX).高血压大鼠局部脑缺血再灌流边缘区超微结构改变[J].中国神经精神疾病杂志(Chin J Neur Ment Dis),1996,22:193.
[收稿日期]1998-11-23 [接受日期]1999-05-10, 百拇医药