基因重组别藻蓝蛋白对小鼠S180肉瘤的抑制作用
作者：唐书明 黄 芳 窦昌贵 庄桂霞 秦 松 王希华 邹立红
单位：唐书明 黄芳 窦昌贵 庄桂霞(中国药科大学海洋药物中心，南京210038)；邹立红 秦松 王希华(中国科学院海洋研究所，青岛266071)
关键词：基因重组别藻蓝蛋白；S180肉瘤；白细胞；胸腺
摘 要 研究基因重组别藻蓝蛋白 摘 要 研究基因重组别藻蓝蛋白(RAPC)的抑瘤作用，给皮下接种S180瘤细胞的小鼠，每天分别ig及ipRAPC13.4mg/kg，6.7mg/kg和3.4mg/kg，共10d，第11d处死小鼠，称瘤重和胸腺重，计数白细胞。结果表明，RAPC对小鼠S180肉瘤有显著抑制作用，瘤重抑制率在45%～64%之间，ig及ip均有效，对荷瘤小鼠的胸腺指数和白细胞数量无明显影响。
Elementary Study of Recombinant Allophycocyanin(RAPC)
, 百拇医药
on S180 Tumor in Mice
Tang Shuming,Huang Fang,Dou Changgui,Zhuang Guixia，Qin Song1,Wang Xihua1,Zhou Lihong1
(China Pharmaceutical University,Nanjing 210038；
1Institute of Oceano logy,the Chinese Academy of Sciences,Qingdao 266071)
Abstract The mice were infecfed by S180, then treated with Recombina nt Allophycocyanin(RAPC) ig or ip 13.4mg/kg,6.7mg/kg and 3.4mg/kg per day respectively for ten days.The animal were killed, tumor clot or thymus were wei ghed and the leukocyte were counted.The results sho wed that RAP C could decrease weight of tumor significatly.The inhibitory rate ranged from 45% to 64% and had no obvious effect on Thymus Index and leukocyte count.
, 百拇医药
Key Words RAPC(recombinant allophycocyanin), S180 tumor,WBC, Thymus.
藻胆蛋白(Phycobiliprotein)是某些藻类特有的重要蛋白质，主要包括藻蓝蛋白、藻红蛋白和别藻蓝蛋白三类，其抗癌、抗放射及促进造血功能的作用，国内外均有研究[1～4]。但从天然藻类提取、纯化藻胆蛋白，工艺复杂，含量不稳定。中国科学院海洋研究所与美国加州大学合作，成功地克隆了钝顶螺旋藻(Spirulinaplatensis)别藻蓝蛋白的基因，并通过构成融合蛋白的方式，实现了在大肠杆菌中的高效表达，以此生产高纯度别藻蓝蛋白(Recombinant Allophycocyanin,RAPC)。本文用动物移植性肿瘤，研究RAPC的抑瘤作用。
1 材 料
1.1 药物
, 百拇医药
基因重组别藻蓝蛋白(RAPC)由中国科学海洋研究所秦松博士提供，系基因工程产品经提取、纯化的别藻蓝蛋白水溶液，浓度0.67mg/ml，冰冻保存，临用时解冻，以蒸馏水稀释至所需浓度，小鼠灌胃或腹腔注射(以生理盐水稀释)容积均按体重为0.2ml/10g，剂量按预试验结果确定。环磷酰胺(CY)，上海第12制药厂。
1.2 动物
ICR小鼠，18～20g，雄性，中国药科大学实验动物中心提供，合格证号：苏动(质)字93021号。S180肉瘤瘤株移自江苏省肿瘤研究所，本室传代，在无菌操作下，每鼠右前腋窝部皮下接种瘤细胞悬液0.2ml(镜检含瘤细胞数9.23×107个/ml)。
2 方 法[5]
小鼠接种瘤细胞次日，按体重随机分5组，每组10只，于接种后24h给药。大、中、小3个剂量给药组分别igRAPC13.4mg/kg，6.7mg/kg和3.4mg/kg。阳性对照igCY20mg/kg，空白对照组ig生理盐水，均以0.2ml/10g等容积灌胃，连续10d。末次给药后24h，小鼠称重，眼眶取血，作白细胞计数；脱颈椎处死，剥取瘤块，分离、摘取胸腺，电子天平称湿重，计算瘤重抑制率和胸腺指数。
, 百拇医药
3 结 果
抑瘤作用及胸腺指数见表1、表2。
Tab l Effects of RAPC on tumor weigh tin mice
Groups
Animal
number
Dose(ig)
(mg/kg.d)
Tumor we ight
(g,
± S)
, 百拇医药
Inhibitory rate
(%,)
Control
10
2.244±0.569
CY
10
20.0×10
0.656±0.241***
70.8
, 百拇医药
RAPC
10
13.4×10
0.895±0.372***
60.1
RAPC
10
6.7×10
0.942±0.431***
58.0
RAPC
10
, 百拇医药
3.4×10
1.216±0.422***
45.8
All data were analyzed by t-test compared to control ***P<0.01Tab 2 Effects of RAPC on Leukocyte count and Thymus Index in mice
Groups
Animal
number
Dose
(mg/kg.d)
, 百拇医药
WBC
(×109/L,±S)
Thymus index
(mg/kg,±S)
Control
10
8.7±1.32
2.67±0.68
, 百拇医药
CY
10
20.0×10
6.2±0.46***
1.23±0.24***
RAPC
10
6.7×10
9.4±1.43***
2.57±0.52*
RAPC
, http://www.100md.com
10
3.4×10
8.6±1.22***
2.35±0.46*
Compared with control *P>0.05, ***P<0.01
另批实验， 采用腹腔注射给药， 结果见表3。
Tab 3 Effects of RAPC on tumor weight tumor in mice
Groups
Animal
, 百拇医药
number
Dose(ip)
(mg/kg.d)
Tumor weight
(g,±S)
Inhibi tory rate
(%,)
, http://www.100md.com Control
10
2.314±0.526
CY
10
20.0×10
0.581±0.234***
74.9
RAPC
10
6.7×10
0.826±0.421***
, 百拇医药
64.3
RAPC
10
3.4×10
1.182±0.483***
48.9
Compared with control ***P<0.01
由表1～3可见，RAPC对小鼠S180肉瘤有显著抑制作用，剂量13.4mg/kg，6.7mg/kg和3.4mg/kg的瘤重抑制率分别在45%至64%之间，灌胃及腹腔给药均有效，对荷瘤小鼠的白细胞数量和胸腺指数均无明显影响。
4 结 语
, 百拇医药
试验结果表明，RAPC对小鼠S180肉瘤具有显著抑制作用，并且不具有化疗药(CY)对白细胞和胸腺的毒副反应，因而对实体瘤的治疗应用具有良好的前景，值得深入研究。
中国生物工程中心“九五”攻关项目编号96-C02-04-03
参考文献
1 张成武，殷志敏，欧阳平凯.藻胆蛋白的开发与利用.中国海洋药物杂志，1995，14(3)：52
2 蔡心涵，何立明，蒋家伦，等.螺旋藻藻蓝蛋白对癌激光疗法增敏作用的实验研究.中国海洋药物杂志，1995，14(1)：15
3 张成武，曾昭琪，张媛贞，等.钝顶螺旋藻多糖和藻蓝蛋白对小鼠急性放射病的防护作用.营养学报，1996，18(3)：327
4 Shinohara K,Okura Y,Koyano T,et al.Algal phycocyanins promote growth of human cells in culture. (Food Prot Preserv Div, Na tl Food Res Inst,Tsukuba Japan 305) In vitro cell DevBiol，1988, 24 (10)：1057
5 徐叔云，卞如濂，陈修，等.药理实验方法学.第2版.北京：人民卫 生出版社，1994.1432
收稿日期：1999-03-02, 百拇医药
单位：唐书明 黄芳 窦昌贵 庄桂霞(中国药科大学海洋药物中心，南京210038)；邹立红 秦松 王希华(中国科学院海洋研究所，青岛266071)
关键词：基因重组别藻蓝蛋白；S180肉瘤；白细胞；胸腺
摘 要 研究基因重组别藻蓝蛋白 摘 要 研究基因重组别藻蓝蛋白(RAPC)的抑瘤作用，给皮下接种S180瘤细胞的小鼠，每天分别ig及ipRAPC13.4mg/kg，6.7mg/kg和3.4mg/kg，共10d，第11d处死小鼠，称瘤重和胸腺重，计数白细胞。结果表明，RAPC对小鼠S180肉瘤有显著抑制作用，瘤重抑制率在45%～64%之间，ig及ip均有效，对荷瘤小鼠的胸腺指数和白细胞数量无明显影响。
Elementary Study of Recombinant Allophycocyanin(RAPC)
, 百拇医药
on S180 Tumor in Mice
Tang Shuming,Huang Fang,Dou Changgui,Zhuang Guixia，Qin Song1,Wang Xihua1,Zhou Lihong1
(China Pharmaceutical University,Nanjing 210038；
1Institute of Oceano logy,the Chinese Academy of Sciences,Qingdao 266071)
Abstract The mice were infecfed by S180, then treated with Recombina nt Allophycocyanin(RAPC) ig or ip 13.4mg/kg,6.7mg/kg and 3.4mg/kg per day respectively for ten days.The animal were killed, tumor clot or thymus were wei ghed and the leukocyte were counted.The results sho wed that RAP C could decrease weight of tumor significatly.The inhibitory rate ranged from 45% to 64% and had no obvious effect on Thymus Index and leukocyte count.
, 百拇医药
Key Words RAPC(recombinant allophycocyanin), S180 tumor,WBC, Thymus.
藻胆蛋白(Phycobiliprotein)是某些藻类特有的重要蛋白质，主要包括藻蓝蛋白、藻红蛋白和别藻蓝蛋白三类，其抗癌、抗放射及促进造血功能的作用，国内外均有研究[1～4]。但从天然藻类提取、纯化藻胆蛋白，工艺复杂，含量不稳定。中国科学院海洋研究所与美国加州大学合作，成功地克隆了钝顶螺旋藻(Spirulinaplatensis)别藻蓝蛋白的基因，并通过构成融合蛋白的方式，实现了在大肠杆菌中的高效表达，以此生产高纯度别藻蓝蛋白(Recombinant Allophycocyanin,RAPC)。本文用动物移植性肿瘤，研究RAPC的抑瘤作用。
1 材 料
1.1 药物
, 百拇医药
基因重组别藻蓝蛋白(RAPC)由中国科学海洋研究所秦松博士提供，系基因工程产品经提取、纯化的别藻蓝蛋白水溶液，浓度0.67mg/ml，冰冻保存，临用时解冻，以蒸馏水稀释至所需浓度，小鼠灌胃或腹腔注射(以生理盐水稀释)容积均按体重为0.2ml/10g，剂量按预试验结果确定。环磷酰胺(CY)，上海第12制药厂。
1.2 动物
ICR小鼠，18～20g，雄性，中国药科大学实验动物中心提供，合格证号：苏动(质)字93021号。S180肉瘤瘤株移自江苏省肿瘤研究所，本室传代，在无菌操作下，每鼠右前腋窝部皮下接种瘤细胞悬液0.2ml(镜检含瘤细胞数9.23×107个/ml)。
2 方 法[5]
小鼠接种瘤细胞次日，按体重随机分5组，每组10只，于接种后24h给药。大、中、小3个剂量给药组分别igRAPC13.4mg/kg，6.7mg/kg和3.4mg/kg。阳性对照igCY20mg/kg，空白对照组ig生理盐水，均以0.2ml/10g等容积灌胃，连续10d。末次给药后24h，小鼠称重，眼眶取血，作白细胞计数；脱颈椎处死，剥取瘤块，分离、摘取胸腺，电子天平称湿重，计算瘤重抑制率和胸腺指数。
, 百拇医药
3 结 果
抑瘤作用及胸腺指数见表1、表2。
Tab l Effects of RAPC on tumor weigh tin mice
Groups
Animal
number
Dose(ig)
(mg/kg.d)
Tumor we ight
(g,
± S), 百拇医药
Inhibitory rate
(%,
)Control
10
2.244±0.569
CY
10
20.0×10
0.656±0.241***
70.8
, 百拇医药
RAPC
10
13.4×10
0.895±0.372***
60.1
RAPC
10
6.7×10
0.942±0.431***
58.0
RAPC
10
, 百拇医药
3.4×10
1.216±0.422***
45.8
All data were analyzed by t-test compared to control ***P<0.01Tab 2 Effects of RAPC on Leukocyte count and Thymus Index in mice
Groups
Animal
number
Dose
(mg/kg.d)
, 百拇医药
WBC
(×109/L,
±S)Thymus index
(mg/kg,
±S)Control
10
8.7±1.32
2.67±0.68
, 百拇医药
CY
10
20.0×10
6.2±0.46***
1.23±0.24***
RAPC
10
6.7×10
9.4±1.43***
2.57±0.52*
RAPC
, http://www.100md.com
10
3.4×10
8.6±1.22***
2.35±0.46*
Compared with control *P>0.05, ***P<0.01
另批实验， 采用腹腔注射给药， 结果见表3。
Tab 3 Effects of RAPC on tumor weight tumor in mice
Groups
Animal
, 百拇医药
number
Dose(ip)
(mg/kg.d)
Tumor weight
(g,
±S)Inhibi tory rate
(%,
), http://www.100md.com Control
10
2.314±0.526
CY
10
20.0×10
0.581±0.234***
74.9
RAPC
10
6.7×10
0.826±0.421***
, 百拇医药
64.3
RAPC
10
3.4×10
1.182±0.483***
48.9
Compared with control ***P<0.01
由表1～3可见，RAPC对小鼠S180肉瘤有显著抑制作用，剂量13.4mg/kg，6.7mg/kg和3.4mg/kg的瘤重抑制率分别在45%至64%之间，灌胃及腹腔给药均有效，对荷瘤小鼠的白细胞数量和胸腺指数均无明显影响。
4 结 语
, 百拇医药
试验结果表明，RAPC对小鼠S180肉瘤具有显著抑制作用，并且不具有化疗药(CY)对白细胞和胸腺的毒副反应，因而对实体瘤的治疗应用具有良好的前景，值得深入研究。
中国生物工程中心“九五”攻关项目编号96-C02-04-03
参考文献
1 张成武，殷志敏，欧阳平凯.藻胆蛋白的开发与利用.中国海洋药物杂志，1995，14(3)：52
2 蔡心涵，何立明，蒋家伦，等.螺旋藻藻蓝蛋白对癌激光疗法增敏作用的实验研究.中国海洋药物杂志，1995，14(1)：15
3 张成武，曾昭琪，张媛贞，等.钝顶螺旋藻多糖和藻蓝蛋白对小鼠急性放射病的防护作用.营养学报，1996，18(3)：327
4 Shinohara K,Okura Y,Koyano T,et al.Algal phycocyanins promote growth of human cells in culture. (Food Prot Preserv Div, Na tl Food Res Inst,Tsukuba Japan 305) In vitro cell DevBiol，1988, 24 (10)：1057
5 徐叔云，卞如濂，陈修，等.药理实验方法学.第2版.北京：人民卫 生出版社，1994.1432
收稿日期：1999-03-02, 百拇医药