正交法优选黄连中盐酸小檗碱的提取工艺
作者：孙 波 张永光
单位：山东省烟台荣昌制药有限公司研究所
关键词：黄连；盐酸小檗碱含量；正交试验
海峡药学990388 提要 选用L9(34)正交试验法对黄连中盐酸小檗碱的提取工艺进行优选。结果认为A3B1C1为最佳提取工艺即煎煮3次，3.5h，加水量14倍。这样提取盐酸小檗碱得率量高，且经济、简便。
Optimal Seeking of Extract Proces s for Berberine Hydrochloride
in Rhizoma of Coptis Chinensis Frach by Orthogonal Test
, 百拇医药
Sunbo，Zhang Yongguang
(Rongchang Pharma cy Institute Yantai)
Optimal seeking of extract pro cess for berberine hydrochloride in Rhiz oma of Coptis Chinensis Franch by L9(3 4)orthogonal method.As a result，it is th e best condition to use for the Rhizoma Coptidis：adding 14 times of water，decoct ing for 3 times and 3.5 hours.This is th e best method for receiving the berberin e hydrochloride.
, 百拇医药
Key words Rhizoma Content determi natio n of berberin hydrochloride Orthogonal test
盐酸小檗碱是从黄连中提得的有效成分，据国内外文献报道，黄连具有泻火、燥湿、解毒、杀虫作用，多用于治疗细菌性痢疾、肺结核等疾病。药理研究表明，盐酸小檗碱能明显增强抗菌能力，与黄连的抗菌能力基本一致，盐酸小檗碱是黄连中的有效成分，提取盐酸小檗碱的得率多少直接影响到黄连药效，故本文就黄连提取工艺进行了研究，以期找出一种更合理更可行的生产工艺。本文就其水提部分的工艺进行了优化选择，现报道如下。
1 实验材料 黄连药材 由安徽药市购得的黄连饮片。经鉴定为毛莨科植物黄连Coptis Chinensis Franch的根茎。盐酸小檗碱对照品，由中国药品生物制品检定所提供。甲醇、无水乙醇、中性氧化铝均为国产分析纯。
2 方法与结果
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2.1 正交试验设计 根据盐酸小檗碱提取条件，选定煎煮次数、煎煮时间、加水量为因素，确定3因素，每因素取3个水平，选用L9(34)正交表进行试验，因素与水平安排(见表1)。
表1 因素水平表 水 平
因 素
A(煎煮次数)
B(煎煮时间)
C(加水量)
1
1次
3.5小时
14
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2
2次
2.5小时
18
3
3次
1.5小时
20
按照L9(34)表条件对黄连进行盐酸小檗碱的提取和测定，以其含量作为考察指标。
2.2 试验方法 2.2.1 样品的提取：取黄连药材9份，每份20g，破碎成粗粉，按照表2中1～9试验号所列条件进行正交试验。水煎液滤除药渣后浓缩至200ml。2.2.2 含量测定：标准溶液的制备：取经105℃干燥至恒重的盐酸小檗碱15mg，精密称定，置100ml量瓶中，加水溶解，并稀释至刻度，摇匀，备用。标准曲线的绘制：精密量取标准溶液1ml～7.5ml共6份，分别置10ml量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，在345nm波长处分别测定各对照品溶液的吸收度。经回归处理得直线回归方程：A＝-6.051×10-2C+2.249×10-6，r＝0.9999。盐酸小檗碱在0.1μg/ml～0.75μg/ml线性关系良好。测定方法：取2.2.1项下所得的溶液精密吸取1ml，过氧化铝柱(10g中性氧化铝)，用无水乙醇50ml洗脱，定容于50ml量瓶中，过滤，滤液做为供试液。采用高效液相色谱法测定盐酸小檗碱的含量。以乙腈：0.1MSDS(60∶40)用乙酸调pH4.8，其中SDS为十二烷基硫酸钠。考察因素与水平(见表2)。表2 正交试验设计及结果分析 实验号
, 百拇医药
A
B
C
空白
含量(mg)
1
1
1
1
1
53.64
2
2
1
, http://www.100md.com
2
2
58.62
3
3
1
3
3
65.97
4
1
2
2
3
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49.79
5
2
2
3
1
62.44
6
3
2
1
2
62.00
7
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1
3
3
2
45.36
8
2
3
1
3
54.78
9
3
3
, 百拇医药
2
1
55.58
k1
148.79
178.23
170.42
k2
175.84
174.23
163.99
k3
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183.55
155.72
173.77
k1
49.60
59.41
56.81
k2
58.61
58.08
54.66
k3
, 百拇医药
61.18
51.91
57.92
R
11.58
7.5
3.26
ΣY＝508.18，Y＝56.46，(ΣY)2＝258246.91R＝k最大-k最小
2.3 用正交设计试验方法进行方差分析，结果(见表3)。
表3 方差分析表 变异来源
, 百拇医药 自由度
均方
F值
P
A
2
111.078
38.333
P<0.05
B
2
48.073
16.589
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P>0.05
C
2
8.234
2.841
P>0.05
误差
8
0.754
方差分析结果显示各因素对盐酸小檗碱含量影响强度的大小顺序为A>B>C，也即主要影响因素为提取次数及提取时间，而加水量无明显影响。从工业大生产节约成本考虑，加水量可定为14倍量。故由实验结果确定最佳工艺为A3B1C1，即煎煮3次，3.5h，加水量14倍为最佳工艺。
, 百拇医药
3 讨论
3.1 在预试验中，曾采用常水、0.1%酸水、0.3%酸水、0.5%酸水提取，结果表明，用0.5%酸水提取，盐酸水檗碱含量明显高于常水提取量，故在此正交试验中采用0.5%酸水做溶媒。
3.2 本实验采用高效液相方法进行含量测定，操作简便，稳定性好。
3.3 正交设计的实验数据经回归处理，得回归方程，结合实践经验选择优化条件，结果可靠，建议在制剂研究中推广使用。
参考文献
1.赵陆华等：高效液相色谱法分析中药成分手册，中国医药科技出版社 ，北京，1994；548
2.庄平等：峨嵋山野生黄连个体生物量与生物碱含量研究 中草药 1994；25 (8)∶425
3.王达妹等：HPLC法测定黄连上清片中黄连素的含量 中成药 1995；17 (2)∶16
4.王杰等：从黄连中提取小檗碱的新方法研究 中国药学杂志 1994；29(8 )∶490
5.任士禾：反相高效液相色谱法测定脏连丸中黄连素的含量 中成药 1994；16(4)∶18, 百拇医药
单位：山东省烟台荣昌制药有限公司研究所
关键词：黄连；盐酸小檗碱含量；正交试验
海峡药学990388 提要 选用L9(34)正交试验法对黄连中盐酸小檗碱的提取工艺进行优选。结果认为A3B1C1为最佳提取工艺即煎煮3次，3.5h，加水量14倍。这样提取盐酸小檗碱得率量高，且经济、简便。
Optimal Seeking of Extract Proces s for Berberine Hydrochloride
in Rhizoma of Coptis Chinensis Frach by Orthogonal Test
, 百拇医药
Sunbo，Zhang Yongguang
(Rongchang Pharma cy Institute Yantai)
Optimal seeking of extract pro cess for berberine hydrochloride in Rhiz oma of Coptis Chinensis Franch by L9(3 4)orthogonal method.As a result，it is th e best condition to use for the Rhizoma Coptidis：adding 14 times of water，decoct ing for 3 times and 3.5 hours.This is th e best method for receiving the berberin e hydrochloride.
, 百拇医药
Key words Rhizoma Content determi natio n of berberin hydrochloride Orthogonal test
盐酸小檗碱是从黄连中提得的有效成分，据国内外文献报道，黄连具有泻火、燥湿、解毒、杀虫作用，多用于治疗细菌性痢疾、肺结核等疾病。药理研究表明，盐酸小檗碱能明显增强抗菌能力，与黄连的抗菌能力基本一致，盐酸小檗碱是黄连中的有效成分，提取盐酸小檗碱的得率多少直接影响到黄连药效，故本文就黄连提取工艺进行了研究，以期找出一种更合理更可行的生产工艺。本文就其水提部分的工艺进行了优化选择，现报道如下。
1 实验材料 黄连药材 由安徽药市购得的黄连饮片。经鉴定为毛莨科植物黄连Coptis Chinensis Franch的根茎。盐酸小檗碱对照品，由中国药品生物制品检定所提供。甲醇、无水乙醇、中性氧化铝均为国产分析纯。
2 方法与结果
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2.1 正交试验设计 根据盐酸小檗碱提取条件，选定煎煮次数、煎煮时间、加水量为因素，确定3因素，每因素取3个水平，选用L9(34)正交表进行试验，因素与水平安排(见表1)。
表1 因素水平表 水 平
因 素
A(煎煮次数)
B(煎煮时间)
C(加水量)
1
1次
3.5小时
14
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2
2次
2.5小时
18
3
3次
1.5小时
20
按照L9(34)表条件对黄连进行盐酸小檗碱的提取和测定，以其含量作为考察指标。
2.2 试验方法 2.2.1 样品的提取：取黄连药材9份，每份20g，破碎成粗粉，按照表2中1～9试验号所列条件进行正交试验。水煎液滤除药渣后浓缩至200ml。2.2.2 含量测定：标准溶液的制备：取经105℃干燥至恒重的盐酸小檗碱15mg，精密称定，置100ml量瓶中，加水溶解，并稀释至刻度，摇匀，备用。标准曲线的绘制：精密量取标准溶液1ml～7.5ml共6份，分别置10ml量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，在345nm波长处分别测定各对照品溶液的吸收度。经回归处理得直线回归方程：A＝-6.051×10-2C+2.249×10-6，r＝0.9999。盐酸小檗碱在0.1μg/ml～0.75μg/ml线性关系良好。测定方法：取2.2.1项下所得的溶液精密吸取1ml，过氧化铝柱(10g中性氧化铝)，用无水乙醇50ml洗脱，定容于50ml量瓶中，过滤，滤液做为供试液。采用高效液相色谱法测定盐酸小檗碱的含量。以乙腈：0.1MSDS(60∶40)用乙酸调pH4.8，其中SDS为十二烷基硫酸钠。考察因素与水平(见表2)。表2 正交试验设计及结果分析 实验号
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A
B
C
空白
含量(mg)
1
1
1
1
1
53.64
2
2
1
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2
58.62
3
3
1
3
3
65.97
4
1
2
2
3
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49.79
5
2
2
3
1
62.44
6
3
2
1
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62.00
7
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1
3
3
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45.36
8
2
3
1
3
54.78
9
3
3
, 百拇医药
2
1
55.58
k1
148.79
178.23
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k2
175.84
174.23
163.99
k3
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183.55
155.72
173.77
k1
49.60
59.41
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54.66
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51.91
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R
11.58
7.5
3.26
ΣY＝508.18，Y＝56.46，(ΣY)2＝258246.91R＝k最大-k最小
2.3 用正交设计试验方法进行方差分析，结果(见表3)。
表3 方差分析表 变异来源
, 百拇医药 自由度
均方
F值
P
A
2
111.078
38.333
P<0.05
B
2
48.073
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P>0.05
C
2
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P>0.05
误差
8
0.754
方差分析结果显示各因素对盐酸小檗碱含量影响强度的大小顺序为A>B>C，也即主要影响因素为提取次数及提取时间，而加水量无明显影响。从工业大生产节约成本考虑，加水量可定为14倍量。故由实验结果确定最佳工艺为A3B1C1，即煎煮3次，3.5h，加水量14倍为最佳工艺。
, 百拇医药
3 讨论
3.1 在预试验中，曾采用常水、0.1%酸水、0.3%酸水、0.5%酸水提取，结果表明，用0.5%酸水提取，盐酸水檗碱含量明显高于常水提取量，故在此正交试验中采用0.5%酸水做溶媒。
3.2 本实验采用高效液相方法进行含量测定，操作简便，稳定性好。
3.3 正交设计的实验数据经回归处理，得回归方程，结合实践经验选择优化条件，结果可靠，建议在制剂研究中推广使用。
参考文献
1.赵陆华等：高效液相色谱法分析中药成分手册，中国医药科技出版社 ，北京，1994；548
2.庄平等：峨嵋山野生黄连个体生物量与生物碱含量研究 中草药 1994；25 (8)∶425
3.王达妹等：HPLC法测定黄连上清片中黄连素的含量 中成药 1995；17 (2)∶16
4.王杰等：从黄连中提取小檗碱的新方法研究 中国药学杂志 1994；29(8 )∶490
5.任士禾：反相高效液相色谱法测定脏连丸中黄连素的含量 中成药 1994；16(4)∶18, 百拇医药