活血素(Vasobral)对家蚕生命力的影响及其作用机制探讨
作者：郑志学 王赞舜 朱汉民 Francois Bock1 马积庆2 王维中3 马国云4 范 欣5 王胜奎5 洪水泉5
单位：华东医院 上海市老年医学研究所，上海 200040
关键词：活血素；家蚕；线粒体；ATP酶
中国老年学杂志/990323 摘 要 目的 探索活血素对家蚕生命力及产卵的影响及其作用机制。方法 以家蚕为抗衰老模型，观察活血素对蚕体重、蚕质、雌蛾生命、蛾产卵数，又检查大鼠口服活血素后的病理及超微结构变化。结果 活血素能促进家蚕幼虫期生长发育，提高蛹期茧质量，延长雌蛾生命，并能产生更多卵子。通过大鼠实验其机理可能是活血素保持了完整线粒体功能，提高ATP酶活性，扩张脏器组织微血管，使红细胞充盈，改善供血和供氧。结论 应用活血素后大鼠超微结构变化可能是有助于家蚕生长发育原因之一，这亦可能是人类延缓衰老机制之一。
, 百拇医药
Effect of Vasobral on the vitality of
silkworm bombyxmori and its mechanism
Zheng Zhixue Wang Zanshun Zhu Hanmin et al
Huadong Hospital,Shanghai Institute of Geriatrics,Shanghai 200040
Objective Vasobral has been widely used in treating cereb rova scular insufficiency,the silkworm were used to study the effect of Vasobral on vitality.Methods Silkworm Bombyxmori were used as an anti -a geing model for observing the effect of Vasobral.The influences of Vasobral on p athological and ultra-structural changes of rat hepatocytes were also studied. Results Vasobral improved the development of larval and a dult stages,enhanced the vitality and increased the quantity and quality of ovum.The pathological examination revealed than mitodrondria of brain hippocampus were k ept in good state,and hyperemia and dilation of vas capillare occurred in organs .Positive staining of ATP in hippocampus of Vasobral group was more prominent th at in control group.Conclusions These changes may explain that Vasobral promo te s a good development for all stages of Bombyxmori and may have anti-ageing effe ct.
, 百拇医药
Key words Vasobral Bombyx mori Mitodrondria ATPase
活血素(二氢麦角隐亭DHEC和咖啡因制剂)世界上现有60多国家应用此药治疗缺血性脑血管疾患达16年之久。作者研究了活血素对家蚕作用和大鼠超微结构线粒体研究，现报道如下。
1 材料与方法
1.1 供试家蚕品种 江苏蚕6号，家蚕按常规饲养，3～5龄期家蚕，饲育温度26 ℃。
1.2 活血素配比浓度 应用活血素口服液，每瓶50 ml，由法国Laboratiories Jacques Loageais提供，实验浓度分三种：1∶500，1∶100，1∶25。
1.3 组别设定
1.3.1 对照组家蚕按正常情况饲育，另用清水喷涂桑叶面上，待干后给家蚕添食。
, http://www.100md.com
1.3.2 活血素用上述三种不同浓度喷涂于桑叶面上，干后给家蚕添食，其它条件同对照组，3龄期家蚕添食1次，4龄和5龄期家蚕各添食2次，共5次，我们观察家蚕生命力是从3龄家蚕到蛾产卵死亡。
1.4 统计方法 成组t检验及方差分析、卡方检验。
2 结 果
2.1 活血素对雌雄家蚕体重作用观察 取4龄家蚕添食活血素3次后，取25条家蚕进行称重，雌雄分别计算，结果见表1。
表1 活血素对雌、雄蚕体重作用观察(25条) 组别
性别
重量(g)
对照组
, http://www.100md.com ♀
0.964 0±0.000 2
0.730 0±0.000 2
活血素组
1∶500
♀
1.030 0±0.002 0
0.772 0±0.060 0
1∶100
♀
, http://www.100md.com
1.060 0±0.002 0
0.790 0±0.000 2
1∶25
♀
1.070 0±0.000 2
0.790 0±0.000 2
活血素各浓度之间比♀F=2 690.5，P<0.001；F=2.24，P>0.05；各组两两比较均P<0.01。
2.2 活血素对茧质的影响 茧质的质量以全茧量(一颗茧重量)、茧层量(一颗茧壳质量)、茧层率(一颗茧壳占全茧重量百分比)来观察，见表2。
, 百拇医药
2.2.1 活血素对雌蛾生命率影响 雌蛾保护在24 ℃常温区，以产卵第6天存活蛾为标准，结果见表3。
雌蛾生命率(%)=存活蛾数/总蛾数×100
2.2.2 活血素对单蛾产卵数影响 单蛾产卵粒数=〔(100只蛾产卵重量×卵粒数)/1克卵粒数〕÷100，见表4。
表2 活血素对茧质的影响1)
全茧量
茧层量
茧层率
茧量
指数
茧层量
, 百拇医药
指数
%
指数
对照组
1.14
100.0
0.300
100.0
26.3
100.0
活
1∶500
1.25
, http://www.100md.com
109.6
0.355
118.3
28.4
108.0
血
1∶100
1.27
111.4
0.345
115.0
27.2
103.4
, 百拇医药
素
1∶ 25
1.30
114.0
0.370
123.3
28.5
108.0
1)观察指标用指数，故未统计，表4同。表3 活血素对雌蛾生命的影响(只)
对照组
活血素组
1∶500
, 百拇医药
1∶50
1∶25
雌蛾生命率
存活
179
265
275
300
(n=500)
%
35.8
53.01)
55.01)
, 百拇医药
60.01)
与对照组比较1)P<0.01，活血素组三组间比较P>0.05表4 活血素对单蛾产卵数影响
对照组
活血素组
1∶500
1∶50
1∶25
单蛾产卵数
361
429
446
446
, http://www.100md.com
指数%
100
118.8
123.5
123.5
2.3 大鼠实验 实验方法见文献〔7〕。ATP酶测定法：随意取二组大鼠各2只，解剖时取脑组织中海马部位，心肌、眼球、视网膜，用HE染色、并用ATP酶组化显色反应(Niles检查改良法)测定ATP活性。对照组和治疗组各取脑组织海马、心肌、眼球三个组织作常规病理检查，结果见表5、表6。表5 大鼠口服活血素后病理改变 病变
对照组
治疗组
心肌
, 百拇医药
变性
充血
-
±
-
+～++
眼球
(视网膜)
视神经
充血
-
-
-
±～+
, http://www.100md.com
脑组织
(海马)
充血
变性
水肿
-
-
-
+
-
-
HE常规染色阴性(正常)，“±”微血管腔内偶见红细胞充盈，“+”微血管红细胞充盈约占管腔1/3，“++”微血管内红细胞充盈约占管腔2/3。表6 大鼠口服活血素后海马中ATP酶组化显色反应
, 百拇医药
对照组
低剂量组
高剂量组
脑组织(海马)
+
+
+～++
ATP酶组化显色反应，Niles改良法“+”浅黑色ATP含量一般，而“++”棕黑色ATP含量极多。
2.4 电镜标本制备 方法见文献〔7〕。结果显示实验组大鼠肝细胞，胞浆内大量圆形线粒体，丰富的粗面内质网，及可见少量脂褐素、溶酶体，略有扩张的毛细胆管。对照组线粒体大小不等，脂褐素多见。
3 讨 论
, http://www.100md.com
国际上早已应用蚕蛾科家蚕(Bombyx mori)作实验遗传学观察。Hamana(1984)等用聚胺(Polyamine)含量变化观察Bombyx mori各蚕体器官和腺体变化〔1〕。Reddy(1995)用哺乳动物甲状腺素注射于蚕体，观察蚕体脂肪结构中ATPase活性对幼虫期，蛹、成虫期作用〔2〕。李献平等(1990)用牛膝、地黄、山药、菊花及合剂组观察对家蚕寿命及生长发育影响，认为牛膝和合剂组能使家蚕幼虫期延长，但却引起体重减轻，家蚕长度缩短。而且牛膝和合剂组能减少家蚕食桑量〔3〕。陈传盈等(1994)用茯苓、生地黄、何首乌、女贞子、黄芪、枸杞子、菟丝子、蛇床子、香附子、党参、淫羊藿、棉籽仁、龟龄集做家蚕抗衰老实验，香附子有延长家蚕雌雄蛹期〔4〕。
几世纪来，麦角浸出物因具有强大子宫收缩功能而应用于妇产科出血的治疗。1935年Dudly等发现了麦角新碱，其衍生二氢麦角考宁(Dihydroergocornine)、二氢麦角嵴亭(Dihydroergocristine)、二氢麦角隐亭(活血素)(Dihydroergocrytine)及海德琴(Hydergine、Dihydroergotoxine mesylate)等。上述药物均应用缓解血管痉挛，增加脑血流量，保护脑细胞，改善脑血循环，增进脑代谢〔5，6〕。
, http://www.100md.com
作者等首先用活血素进行大鼠实验时发现它能增加脑海马组织ATPase活性，故选用活血素作家蚕实验观察有无抗老作用。
我们选用苏蚕6号进行实验，实验发现应用三种不同浓度活血素对家蚕幼虫期3龄到5龄家蚕有促进生长作用。对蛹期有提高全茧量、茧层量和茧层率作用。对雌蛾有提高存活率，并能增强生殖能力产生更多卵子，实验中选用三种不同浓度活血素，以1∶25浓度作用较明显一些，但尚缺乏统计显著性，故如何选择浓度尚需要研究，但上述各种浓度尚未发现毒副作用，而且家蚕从生长发育至死亡过程亦无异常状况发生。
线粒体DNA是细胞的能量转换系统，在细胞合成物质，物质转运及信息传递中起重要作用。随着增龄等因素又使DNA突变累积，使线粒体氧化磷酸化能力降低，细胞产生ATP的量减少，这是发生衰老和疾病的基础〔6〕。活血素对家蚕生命力有良好影响，其作用机理如何，我们应用大鼠口服活血素病理检查结果和脑海马ATPase组化显色反应，认为大鼠使用活血素后脑海马ATPase活性增加。实验组老年鼠应用活血素后，电镜发现线粒体结构完整，内质网丰富，仅少量脂褐素可见，说明线粒体保持良好状态，脑组织海马、心肌、眼球等脏器组织微血管扩张，红细胞充盈，改善供血和供氧〔7，8〕，这些均是有利于生长，延缓衰老的可能作用，特别对较长期使用活血素病员有否延缓衰老作用值得进一步研究。
, 百拇医药
1 Clinical Research Dept.Lab Jacques Logeais,France(Francois Bock)
2 上海市肿瘤研究所
3 江苏省吴江市人民医院
4 上海市职业病防治研究所
5 江苏省吴江市蚕种场
作者简介：郑志学，男，65岁，主任医师，教授，研究方向：百岁老人长寿机制
4 参考文献
1 Hamana K，Matsuzakis Inoue K,Matsuzaki S et al.Changes in polyamine levels in various Bombyx mori during its life cycle.J Biochem Tokyo，1984；95(6)：1 803
, 百拇医药
2 Reddy KD，Chaudhuri A,Thangavelu K.Influence of thyroxine on differention-dependent ATPase activities in fat body of tasar silkworm,Antheraea mylitta D.Gen Comp Endocrinol，1996；104(1)：20
3 李献平，刘世昌.四大怀药对家蚕寿命及生长发育的影响.中国中药杂志，1990；15(9)：51
4 陈传盈，胡 斌，范世晶.抗衰老药物家蚕寿命测定法研究.中成药，1994；16(2)：32
5 何惠霞.麦角碱的类型，药理活性及临床应用.中国药学杂志，1992；27(4)：198
6 童坦君，张宗玉.医学老年学.第1版，北京：人民卫生出版社，1995：142-149
7 郑志学，王赞舜，朱汉民.活血素治疗脑血管疾病的实验参考变化.中国老年学杂志，1995；15(2)：74
8 Lee CM，Lopez ME，Weindurch R et al.Association of Age-relation mitochondrial abnormalities with skeletal muscle fiber atrophy.Free Radical Bio Med，1998；25(8)：964
〔1998-11-15收稿 1999-01-25修回〕, 百拇医药(郑志学 王赞舜 朱汉民 Francois Bock1 马积庆2 王维中3 马国云4 范 欣5 王胜奎5 洪水泉5)
单位：华东医院 上海市老年医学研究所，上海 200040
关键词：活血素；家蚕；线粒体；ATP酶
中国老年学杂志/990323 摘 要 目的 探索活血素对家蚕生命力及产卵的影响及其作用机制。方法 以家蚕为抗衰老模型，观察活血素对蚕体重、蚕质、雌蛾生命、蛾产卵数，又检查大鼠口服活血素后的病理及超微结构变化。结果 活血素能促进家蚕幼虫期生长发育，提高蛹期茧质量，延长雌蛾生命，并能产生更多卵子。通过大鼠实验其机理可能是活血素保持了完整线粒体功能，提高ATP酶活性，扩张脏器组织微血管，使红细胞充盈，改善供血和供氧。结论 应用活血素后大鼠超微结构变化可能是有助于家蚕生长发育原因之一，这亦可能是人类延缓衰老机制之一。
, 百拇医药
Effect of Vasobral on the vitality of
silkworm bombyxmori and its mechanism
Zheng Zhixue Wang Zanshun Zhu Hanmin et al
Huadong Hospital,Shanghai Institute of Geriatrics,Shanghai 200040
Objective Vasobral has been widely used in treating cereb rova scular insufficiency,the silkworm were used to study the effect of Vasobral on vitality.Methods Silkworm Bombyxmori were used as an anti -a geing model for observing the effect of Vasobral.The influences of Vasobral on p athological and ultra-structural changes of rat hepatocytes were also studied. Results Vasobral improved the development of larval and a dult stages,enhanced the vitality and increased the quantity and quality of ovum.The pathological examination revealed than mitodrondria of brain hippocampus were k ept in good state,and hyperemia and dilation of vas capillare occurred in organs .Positive staining of ATP in hippocampus of Vasobral group was more prominent th at in control group.Conclusions These changes may explain that Vasobral promo te s a good development for all stages of Bombyxmori and may have anti-ageing effe ct.
, 百拇医药
Key words Vasobral Bombyx mori Mitodrondria ATPase
活血素(二氢麦角隐亭DHEC和咖啡因制剂)世界上现有60多国家应用此药治疗缺血性脑血管疾患达16年之久。作者研究了活血素对家蚕作用和大鼠超微结构线粒体研究，现报道如下。
1 材料与方法
1.1 供试家蚕品种 江苏蚕6号，家蚕按常规饲养，3～5龄期家蚕，饲育温度26 ℃。
1.2 活血素配比浓度 应用活血素口服液，每瓶50 ml，由法国Laboratiories Jacques Loageais提供，实验浓度分三种：1∶500，1∶100，1∶25。
1.3 组别设定
1.3.1 对照组家蚕按正常情况饲育，另用清水喷涂桑叶面上，待干后给家蚕添食。
, http://www.100md.com
1.3.2 活血素用上述三种不同浓度喷涂于桑叶面上，干后给家蚕添食，其它条件同对照组，3龄期家蚕添食1次，4龄和5龄期家蚕各添食2次，共5次，我们观察家蚕生命力是从3龄家蚕到蛾产卵死亡。
1.4 统计方法 成组t检验及方差分析、卡方检验。
2 结 果
2.1 活血素对雌雄家蚕体重作用观察 取4龄家蚕添食活血素3次后，取25条家蚕进行称重，雌雄分别计算，结果见表1。
表1 活血素对雌、雄蚕体重作用观察(25条) 组别
性别
重量(g)
对照组
, http://www.100md.com ♀
0.964 0±0.000 2
0.730 0±0.000 2
活血素组
1∶500
♀
1.030 0±0.002 0
0.772 0±0.060 0
1∶100
♀
, http://www.100md.com
1.060 0±0.002 0
0.790 0±0.000 2
1∶25
♀
1.070 0±0.000 2
0.790 0±0.000 2
活血素各浓度之间比♀F=2 690.5，P<0.001；F=2.24，P>0.05；各组两两比较均P<0.01。
2.2 活血素对茧质的影响 茧质的质量以全茧量(一颗茧重量)、茧层量(一颗茧壳质量)、茧层率(一颗茧壳占全茧重量百分比)来观察，见表2。
, 百拇医药
2.2.1 活血素对雌蛾生命率影响 雌蛾保护在24 ℃常温区，以产卵第6天存活蛾为标准，结果见表3。
雌蛾生命率(%)=存活蛾数/总蛾数×100
2.2.2 活血素对单蛾产卵数影响 单蛾产卵粒数=〔(100只蛾产卵重量×卵粒数)/1克卵粒数〕÷100，见表4。
表2 活血素对茧质的影响1)
全茧量
茧层量
茧层率
茧量
指数
茧层量
, 百拇医药
指数
%
指数
对照组
1.14
100.0
0.300
100.0
26.3
100.0
活
1∶500
1.25
, http://www.100md.com
109.6
0.355
118.3
28.4
108.0
血
1∶100
1.27
111.4
0.345
115.0
27.2
103.4
, 百拇医药
素
1∶ 25
1.30
114.0
0.370
123.3
28.5
108.0
1)观察指标用指数，故未统计，表4同。表3 活血素对雌蛾生命的影响(只)
对照组
活血素组
1∶500
, 百拇医药
1∶50
1∶25
雌蛾生命率
存活
179
265
275
300
(n=500)
%
35.8
53.01)
55.01)
, 百拇医药
60.01)
与对照组比较1)P<0.01，活血素组三组间比较P>0.05表4 活血素对单蛾产卵数影响
对照组
活血素组
1∶500
1∶50
1∶25
单蛾产卵数
361
429
446
446
, http://www.100md.com
指数%
100
118.8
123.5
123.5
2.3 大鼠实验 实验方法见文献〔7〕。ATP酶测定法：随意取二组大鼠各2只，解剖时取脑组织中海马部位，心肌、眼球、视网膜，用HE染色、并用ATP酶组化显色反应(Niles检查改良法)测定ATP活性。对照组和治疗组各取脑组织海马、心肌、眼球三个组织作常规病理检查，结果见表5、表6。表5 大鼠口服活血素后病理改变 病变
对照组
治疗组
心肌
, 百拇医药
变性
充血
-
±
-
+～++
眼球
(视网膜)
视神经
充血
-
-
-
±～+
, http://www.100md.com
脑组织
(海马)
充血
变性
水肿
-
-
-
+
-
-
HE常规染色阴性(正常)，“±”微血管腔内偶见红细胞充盈，“+”微血管红细胞充盈约占管腔1/3，“++”微血管内红细胞充盈约占管腔2/3。表6 大鼠口服活血素后海马中ATP酶组化显色反应
, 百拇医药
对照组
低剂量组
高剂量组
脑组织(海马)
+
+
+～++
ATP酶组化显色反应，Niles改良法“+”浅黑色ATP含量一般，而“++”棕黑色ATP含量极多。
2.4 电镜标本制备 方法见文献〔7〕。结果显示实验组大鼠肝细胞，胞浆内大量圆形线粒体，丰富的粗面内质网，及可见少量脂褐素、溶酶体，略有扩张的毛细胆管。对照组线粒体大小不等，脂褐素多见。
3 讨 论
, http://www.100md.com
国际上早已应用蚕蛾科家蚕(Bombyx mori)作实验遗传学观察。Hamana(1984)等用聚胺(Polyamine)含量变化观察Bombyx mori各蚕体器官和腺体变化〔1〕。Reddy(1995)用哺乳动物甲状腺素注射于蚕体，观察蚕体脂肪结构中ATPase活性对幼虫期，蛹、成虫期作用〔2〕。李献平等(1990)用牛膝、地黄、山药、菊花及合剂组观察对家蚕寿命及生长发育影响，认为牛膝和合剂组能使家蚕幼虫期延长，但却引起体重减轻，家蚕长度缩短。而且牛膝和合剂组能减少家蚕食桑量〔3〕。陈传盈等(1994)用茯苓、生地黄、何首乌、女贞子、黄芪、枸杞子、菟丝子、蛇床子、香附子、党参、淫羊藿、棉籽仁、龟龄集做家蚕抗衰老实验，香附子有延长家蚕雌雄蛹期〔4〕。
几世纪来，麦角浸出物因具有强大子宫收缩功能而应用于妇产科出血的治疗。1935年Dudly等发现了麦角新碱，其衍生二氢麦角考宁(Dihydroergocornine)、二氢麦角嵴亭(Dihydroergocristine)、二氢麦角隐亭(活血素)(Dihydroergocrytine)及海德琴(Hydergine、Dihydroergotoxine mesylate)等。上述药物均应用缓解血管痉挛，增加脑血流量，保护脑细胞，改善脑血循环，增进脑代谢〔5，6〕。
, http://www.100md.com
作者等首先用活血素进行大鼠实验时发现它能增加脑海马组织ATPase活性，故选用活血素作家蚕实验观察有无抗老作用。
我们选用苏蚕6号进行实验，实验发现应用三种不同浓度活血素对家蚕幼虫期3龄到5龄家蚕有促进生长作用。对蛹期有提高全茧量、茧层量和茧层率作用。对雌蛾有提高存活率，并能增强生殖能力产生更多卵子，实验中选用三种不同浓度活血素，以1∶25浓度作用较明显一些，但尚缺乏统计显著性，故如何选择浓度尚需要研究，但上述各种浓度尚未发现毒副作用，而且家蚕从生长发育至死亡过程亦无异常状况发生。
线粒体DNA是细胞的能量转换系统，在细胞合成物质，物质转运及信息传递中起重要作用。随着增龄等因素又使DNA突变累积，使线粒体氧化磷酸化能力降低，细胞产生ATP的量减少，这是发生衰老和疾病的基础〔6〕。活血素对家蚕生命力有良好影响，其作用机理如何，我们应用大鼠口服活血素病理检查结果和脑海马ATPase组化显色反应，认为大鼠使用活血素后脑海马ATPase活性增加。实验组老年鼠应用活血素后，电镜发现线粒体结构完整，内质网丰富，仅少量脂褐素可见，说明线粒体保持良好状态，脑组织海马、心肌、眼球等脏器组织微血管扩张，红细胞充盈，改善供血和供氧〔7，8〕，这些均是有利于生长，延缓衰老的可能作用，特别对较长期使用活血素病员有否延缓衰老作用值得进一步研究。
, 百拇医药
1 Clinical Research Dept.Lab Jacques Logeais,France(Francois Bock)
2 上海市肿瘤研究所
3 江苏省吴江市人民医院
4 上海市职业病防治研究所
5 江苏省吴江市蚕种场
作者简介：郑志学，男，65岁，主任医师，教授，研究方向：百岁老人长寿机制
4 参考文献
1 Hamana K，Matsuzakis Inoue K,Matsuzaki S et al.Changes in polyamine levels in various Bombyx mori during its life cycle.J Biochem Tokyo，1984；95(6)：1 803
, 百拇医药
2 Reddy KD，Chaudhuri A,Thangavelu K.Influence of thyroxine on differention-dependent ATPase activities in fat body of tasar silkworm,Antheraea mylitta D.Gen Comp Endocrinol，1996；104(1)：20
3 李献平，刘世昌.四大怀药对家蚕寿命及生长发育的影响.中国中药杂志，1990；15(9)：51
4 陈传盈，胡 斌，范世晶.抗衰老药物家蚕寿命测定法研究.中成药，1994；16(2)：32
5 何惠霞.麦角碱的类型，药理活性及临床应用.中国药学杂志，1992；27(4)：198
6 童坦君，张宗玉.医学老年学.第1版，北京：人民卫生出版社，1995：142-149
7 郑志学，王赞舜，朱汉民.活血素治疗脑血管疾病的实验参考变化.中国老年学杂志，1995；15(2)：74
8 Lee CM，Lopez ME，Weindurch R et al.Association of Age-relation mitochondrial abnormalities with skeletal muscle fiber atrophy.Free Radical Bio Med，1998；25(8)：964
〔1998-11-15收稿 1999-01-25修回〕, 百拇医药(郑志学 王赞舜 朱汉民 Francois Bock1 马积庆2 王维中3 马国云4 范 欣5 王胜奎5 洪水泉5)