叶绿酸铜钠抗突变作用的实验研究
作者：蔡承惠 吴小南 黄 芳 汪家梨
单位：蔡承惠 永泰县卫生防疫站；吴小南 黄 芳 汪家梨 福建医科大学预防医学系
关键词：叶绿酸铜钠；抗突变作用
海峡药学990417 摘要 用小鼠骨髓细胞微核试验和小鼠睾丸染色体畸变试验探讨叶绿酸铜钠的抗突变作用。结果：叶绿酸铜钠能有效地抑制由环磷酰胺诱导的小鼠PCE微核的发生；在睾丸染色体畸变试验中，表现为对环磷酰胺诱导的小鼠精母细胞染色体畸变的抑制作用，由此表明，叶绿酸铜钠是一种有效的抗突变物质。
Study on Antimugenicity of Chlorophyll Cupric Sodiun
Cai Chenghui
(The Municipal Health and Anti-epidemic Station of Yongtai in Fujian)
, 百拇医药
Wu Xiaonan, Huang Fang, Wang Jiali
(Hygiene Department of Fujian Medical University)
Abstract The result has been observed the effectineness of chlorophyll cupric sodiun as inhibitor of mutagencity of cyclophosphamide through mouse bone marrow PCE MN test and mouse orchis chromosome aberration test.The result show that chlorophyll cupric sodiun exhibited potent activity against the mutagenic activity of cyclophosphamide，caused 21.53% and 42.37% inhibition in PCE MN test and 23.25% and 60.66% in chromosome aberration test repectively.According to the result we can conclude that chlorophyll cupric sodiun used as antimugenicity of anticarcinogen is very hopeful.
, 百拇医药
Key word Chlorophyll Cupric Sodiun Antimugenicity
叶绿素(Chlorophyll)广泛存在于绿色植物中，在微生物体内已证实叶绿素及其衍生物叶绿酸铜钠能抑制多种诱变剂和致癌物的诱变作用，其抗突变活性比维生素A、维生素E等公认的抗突变剂都强。叶绿素在哺乳动物细胞和整体水平的抗突变作用仅有少量报道，还有待证实[1]。本实验对叶绿酸铜钠的抗突变作用进行研究探讨，为开发利用叶绿素提供科学依据。
1 材料与方法
1.1 小鼠PCE微核试验 由福建医科大学实验动物中心提供3月龄伊朗雄性昆明种小鼠32只，按体重随机分为4组，每组8只，实验前普通喂养3 d；实验第1日起经口灌胃，给予不同液体1 ml/只/d，第一组为阴性对照组给蒸馏水，第二组为阳性对照组给蒸馏水，第三组为低浓度观察组给叶绿酸铜钠25 mg/kg.bt，第四组为主同浓度观察组给叶绿酸铜钠50 mg/kg.bt，连续灌胃28 d。实验第29日染毒，第二、三、四组皮下注射环磷酰胺(CP)，剂量80 mg/kg，第一组皮下注射同量生理盐水。染毒6 h后处死小鼠，取胸骨骨髓，进行涂片、固定、Giemsa染色、镜检及计数。每只小鼠计数1000个PCE细胞[3，4]。叶绿酸铜钠由Sigma公司馈赠。
, 百拇医药
1.2 小鼠睾丸染色体畸变试验 实验动物、分组及灌胃方法同上。实验第21天至第25天，第二、三、四组腹腔注射环磷酰胺(CP)，剂量20 mg/(kg.d)，第一组腹腔注射同量生理盐水。实验第28日每只小鼠腹腔注射4 mg/kg体重的秋水仙素，6 h后颈椎脱臼处死，取一侧睾丸去血污、被膜，1%柠檬酸低渗40 min，比例3∶1的甲醇冰醋酸混合液固定20 min，60%的冰醋酸完全软化曲精管，制冰片，Gimesa染色，记录精母细胞染色体断片、断裂及易位的出现数，染色体裂隙不计入，每个标本观察精母细胞100个[5]。
1.3 数据分析 实验数据在486微机上采用Foxpro建立数据库，并借助于Spssv6.0 For Windows软件对数据进行统计分析。PCE微核率数据采用似然比检验，睾丸精母细胞染色体畸变率数据采用χ2检验。
2 结果与分析
, http://www.100md.com 2.1 叶绿酸铜钠对环磷酰胺诱导的小鼠PCE微核率的抑制作用(见表1)。
表1 各组小鼠PCE微核实验结果 分 组
微核数/1000(X-±S)
抑制率(%)
阴性对照组
3.20±1.03
阳性对照组
14.35±4.31
低浓度组
11.26±3.54*＃＃
21.53
, 百拇医药
高浓度组
8.27±3.48**＃＃
42.37
与阳性对照组比较 *：P<0.05 **P<0.01
与阴性对照组比较 ＃：P<0.05 ＃＃：P<0.01
由表1可见，两个浓度组对环磷酰胺诱导的小鼠PCE微核率均有明显的抑制作用(P<0.05)，抑制率分别为21.53%和42.37%。
2.2 叶绿酸铜钠对环磷酰胺诱导的小鼠精母细胞染色体畸变的抑制作用(见表2)。
表2 各组小鼠睾丸染色体畸变试验结果 分 组
, 百拇医药 观察细胞数
断片、断裂
及易位
细胞畸变率
(%)
抑制率(%)
阴性对照组
800
6
0.8
阳性对照组
800
50
, 百拇医药
6.1
低浓度组
800
34
4.3**＃＃
23.25
高浓度组
800
19
2.4**＃＃
60.66
与阳性对照组比较 *：P<0.05 **P<0.01
, 百拇医药
与阴性对照组比较 ＃：P<0.05 ＃＃：P<0.01
由表2可见，两个浓度组对环磷酰胺诱导的小鼠精母细胞染色体畸变率均有明显的抑制作用(P<0.01)，抑制率分别为23.25%和60.66%。
3 讨论
Lai于1979年首先提出叶绿素有抗突变作用，之后，许多学者对叶绿素及其衍生物叶绿酸铜钠的抗突变性进行了研究。研究方法多采用Ames试验，结果表明，叶绿素及其衍生物叶绿酸铜钠对环境中的许多致突变物质(如B(a)P、AFB1)的致突变作用均有抑制作用[1]。除了Ames试验外，有关叶绿素在其它水平上的抗突变作用也有少数一些报道。本实验结果，叶绿酸铜钠能有效地抑制由环磷酰胺诱导的小鼠PCE微核的发生；在睾丸染色体畸变试验中，表现为对环磷酰胺诱导的小鼠精母细胞染色体畸变的抑制作用，由此表明，叶绿酸铜钠是一种有效的抗突变物质。其抗突变作用的机理可能涉及多方面，许多学者认为可能与酶或非酶系统的清除自由基、抗氧化作用及与致突变物质的直接作用有关[6，7]。叶绿素及其衍生物的抗突变作用提示了可能具有抗肿瘤的作用，虽然至今还没有直接抗肿瘤作用的实验报道，也没有实际用于肿瘤的预防，但可预见，由于叶绿素来源丰富、没有毒性，由其较肯定的抗突变作用深入探讨其抗肿瘤作用，并使之用于肿瘤、某些心血管疾病和衰老的预防，该研究领域具有广阔的发展前景。
, http://www.100md.com
参考文献
1.朱心强(综述)：叶绿素的抗诱变作用及其机理 国外医学卫生学分册 1992；19(4)∶214
2.张志良等.植物生物化学技术与方法，北京，农业出版社，1986；197
3.李寿祺(主编)：卫生毒理学基本原理与方法，第一版，成都，四川科学技术出版社，1987，457
4.Gillian.E A，et al：SCE frequencies in lymphocytes of systemic lupuserythematosus patients.Mut Res 1984；128
5.黄幸纾(主编)：环境化学物致突变、致畸、致癌试验方法，第一版，杭州，浙江科学技术出版社，1985；258
6.Renner HW：In vivo effects of single of combined dietary antimutagen mutagen-induced chromosomal aberrations.Mut Res 1990；244∶185
7.Ong T，et al.Chlorophyllin：a potent antimutagen against environmental and dietary complex mixtures.Mut Res 1986；137∶111, http://www.100md.com
单位：蔡承惠 永泰县卫生防疫站；吴小南 黄 芳 汪家梨 福建医科大学预防医学系
关键词：叶绿酸铜钠；抗突变作用
海峡药学990417 摘要 用小鼠骨髓细胞微核试验和小鼠睾丸染色体畸变试验探讨叶绿酸铜钠的抗突变作用。结果：叶绿酸铜钠能有效地抑制由环磷酰胺诱导的小鼠PCE微核的发生；在睾丸染色体畸变试验中，表现为对环磷酰胺诱导的小鼠精母细胞染色体畸变的抑制作用，由此表明，叶绿酸铜钠是一种有效的抗突变物质。
Study on Antimugenicity of Chlorophyll Cupric Sodiun
Cai Chenghui
(The Municipal Health and Anti-epidemic Station of Yongtai in Fujian)
, 百拇医药
Wu Xiaonan, Huang Fang, Wang Jiali
(Hygiene Department of Fujian Medical University)
Abstract The result has been observed the effectineness of chlorophyll cupric sodiun as inhibitor of mutagencity of cyclophosphamide through mouse bone marrow PCE MN test and mouse orchis chromosome aberration test.The result show that chlorophyll cupric sodiun exhibited potent activity against the mutagenic activity of cyclophosphamide，caused 21.53% and 42.37% inhibition in PCE MN test and 23.25% and 60.66% in chromosome aberration test repectively.According to the result we can conclude that chlorophyll cupric sodiun used as antimugenicity of anticarcinogen is very hopeful.
, 百拇医药
Key word Chlorophyll Cupric Sodiun Antimugenicity
叶绿素(Chlorophyll)广泛存在于绿色植物中，在微生物体内已证实叶绿素及其衍生物叶绿酸铜钠能抑制多种诱变剂和致癌物的诱变作用，其抗突变活性比维生素A、维生素E等公认的抗突变剂都强。叶绿素在哺乳动物细胞和整体水平的抗突变作用仅有少量报道，还有待证实[1]。本实验对叶绿酸铜钠的抗突变作用进行研究探讨，为开发利用叶绿素提供科学依据。
1 材料与方法
1.1 小鼠PCE微核试验 由福建医科大学实验动物中心提供3月龄伊朗雄性昆明种小鼠32只，按体重随机分为4组，每组8只，实验前普通喂养3 d；实验第1日起经口灌胃，给予不同液体1 ml/只/d，第一组为阴性对照组给蒸馏水，第二组为阳性对照组给蒸馏水，第三组为低浓度观察组给叶绿酸铜钠25 mg/kg.bt，第四组为主同浓度观察组给叶绿酸铜钠50 mg/kg.bt，连续灌胃28 d。实验第29日染毒，第二、三、四组皮下注射环磷酰胺(CP)，剂量80 mg/kg，第一组皮下注射同量生理盐水。染毒6 h后处死小鼠，取胸骨骨髓，进行涂片、固定、Giemsa染色、镜检及计数。每只小鼠计数1000个PCE细胞[3，4]。叶绿酸铜钠由Sigma公司馈赠。
, 百拇医药
1.2 小鼠睾丸染色体畸变试验 实验动物、分组及灌胃方法同上。实验第21天至第25天，第二、三、四组腹腔注射环磷酰胺(CP)，剂量20 mg/(kg.d)，第一组腹腔注射同量生理盐水。实验第28日每只小鼠腹腔注射4 mg/kg体重的秋水仙素，6 h后颈椎脱臼处死，取一侧睾丸去血污、被膜，1%柠檬酸低渗40 min，比例3∶1的甲醇冰醋酸混合液固定20 min，60%的冰醋酸完全软化曲精管，制冰片，Gimesa染色，记录精母细胞染色体断片、断裂及易位的出现数，染色体裂隙不计入，每个标本观察精母细胞100个[5]。
1.3 数据分析 实验数据在486微机上采用Foxpro建立数据库，并借助于Spssv6.0 For Windows软件对数据进行统计分析。PCE微核率数据采用似然比检验，睾丸精母细胞染色体畸变率数据采用χ2检验。
2 结果与分析
, http://www.100md.com 2.1 叶绿酸铜钠对环磷酰胺诱导的小鼠PCE微核率的抑制作用(见表1)。
表1 各组小鼠PCE微核实验结果 分 组
微核数/1000(X-±S)
抑制率(%)
阴性对照组
3.20±1.03
阳性对照组
14.35±4.31
低浓度组
11.26±3.54*＃＃
21.53
, 百拇医药
高浓度组
8.27±3.48**＃＃
42.37
与阳性对照组比较 *：P<0.05 **P<0.01
与阴性对照组比较 ＃：P<0.05 ＃＃：P<0.01
由表1可见，两个浓度组对环磷酰胺诱导的小鼠PCE微核率均有明显的抑制作用(P<0.05)，抑制率分别为21.53%和42.37%。
2.2 叶绿酸铜钠对环磷酰胺诱导的小鼠精母细胞染色体畸变的抑制作用(见表2)。
表2 各组小鼠睾丸染色体畸变试验结果 分 组
, 百拇医药 观察细胞数
断片、断裂
及易位
细胞畸变率
(%)
抑制率(%)
阴性对照组
800
6
0.8
阳性对照组
800
50
, 百拇医药
6.1
低浓度组
800
34
4.3**＃＃
23.25
高浓度组
800
19
2.4**＃＃
60.66
与阳性对照组比较 *：P<0.05 **P<0.01
, 百拇医药
与阴性对照组比较 ＃：P<0.05 ＃＃：P<0.01
由表2可见，两个浓度组对环磷酰胺诱导的小鼠精母细胞染色体畸变率均有明显的抑制作用(P<0.01)，抑制率分别为23.25%和60.66%。
3 讨论
Lai于1979年首先提出叶绿素有抗突变作用，之后，许多学者对叶绿素及其衍生物叶绿酸铜钠的抗突变性进行了研究。研究方法多采用Ames试验，结果表明，叶绿素及其衍生物叶绿酸铜钠对环境中的许多致突变物质(如B(a)P、AFB1)的致突变作用均有抑制作用[1]。除了Ames试验外，有关叶绿素在其它水平上的抗突变作用也有少数一些报道。本实验结果，叶绿酸铜钠能有效地抑制由环磷酰胺诱导的小鼠PCE微核的发生；在睾丸染色体畸变试验中，表现为对环磷酰胺诱导的小鼠精母细胞染色体畸变的抑制作用，由此表明，叶绿酸铜钠是一种有效的抗突变物质。其抗突变作用的机理可能涉及多方面，许多学者认为可能与酶或非酶系统的清除自由基、抗氧化作用及与致突变物质的直接作用有关[6，7]。叶绿素及其衍生物的抗突变作用提示了可能具有抗肿瘤的作用，虽然至今还没有直接抗肿瘤作用的实验报道，也没有实际用于肿瘤的预防，但可预见，由于叶绿素来源丰富、没有毒性，由其较肯定的抗突变作用深入探讨其抗肿瘤作用，并使之用于肿瘤、某些心血管疾病和衰老的预防，该研究领域具有广阔的发展前景。
, http://www.100md.com
参考文献
1.朱心强(综述)：叶绿素的抗诱变作用及其机理 国外医学卫生学分册 1992；19(4)∶214
2.张志良等.植物生物化学技术与方法，北京，农业出版社，1986；197
3.李寿祺(主编)：卫生毒理学基本原理与方法，第一版，成都，四川科学技术出版社，1987，457
4.Gillian.E A，et al：SCE frequencies in lymphocytes of systemic lupuserythematosus patients.Mut Res 1984；128
5.黄幸纾(主编)：环境化学物致突变、致畸、致癌试验方法，第一版，杭州，浙江科学技术出版社，1985；258
6.Renner HW：In vivo effects of single of combined dietary antimutagen mutagen-induced chromosomal aberrations.Mut Res 1990；244∶185
7.Ong T，et al.Chlorophyllin：a potent antimutagen against environmental and dietary complex mixtures.Mut Res 1986；137∶111, http://www.100md.com