高效毛细管电泳法分离测定淫羊藿中淫羊藿甙的含量
作者：周丽芳
单位：中国人民解放军第95医院
关键词：高效毛细管电泳法；淫羊藿甙
海峡药学990226 摘要 采用HPCE法测定淫羊藿中的淫羊藿甙的含量，用缓冲液为含20%乙腈的20 mmol/L硼砂，电压25 Kv，温度25℃，检测波长254 nm。检测结果样品在25 μg～250 μg/ml范围内呈线性关系，r＝0.9999，天内、天间精密度RSD<2%(n＝3)，加样回收率98.35%(n＝3)。说明本法测定淫羊藿甙快速、准确，重现性好，为淫羊藿的质量控制提供了新的方法学手段。
Determination of Icariin in Epimedium Grandiflorum
by High Performance Capillary Electrophoresis
, http://www.100md.com
Zhou Lifang
(Department of Pharmacy PLA 95 Hospital，Putian)
Abstract A rapid and Simple HPCE method was set up for the determination of icariin.The addition of CH3 CN in the borate solution improved the peak shape of icariin and made it separated from the interference.The method was with good linearity and reproducibility and it provided a new anlytical method for the quality control of icariin in Epimedium grandiflorum.
, 百拇医药
Key words Icariin HPCE
淫羊藿是我国常用中药，为中国药典1995版二部收载的品种，具有补肾阳，强筋骨，祛风湿的功效。它含有多种化学成分，主要为黄酮醇类化合物，其中淫羊藿甙为主要活性成分，故常以此为指标控制其质量。淫羊藿中淫羊藿甙含量的测定方法有紫外分光光度法[1]，薄层扫描法[2]，高效液相色谱法[3，4]。高效毛细管电泳(HPCE)法是近10年来迅速发展起来的一种新型分离分析技术，具有高效、快速、低耗，样品预处理简单，操作简便等优点，在中成药分析中得到广泛的应用[5，6]。本文用HPCE法测定淫羊藿中淫羊藿甙的含量，方法快速、简便，重现性好，结果准确可靠。
1 实验部分
1.1 仪器和试剂 Waters Capillary Ion Analyzer，空心熔融石英毛细管75 μm×100 cm(河北永年光纤厂)。淫羊藿甙对照品和双氯灭痛(内标)购自中国药品生物制品检定所，并用70%乙醇溶解备用，淫羊藿药材为市购品，其它试剂均为分析纯。
, http://www.100md.com
1.2 电泳条件 分离用缓冲液为20 mmol/L硼砂含20%乙腈，运行电压25 kv，温度25℃，重力进样，时间10 s，紫外检测波长254 nm。
1.3 样品测定 精密称定淫羊藿细粉适量，置于试管中，加入70%乙醇约7 ml，超声提取30 min，离心后取上清液置25 ml容量瓶中，再重复提取两次，合并提取液，加入内标使其浓度为80 μg/ml，加70%乙醇至刻度，按上述电泳条件进行分离测定。
1.4 加样回收率实验 精密称定淫羊藿药材细粉适量，置于10 ml试管中，加入淫羊藿甙对照品溶液适量，按样品测定项下的步骤进行操作，计算回收率。
2 结果和讨论
2.1 分离条件的选择 使用硼砂缓冲液进行分离测定，淫羊藿甙峰形欠佳，加入乙腈既可以改善分离，消除干扰，又能改善峰形。通过实验确定使用20 mmol/L硼砂缓冲液内含20%乙腈可对淫羊藿甙进行良好的分离测定(见图1)。
, 百拇医药
图1 淫羊藿的毛细管电泳图
(1.淫羊藿甙12.85 min；2.内标17.73 min)
2.2 测定方法的评价 2.2.1 线性关系考察 精取对照品溶液适量经稀释并加入内标后，使其浓度分别为25、50、100、150、250 μg/ml，内标浓度为80 μg/ml，按上述条件测定，以样品峰和内标峰面积之比为纵坐标，以淫羊藿甙的浓度为横坐标，绘制标准曲线，计算得回归方程：
Y＝8.75X-0.0088，r＝0.9999
结果表明淫羊藿甙在此浓度范围内其与内标峰面积之比和浓度的线性关系良好。2.2.2 精密度和加样回收率实验 对浓度分别为25、100和250 μg/ml的淫羊藿甙对照品溶液进行天内和天间精密度实验，结果其天内和天间RSD均小于2%(n＝3)，结果见表1，表明测定方法的重现性良好。回收率试验加样量2.5 mg，其加样回收率为98.35%，RSD＝1.75%(n＝3)。
, 百拇医药
表1 天内、天间精密度 浓 度
mg/ml
RSD%(n＝3)
天 内
天 间
0.025
1.37
1.98
0.1
0.99
1.38
0.25
1.05
, http://www.100md.com
1.34
2.3 样品测定 利用所建立的分离测定方法，对淫羊藿药材中的淫羊藿甙进行了测定，结果(见表2)，表明淫羊藿中淫羊藿甙的含量差异较大。
表2 淫羊藿的测定结果 淫羊藿
含量(%)
RSD%(n＝3)
样品1
0.7921
1.52
样品2
0.4349
1.73
, http://www.100md.com
参考文献
1.朱品业等：一阶导数光谱法测定抗骨质增生片中淫羊藿的总黄酮含量 中成药 1991；13：12
2.丁晨光等：淫羊藿生药中淫羊藿甙的高效薄层扫描测定 药物分析杂志 1991；11(1)：33
3.柴逸峰等：用反相高效液相色谱法测定淫羊藿及其制剂中淫羊藿甙的含量研究 药物分析杂志 1991；11(3)：207
4.沙明等：高效液相色谱法测定朝鲜淫羊藿中淫羊藿甙的含量 色谱 1997；15(2)：166
5.Chen C.T. et al：Separation of coumarins by micellar electrokinetic capillary chromatography，J Chromatogr A，1995；710：323
6.Chen C.T. et al：Determination of ephedrine alkaloids by capilllary electrophoresis.J Chromatogr 1992；600：370, http://www.100md.com
单位：中国人民解放军第95医院
关键词：高效毛细管电泳法；淫羊藿甙
海峡药学990226 摘要 采用HPCE法测定淫羊藿中的淫羊藿甙的含量，用缓冲液为含20%乙腈的20 mmol/L硼砂，电压25 Kv，温度25℃，检测波长254 nm。检测结果样品在25 μg～250 μg/ml范围内呈线性关系，r＝0.9999，天内、天间精密度RSD<2%(n＝3)，加样回收率98.35%(n＝3)。说明本法测定淫羊藿甙快速、准确，重现性好，为淫羊藿的质量控制提供了新的方法学手段。
Determination of Icariin in Epimedium Grandiflorum
by High Performance Capillary Electrophoresis
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Zhou Lifang
(Department of Pharmacy PLA 95 Hospital，Putian)
Abstract A rapid and Simple HPCE method was set up for the determination of icariin.The addition of CH3 CN in the borate solution improved the peak shape of icariin and made it separated from the interference.The method was with good linearity and reproducibility and it provided a new anlytical method for the quality control of icariin in Epimedium grandiflorum.
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Key words Icariin HPCE
淫羊藿是我国常用中药，为中国药典1995版二部收载的品种，具有补肾阳，强筋骨，祛风湿的功效。它含有多种化学成分，主要为黄酮醇类化合物，其中淫羊藿甙为主要活性成分，故常以此为指标控制其质量。淫羊藿中淫羊藿甙含量的测定方法有紫外分光光度法[1]，薄层扫描法[2]，高效液相色谱法[3，4]。高效毛细管电泳(HPCE)法是近10年来迅速发展起来的一种新型分离分析技术，具有高效、快速、低耗，样品预处理简单，操作简便等优点，在中成药分析中得到广泛的应用[5，6]。本文用HPCE法测定淫羊藿中淫羊藿甙的含量，方法快速、简便，重现性好，结果准确可靠。
1 实验部分
1.1 仪器和试剂 Waters Capillary Ion Analyzer，空心熔融石英毛细管75 μm×100 cm(河北永年光纤厂)。淫羊藿甙对照品和双氯灭痛(内标)购自中国药品生物制品检定所，并用70%乙醇溶解备用，淫羊藿药材为市购品，其它试剂均为分析纯。
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1.2 电泳条件 分离用缓冲液为20 mmol/L硼砂含20%乙腈，运行电压25 kv，温度25℃，重力进样，时间10 s，紫外检测波长254 nm。
1.3 样品测定 精密称定淫羊藿细粉适量，置于试管中，加入70%乙醇约7 ml，超声提取30 min，离心后取上清液置25 ml容量瓶中，再重复提取两次，合并提取液，加入内标使其浓度为80 μg/ml，加70%乙醇至刻度，按上述电泳条件进行分离测定。
1.4 加样回收率实验 精密称定淫羊藿药材细粉适量，置于10 ml试管中，加入淫羊藿甙对照品溶液适量，按样品测定项下的步骤进行操作，计算回收率。
2 结果和讨论
2.1 分离条件的选择 使用硼砂缓冲液进行分离测定，淫羊藿甙峰形欠佳，加入乙腈既可以改善分离，消除干扰，又能改善峰形。通过实验确定使用20 mmol/L硼砂缓冲液内含20%乙腈可对淫羊藿甙进行良好的分离测定(见图1)。
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图1 淫羊藿的毛细管电泳图
(1.淫羊藿甙12.85 min；2.内标17.73 min)
2.2 测定方法的评价 2.2.1 线性关系考察 精取对照品溶液适量经稀释并加入内标后，使其浓度分别为25、50、100、150、250 μg/ml，内标浓度为80 μg/ml，按上述条件测定，以样品峰和内标峰面积之比为纵坐标，以淫羊藿甙的浓度为横坐标，绘制标准曲线，计算得回归方程：
Y＝8.75X-0.0088，r＝0.9999
结果表明淫羊藿甙在此浓度范围内其与内标峰面积之比和浓度的线性关系良好。2.2.2 精密度和加样回收率实验 对浓度分别为25、100和250 μg/ml的淫羊藿甙对照品溶液进行天内和天间精密度实验，结果其天内和天间RSD均小于2%(n＝3)，结果见表1，表明测定方法的重现性良好。回收率试验加样量2.5 mg，其加样回收率为98.35%，RSD＝1.75%(n＝3)。
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表1 天内、天间精密度 浓 度
mg/ml
RSD%(n＝3)
天 内
天 间
0.025
1.37
1.98
0.1
0.99
1.38
0.25
1.05
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1.34
2.3 样品测定 利用所建立的分离测定方法，对淫羊藿药材中的淫羊藿甙进行了测定，结果(见表2)，表明淫羊藿中淫羊藿甙的含量差异较大。
表2 淫羊藿的测定结果 淫羊藿
含量(%)
RSD%(n＝3)
样品1
0.7921
1.52
样品2
0.4349
1.73
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参考文献
1.朱品业等：一阶导数光谱法测定抗骨质增生片中淫羊藿的总黄酮含量 中成药 1991；13：12
2.丁晨光等：淫羊藿生药中淫羊藿甙的高效薄层扫描测定 药物分析杂志 1991；11(1)：33
3.柴逸峰等：用反相高效液相色谱法测定淫羊藿及其制剂中淫羊藿甙的含量研究 药物分析杂志 1991；11(3)：207
4.沙明等：高效液相色谱法测定朝鲜淫羊藿中淫羊藿甙的含量 色谱 1997；15(2)：166
5.Chen C.T. et al：Separation of coumarins by micellar electrokinetic capillary chromatography，J Chromatogr A，1995；710：323
6.Chen C.T. et al：Determination of ephedrine alkaloids by capilllary electrophoresis.J Chromatogr 1992；600：370, http://www.100md.com