两种剂型脊髓灰质炎疫苗的热稳定性观察
作者：姜晓路 卢亦愚 严菊英
单位：浙江省卫生防疫站， 杭州 310009
关键词：脊髓灰质炎糖丸疫苗；脊髓灰质炎液体疫苗；热稳定性
中国计划免疫000206 摘要：为了研究脊髓灰质炎液体疫苗和糖丸疫苗对热冲击后的稳定性差异，对37℃孵箱放置不同天数后的两种疫苗分别测定了效价，在-20℃保存下效价为5.9logTCID50/粒的糖丸疫苗，37℃放置1天后其效价明显下降，到5天后降为0；而在-20℃保存下效价为5.7logTCID50/0.1ml的液体疫苗，37℃放置3天后仍能维持在5.5logTCID50/0.1ml左右。实验证明：脊髓灰质炎液体疫苗不仅具有与糖丸疫苗同样良好的免疫效果，且具有质量可靠、热稳定性好等的综合优势，更适合我国使用。
中图分类号：R512.4 文献标识码：A
, 百拇医药
文章编号：1006-916X(2000)02-0080-02
Observation on the Thermostability of the Two Forms of Polio Vaccine
JIANG Xiao-lu, LU Yi-yu, YAN Ju-ying Zhejiang
Provincial Epidemic Prevention Station, Zhejiang Province, Hangzhou 310009, China
Abstract: In order to study the thermostability between liquid form polio vaccine and polio vaccine dragee-candy, the titers of the vaccines placed at 37℃ for different times were tested. The titer of polio vaccine dragee-candy which was 5.9log TCID50 per pill at -20℃ decreased obviously after placed at 37℃ for one day, and decreased to 0 after 5 days in 37℃. The titer of liquid form polio vaccine,its titer was 5.7log TCID50/0.1ml at -20℃, decreased to 5.5log TCID50/0.1ml after placed at 37℃ for 3 days. The tests showed that liquid form polio vaccine had not only the same immune effect as that of polio vaccine dragee-candy, but had superiority in good quality and thermostability. The liquid form polio vaccine is more suitable in China. In order to study the thermostability between liquid form polio vaccine and polio vaccine dragee-candy, the titers of the vaccines placed at 37℃ for different times were tested. The titer of polio vaccine dragee-candy which was 5.9log TCID50 per pill at -20℃ decreased obviously after placed at 37℃ for one day, and decreased to 0 after 5 days in 37℃. The titer of liquid form polio vaccine,its titer was 5.7log TCID50/0.1ml at -20℃, decreased to 5.5log TCID50/0.1ml after placed at 37℃ for 3 days. The tests showed that liquid form polio vaccine had not only the same immune effect as that of polio vaccine dragee-candy, but had superiority in good quality and thermostability. The liquid form polio vaccine is more suitable in China.
, 百拇医药
Key words: Polio vaccine dragee-candy; Liquid form polio vaccine; Thermostability Polio vaccine dragee-candy; Liquid form polio vaccine; Thermostability
口服脊髓灰质炎(脊灰)减毒活疫苗(OPV)是世界卫生组织(WHO)在全球扩大免疫规划(EPI)使用的主要疫苗之一，在我国消灭脊灰工作中起到了关键的作用。我国除了以往常用的糖丸剂型外，目前也正在开发液体剂型的疫苗。为了探讨两种疫苗的热稳定性，将本实验室-20℃保存的效期至1995年的液体疫苗与1997年的糖丸疫苗进行比较，现将结果报道如下。
材料与方法
1 疫苗 糖丸疫苗由中国医学科学院医学生物学研究所提供，批号为97-1-10，效期至1999年1月；液体疫苗由Lyon-France生产，批号为J5936，有效期至1995年12月，我们分别在1995年、1996年和1997年3次对该批号液体疫苗进行的追踪观察滴定，其效价均在5.5logTCID50/0.1ml左右，稳定性很好。由此出发，我们将其与当年的糖丸疫苗进行了热稳定性冲击试验。
, 百拇医药
2 疫苗的热稳定性试验 两种剂型的OPV在到达省卫生防疫站后均置-20℃保存，然后将糖丸疫苗和液体疫苗各分为7组，每组3个重复(即糖丸疫苗每组3袋，每袋10粒；液体疫苗每组3瓶)，将其中6组疫苗均放置于37℃孵箱，分别放置1天、3天、5天、7天、10天和15天，并将置-20℃冰箱保存的两种疫苗作为0天计算。上述6组疫苗处理完毕后均放回-20℃保存，待测定。
3 疫苗效价测定 参照卫生部《计划免疫技术管理规程》(1987年4月)，用微量细胞病变法测定疫苗的总滴度，并采用Karbar法计算疫苗的效价TCID50。
Xm： 所用病毒最高浓度稀释度的对数
d： 稀释度系数(倍数)的对数
, 百拇医药 ΣPi： 每个稀释度出现细胞病变的百分数总和
结 果
1 两种剂型OPV在37℃放置不同时间后的平均效价
从表1可见，液体疫苗与糖丸疫苗在-20℃保存0天时两者的平均效价基本相同，无显著性差异(P>0.05)；而当两种疫苗在37℃放置1天后，糖丸疫苗的效价急剧下降，而液体疫苗未有大的变化，两者有极显著性差异(P<0.01)。
表1 两种疫苗37℃持续不同时间后的平均效价
天数
0
1
3
, 百拇医药
5
7
10
15
糖丸疫苗(logTCID50/粒)
5.9
2.9
0.7
0
0
0
0
液体疫苗(logTCID50/0.1ml)
, 百拇医药
5.7
5.6
5.5
3.1
2.9
0.8
0.8
2 两种剂型OPV在37℃放置不同时间后的效价差异
糖丸疫苗在37℃环境下其效价随保存时间的延长而直线下降，保存1天后就下降达一半之多，与37℃保存前存在极显著差异(P<0.01)，3天降到0.7logTCID50/粒，5天下降到0。而液体疫苗在37℃保存0～3天其效价无显著变化，仍能维持在5.6logTCID50/0.1ml左右，在5天后才产生极显著差异，15天后还能测到0.8logTCID50/0.1ml左右的效价(附图)。液体疫苗放置不同时间后的效价变化情况，经统计学处理后如表2〔1〕。
, 百拇医药
附图 两种疫苗效价在37℃的热稳定性比较
表2 37℃放置不同时间后液体疫苗效价
均数间的两两比较 时间
(天)
效价
logTCID50/0.1ml-0.9-0.8-2.9-3.1-5.5-5.6
, 百拇医药
0
5.7
4.8*
4.9*
2.8*
2.6*
0.2
0.1
1
5.6
4.7*
4.8*
, http://www.100md.com
2.7*
2.5*
0.1
3
5.5
4.6*
4.7*
2.6*
2.4*
5
3.1
2.2*
, 百拇医药
2.3*
0.2
7
2.9
2.0*
2.1*
10
0.8
0
15
0.8
注：*表示两者有极显著性差异。讨 论
, 百拇医药
OPV目前有糖丸与液体两种剂型，世界各地在早期大多使用减毒的糖丸疫苗，我国从1963年就开始使用糖丸疫苗，在长期的使用过程中，其预防接种效果良好，服用方便，被接种儿童的抗体阳转率较高，在我国消灭脊灰工作中起到了关键作用。另一种是不久前开发的液体疫苗，近年来我国从国外引进了液体疫苗，据国内有关专家论证，不仅其免疫效果很好，且具有热稳定性好、质量可靠的特点，与糖丸疫苗相比较更适合于0～8月龄的婴儿服用〔2，3〕。
从本次实验结果看，放置37℃的液体疫苗热稳定性明显好于糖丸疫苗，因此我们认为液体疫苗在长时间的冷链保存与运输过程中，或在冷链短时间遭到破坏时，对其效价影响不会很大。据有关文献报道，糖丸疫苗的工艺与质量尚不能完全达到WHO的要求标准，尤其在热稳定性上尚有不足之处。我国幅员辽阔，南方又属亚热带气候，山地、草原等在国土中所占比例较大，而计划免疫的接种方式又多种多样，因此保证接种疫苗的质量是一个很关键的因素，对于糖丸疫苗来讲，由于对保存和运输的冷藏条件要求较高，给基层尤其是边远地区的预防接种带来一定困难，而液体疫苗根据我们的实验结果及文献报道均已证实，其热稳定性远远高于糖丸疫苗，且两者的免疫效果也无差异〔3、4〕。因此液体疫苗更适用于我国儿童计划免疫工作，今后有必要在我国进一步得到开发、推广与应用，为我国的最后消灭脊灰病毒工作做出贡献。
, 百拇医药
作者简介：姜晓路(1974-)，男，浙江省富阳市人，浙江省卫生防疫站病毒学研究所技师，从事病毒学检验工作。
参考文献
〔1〕 上海第一医学院卫生统计教研组.医学统计方法[M].上海：上海科学技术出版社，1987，42～48.
〔2〕 徐曼如，赵文彬，郭仁友，等.两种剂型的脊髓灰质炎疫苗基础免疫的血清学效果观察[J].中国计划免疫，1996，2(3)：111～114.
〔3〕 陈英耀，陈洁，金永春，等.特尔斐法对口服脊髓灰质炎疫苗的综合效果评价[J].中国计划免疫，1998，4(5)：263～267.
〔4〕 孔健，丁一新，张连芝，等.不同国家液体型脊髓灰质炎疫苗热稳定性及免疫原性[J].中华流行病学杂志，1993，14(3)：151.
收稿日期：1999-06-10
修回日期：1999-08-09, 百拇医药
单位：浙江省卫生防疫站， 杭州 310009
关键词：脊髓灰质炎糖丸疫苗；脊髓灰质炎液体疫苗；热稳定性
中国计划免疫000206 摘要：为了研究脊髓灰质炎液体疫苗和糖丸疫苗对热冲击后的稳定性差异，对37℃孵箱放置不同天数后的两种疫苗分别测定了效价，在-20℃保存下效价为5.9logTCID50/粒的糖丸疫苗，37℃放置1天后其效价明显下降，到5天后降为0；而在-20℃保存下效价为5.7logTCID50/0.1ml的液体疫苗，37℃放置3天后仍能维持在5.5logTCID50/0.1ml左右。实验证明：脊髓灰质炎液体疫苗不仅具有与糖丸疫苗同样良好的免疫效果，且具有质量可靠、热稳定性好等的综合优势，更适合我国使用。
中图分类号：R512.4 文献标识码：A
, 百拇医药
文章编号：1006-916X(2000)02-0080-02
Observation on the Thermostability of the Two Forms of Polio Vaccine
JIANG Xiao-lu, LU Yi-yu, YAN Ju-ying Zhejiang
Provincial Epidemic Prevention Station, Zhejiang Province, Hangzhou 310009, China
Abstract: In order to study the thermostability between liquid form polio vaccine and polio vaccine dragee-candy, the titers of the vaccines placed at 37℃ for different times were tested. The titer of polio vaccine dragee-candy which was 5.9log TCID50 per pill at -20℃ decreased obviously after placed at 37℃ for one day, and decreased to 0 after 5 days in 37℃. The titer of liquid form polio vaccine,its titer was 5.7log TCID50/0.1ml at -20℃, decreased to 5.5log TCID50/0.1ml after placed at 37℃ for 3 days. The tests showed that liquid form polio vaccine had not only the same immune effect as that of polio vaccine dragee-candy, but had superiority in good quality and thermostability. The liquid form polio vaccine is more suitable in China. In order to study the thermostability between liquid form polio vaccine and polio vaccine dragee-candy, the titers of the vaccines placed at 37℃ for different times were tested. The titer of polio vaccine dragee-candy which was 5.9log TCID50 per pill at -20℃ decreased obviously after placed at 37℃ for one day, and decreased to 0 after 5 days in 37℃. The titer of liquid form polio vaccine,its titer was 5.7log TCID50/0.1ml at -20℃, decreased to 5.5log TCID50/0.1ml after placed at 37℃ for 3 days. The tests showed that liquid form polio vaccine had not only the same immune effect as that of polio vaccine dragee-candy, but had superiority in good quality and thermostability. The liquid form polio vaccine is more suitable in China.
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Key words: Polio vaccine dragee-candy; Liquid form polio vaccine; Thermostability Polio vaccine dragee-candy; Liquid form polio vaccine; Thermostability
口服脊髓灰质炎(脊灰)减毒活疫苗(OPV)是世界卫生组织(WHO)在全球扩大免疫规划(EPI)使用的主要疫苗之一，在我国消灭脊灰工作中起到了关键的作用。我国除了以往常用的糖丸剂型外，目前也正在开发液体剂型的疫苗。为了探讨两种疫苗的热稳定性，将本实验室-20℃保存的效期至1995年的液体疫苗与1997年的糖丸疫苗进行比较，现将结果报道如下。
材料与方法
1 疫苗 糖丸疫苗由中国医学科学院医学生物学研究所提供，批号为97-1-10，效期至1999年1月；液体疫苗由Lyon-France生产，批号为J5936，有效期至1995年12月，我们分别在1995年、1996年和1997年3次对该批号液体疫苗进行的追踪观察滴定，其效价均在5.5logTCID50/0.1ml左右，稳定性很好。由此出发，我们将其与当年的糖丸疫苗进行了热稳定性冲击试验。
, 百拇医药
2 疫苗的热稳定性试验 两种剂型的OPV在到达省卫生防疫站后均置-20℃保存，然后将糖丸疫苗和液体疫苗各分为7组，每组3个重复(即糖丸疫苗每组3袋，每袋10粒；液体疫苗每组3瓶)，将其中6组疫苗均放置于37℃孵箱，分别放置1天、3天、5天、7天、10天和15天，并将置-20℃冰箱保存的两种疫苗作为0天计算。上述6组疫苗处理完毕后均放回-20℃保存，待测定。
3 疫苗效价测定 参照卫生部《计划免疫技术管理规程》(1987年4月)，用微量细胞病变法测定疫苗的总滴度，并采用Karbar法计算疫苗的效价TCID50。
Xm： 所用病毒最高浓度稀释度的对数
d： 稀释度系数(倍数)的对数
, 百拇医药 ΣPi： 每个稀释度出现细胞病变的百分数总和
结 果
1 两种剂型OPV在37℃放置不同时间后的平均效价
从表1可见，液体疫苗与糖丸疫苗在-20℃保存0天时两者的平均效价基本相同，无显著性差异(P>0.05)；而当两种疫苗在37℃放置1天后，糖丸疫苗的效价急剧下降，而液体疫苗未有大的变化，两者有极显著性差异(P<0.01)。
表1 两种疫苗37℃持续不同时间后的平均效价
天数
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糖丸疫苗(logTCID50/粒)
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液体疫苗(logTCID50/0.1ml)
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5.7
5.6
5.5
3.1
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2 两种剂型OPV在37℃放置不同时间后的效价差异
糖丸疫苗在37℃环境下其效价随保存时间的延长而直线下降，保存1天后就下降达一半之多，与37℃保存前存在极显著差异(P<0.01)，3天降到0.7logTCID50/粒，5天下降到0。而液体疫苗在37℃保存0～3天其效价无显著变化，仍能维持在5.6logTCID50/0.1ml左右，在5天后才产生极显著差异，15天后还能测到0.8logTCID50/0.1ml左右的效价(附图)。液体疫苗放置不同时间后的效价变化情况，经统计学处理后如表2〔1〕。
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附图 两种疫苗效价在37℃的热稳定性比较
表2 37℃放置不同时间后液体疫苗效价
均数间的两两比较 时间
(天)
效价
logTCID50/0.1ml
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注：*表示两者有极显著性差异。讨 论
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OPV目前有糖丸与液体两种剂型，世界各地在早期大多使用减毒的糖丸疫苗，我国从1963年就开始使用糖丸疫苗，在长期的使用过程中，其预防接种效果良好，服用方便，被接种儿童的抗体阳转率较高，在我国消灭脊灰工作中起到了关键作用。另一种是不久前开发的液体疫苗，近年来我国从国外引进了液体疫苗，据国内有关专家论证，不仅其免疫效果很好，且具有热稳定性好、质量可靠的特点，与糖丸疫苗相比较更适合于0～8月龄的婴儿服用〔2，3〕。
从本次实验结果看，放置37℃的液体疫苗热稳定性明显好于糖丸疫苗，因此我们认为液体疫苗在长时间的冷链保存与运输过程中，或在冷链短时间遭到破坏时，对其效价影响不会很大。据有关文献报道，糖丸疫苗的工艺与质量尚不能完全达到WHO的要求标准，尤其在热稳定性上尚有不足之处。我国幅员辽阔，南方又属亚热带气候，山地、草原等在国土中所占比例较大，而计划免疫的接种方式又多种多样，因此保证接种疫苗的质量是一个很关键的因素，对于糖丸疫苗来讲，由于对保存和运输的冷藏条件要求较高，给基层尤其是边远地区的预防接种带来一定困难，而液体疫苗根据我们的实验结果及文献报道均已证实，其热稳定性远远高于糖丸疫苗，且两者的免疫效果也无差异〔3、4〕。因此液体疫苗更适用于我国儿童计划免疫工作，今后有必要在我国进一步得到开发、推广与应用，为我国的最后消灭脊灰病毒工作做出贡献。
, 百拇医药
作者简介：姜晓路(1974-)，男，浙江省富阳市人，浙江省卫生防疫站病毒学研究所技师，从事病毒学检验工作。
参考文献
〔1〕 上海第一医学院卫生统计教研组.医学统计方法[M].上海：上海科学技术出版社，1987，42～48.
〔2〕 徐曼如，赵文彬，郭仁友，等.两种剂型的脊髓灰质炎疫苗基础免疫的血清学效果观察[J].中国计划免疫，1996，2(3)：111～114.
〔3〕 陈英耀，陈洁，金永春，等.特尔斐法对口服脊髓灰质炎疫苗的综合效果评价[J].中国计划免疫，1998，4(5)：263～267.
〔4〕 孔健，丁一新，张连芝，等.不同国家液体型脊髓灰质炎疫苗热稳定性及免疫原性[J].中华流行病学杂志，1993，14(3)：151.
收稿日期：1999-06-10
修回日期：1999-08-09, 百拇医药