电化学检测器在测定肾上腺素中的应用
作者：吕利红 齐荔红
单位：吕利红(金陵药业福州梅峰制药厂 350025)；齐荔红(金陵药业福州梅峰制药厂 350025)
关键词：反相色谱法，电化学检测，肾上腺素
海峡药学000120
摘要 利用电化学检测器反相色谱法测定了肾上腺素含量，以甲醇：10 mM Na2HPO4(20∶80)为流动相，流速1.0 ml.mi-1n，检测器电压为0.6 V，检测限为50 pg，相关系数为0.9996，重点讨论了电化学检测器应用中遇到的问题。
A Method for Determination of Adrenaline by RP-HPLC with ECD
, 百拇医药
Lu Lihong Qi Lihong
(Fuzhou Meifeng Pharmaceutical Factorg 350025)
Abstract A method for determination of Adrenaline by RP-HPLC with Ecd was established.Adrenaline was analysed with a column of Hypersil ODS(5μm 4.0×250mm i.d.)，mobile phase of V(MeOH)：V(10mMNa2HPO4)＝20∶80，flow rate of 1.0ml.min-1.The detector potential was+0.6V.The minimum detectable limit was 50pg.The correlation coefficient between the electrochemical signal and the compound mass concentrations was 0.9996.Problems of ECD were discussed.
, 百拇医药
Key words HPLC Electrochemical detection，Adrenaline
电化学检测器与紫外检测器相比，前者有着灵敏度高、选择性好的优点，在实际应用中较紫外检测器与荧光检测器较少，但由于其本身的优点，在今后的应用中会越来越普遍。本文通过利用电化学检测器测定肾上腺素含量，并着重讨论其使用中的问题。
1 仪器与试剂
1.1 仪器 HP1100型液相色谱仪；HP1049A型电化学检测器：pHs-25型酸度计(上海分析仪器厂)
1.2 试剂 肾上腺素、去甲肾上腺素、色氨酸由广州市药检所提供，Na2HPO4为国产分析纯试剂，十二烷基硫酸钠为上海Sangon公司分析纯产品。
2 方法与结果
, 百拇医药
2.1 色谱条件 参考中国药典(1995年版)方法[1]加以改进。色谱柱为Hypersil ODS(5 μm4.0×250 mm i.d.)；流动相：甲醇：10 mM Na2HPO4(20∶80，V/V)内含0.5 mM十二烷基硫酸钠，pH3.8；流速1.0 ml.min-1。肾上腺素、去甲肾上腺素、色氨酸的分离色谱图(见图1)。
时间(min)
图1 肾上腺素、去甲肾上腺素、色氨酸的分离色谱图
1：色氨酸 2：去甲肾上腺素 3：肾上腺素
电化学检测器设定 电极：玻璃炭电极；氧化模式；检测电压：0.6V；量程：50 nA。
, 百拇医药
2.2 线性关系考察 将肾上腺素与去甲肾上腺素分别配为5、10、20、40、80 pg.μl-1的梯度溶液，以100 pg.μl-1色氨酸溶液为内标，分别进样10 μl，按所选择的色谱条件进行测定。以峰高(Y)为纵坐标，以进样量为横坐标(x)，进行线性回归。得回归方程分别为：
肾上腺素：Y＝0.1322x+0.03352，r＝0.9996
去甲肾上腺素：Y＝0.09878x+0.03896，r＝0.9994。
结果表示进样量在50 pg～800 pg的范围内时，均有良好的线性关系。
2.3 精密度试验 取肾上腺素、去甲肾上腺素对照品溶液，进样10 μl，连续测定5次，按所选择的色谱条件进行测定，结果表明该方法精密度良好(见表1、2)。
, 百拇医药
表1 肾上腺素的日内与日间精密度(n＝5) 日内精密度
日间精密度
加入量
实测量
RSD
平均RSD
加入量
实测量
RSD
平均RSD
(pg.μl-1)
(pg.μl-1)
, 百拇医药
(%)
(%)
(pg.μl-1)
(pg.μl-1)
(%)
(%)
75
74.08
2.80
75
75.24
3.86
, 百拇医药
250
251.69
3.42
3.13
250
248.97
3.33
3.79
500
502.13
3.18
500
500.32
, 百拇医药
4.18
表2 去甲肾上腺素的日内与日间精密度(n＝5) 日内精密度
日间精密度
加入量
实测量
RSD
平均RSD
加入量
实测量
RSD
平均RSD
(pg.μl-1)
, http://www.100md.com
(pg.μl-1)
(%)
(%)
(pg.μl-1)
(pg.μl-1)
(%)
(%)
75
74.86
3.26
75
, 百拇医药
75.84
3.16
250
252.41
2.98
3.45
250
249.87
2.33
3.19
500
503.55
4.11
, 百拇医药
500
503.32
4.09
3 小结
在液相色谱中对那些无紫外吸收与不能发生荧光，但具有电化学活性的物质，可以利用电化学检测法。本文利用了其中的安培检测器来测定肾上腺素得到了良好的结果。
在本实验中，我们认为电化学检测器应用中关键的几个问题有：①流动相配制的问题。由于电化学检测法灵敏度高，对微量的有电化学活性物质即有明显反应，因此流动相配制过程中或多或少带入的污染即成为重要的干扰，这种干扰可能为试剂，也可能为溶剂特别是水所引起。其中水的污染为绝大多数。本实验在用普通蒸馏水时，其背景电流就已超过了仪器的量程范围，改用注射级用水后背景电流方下降至可接受范围内。故应尽量用高品质的试剂及水。②电压选择问题。电压的选择对最终实验结果也有着重要的影响。电压低得不到理想的灵敏度，电压高则信噪比太差，得不到理想的结果。本实验选择电压时，将紫外与电化学检测器串接使用，利用紫外检测器判定肾上腺素的保留时间后，再逐渐降低肾上腺素的浓度，同时调节检测电压，可较快的得到理想的检测电压值。③流动相中要有一定的导电性，一般用盐的缓冲液，但在使用梯度洗脱时，其基线波动较大，解决办法尚有待进一步探讨。
参考文献
[1]中国药典1995年版二部；381, http://www.100md.com
单位：吕利红(金陵药业福州梅峰制药厂 350025)；齐荔红(金陵药业福州梅峰制药厂 350025)
关键词：反相色谱法，电化学检测，肾上腺素
海峡药学000120
摘要 利用电化学检测器反相色谱法测定了肾上腺素含量，以甲醇：10 mM Na2HPO4(20∶80)为流动相，流速1.0 ml.mi-1n，检测器电压为0.6 V，检测限为50 pg，相关系数为0.9996，重点讨论了电化学检测器应用中遇到的问题。
A Method for Determination of Adrenaline by RP-HPLC with ECD
, 百拇医药
Lu Lihong Qi Lihong
(Fuzhou Meifeng Pharmaceutical Factorg 350025)
Abstract A method for determination of Adrenaline by RP-HPLC with Ecd was established.Adrenaline was analysed with a column of Hypersil ODS(5μm 4.0×250mm i.d.)，mobile phase of V(MeOH)：V(10mMNa2HPO4)＝20∶80，flow rate of 1.0ml.min-1.The detector potential was+0.6V.The minimum detectable limit was 50pg.The correlation coefficient between the electrochemical signal and the compound mass concentrations was 0.9996.Problems of ECD were discussed.
, 百拇医药
Key words HPLC Electrochemical detection，Adrenaline
电化学检测器与紫外检测器相比，前者有着灵敏度高、选择性好的优点，在实际应用中较紫外检测器与荧光检测器较少，但由于其本身的优点，在今后的应用中会越来越普遍。本文通过利用电化学检测器测定肾上腺素含量，并着重讨论其使用中的问题。
1 仪器与试剂
1.1 仪器 HP1100型液相色谱仪；HP1049A型电化学检测器：pHs-25型酸度计(上海分析仪器厂)
1.2 试剂 肾上腺素、去甲肾上腺素、色氨酸由广州市药检所提供，Na2HPO4为国产分析纯试剂，十二烷基硫酸钠为上海Sangon公司分析纯产品。
2 方法与结果
, 百拇医药
2.1 色谱条件 参考中国药典(1995年版)方法[1]加以改进。色谱柱为Hypersil ODS(5 μm4.0×250 mm i.d.)；流动相：甲醇：10 mM Na2HPO4(20∶80，V/V)内含0.5 mM十二烷基硫酸钠，pH3.8；流速1.0 ml.min-1。肾上腺素、去甲肾上腺素、色氨酸的分离色谱图(见图1)。
时间(min)图1 肾上腺素、去甲肾上腺素、色氨酸的分离色谱图
1：色氨酸 2：去甲肾上腺素 3：肾上腺素
电化学检测器设定 电极：玻璃炭电极；氧化模式；检测电压：0.6V；量程：50 nA。
, 百拇医药
2.2 线性关系考察 将肾上腺素与去甲肾上腺素分别配为5、10、20、40、80 pg.μl-1的梯度溶液，以100 pg.μl-1色氨酸溶液为内标，分别进样10 μl，按所选择的色谱条件进行测定。以峰高(Y)为纵坐标，以进样量为横坐标(x)，进行线性回归。得回归方程分别为：
肾上腺素：Y＝0.1322x+0.03352，r＝0.9996
去甲肾上腺素：Y＝0.09878x+0.03896，r＝0.9994。
结果表示进样量在50 pg～800 pg的范围内时，均有良好的线性关系。
2.3 精密度试验 取肾上腺素、去甲肾上腺素对照品溶液，进样10 μl，连续测定5次，按所选择的色谱条件进行测定，结果表明该方法精密度良好(见表1、2)。
, 百拇医药
表1 肾上腺素的日内与日间精密度(n＝5) 日内精密度
日间精密度
加入量
实测量
RSD
平均RSD
加入量
实测量
RSD
平均RSD
(pg.μl-1)
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, 百拇医药
(%)
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75
74.08
2.80
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3.86
, 百拇医药
250
251.69
3.42
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248.97
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3.79
500
502.13
3.18
500
500.32
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4.18
表2 去甲肾上腺素的日内与日间精密度(n＝5) 日内精密度
日间精密度
加入量
实测量
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平均RSD
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3 小结
在液相色谱中对那些无紫外吸收与不能发生荧光，但具有电化学活性的物质，可以利用电化学检测法。本文利用了其中的安培检测器来测定肾上腺素得到了良好的结果。
在本实验中，我们认为电化学检测器应用中关键的几个问题有：①流动相配制的问题。由于电化学检测法灵敏度高，对微量的有电化学活性物质即有明显反应，因此流动相配制过程中或多或少带入的污染即成为重要的干扰，这种干扰可能为试剂，也可能为溶剂特别是水所引起。其中水的污染为绝大多数。本实验在用普通蒸馏水时，其背景电流就已超过了仪器的量程范围，改用注射级用水后背景电流方下降至可接受范围内。故应尽量用高品质的试剂及水。②电压选择问题。电压的选择对最终实验结果也有着重要的影响。电压低得不到理想的灵敏度，电压高则信噪比太差，得不到理想的结果。本实验选择电压时，将紫外与电化学检测器串接使用，利用紫外检测器判定肾上腺素的保留时间后，再逐渐降低肾上腺素的浓度，同时调节检测电压，可较快的得到理想的检测电压值。③流动相中要有一定的导电性，一般用盐的缓冲液，但在使用梯度洗脱时，其基线波动较大，解决办法尚有待进一步探讨。
参考文献
[1]中国药典1995年版二部；381, http://www.100md.com