Gwe治疗对慢性肝炎患者血清补体溶解免疫复合物能力的影响
作者：焦顺昌 李求是 钟大光 周严恒
单位：解放军总医院，北京100853
关键词：慢性迁延型肝炎；Gwe；血清溶解免疫复合物能力
中国免疫学杂志990310 中国图书分类号 R512.620.5 R392
摘 要 目的：探讨Gwe口服液对慢性迁延型肝炎患者血清补体溶解免疫复合物能力(CMSC)的影响。方法：以健康献血员为对照，采用改良的天野氏比色法，测定18例慢性迁延型肝炎患者服用Gwe前后1个月左右的CMSC。结果：患者的CMSC下降为84.3%(P=0.02)，经Gwe治疗后恢复正常。血清C3含量与其CMSC水平呈显著正相关(r=0.922,P<0.01)，血清CMSC与C4之间无显著相关性。结论：Gwe治疗后CMSC活性显著升高，有利于减少免疫复合物的沉积，阻断慢性肝炎的病理进程。
, http://www.100md.com
Effects of Gwe on the serum complement mediated immune complex solubilizing capacity in chronic persistent hepatitis patients
JIAO Shun-Chang,LI Qiu-Shi,ZHONG Da-Guang et al.
General Hospital of PLA,Beijing 100853
Abstract Objective：To discuss the effect of Gwe on the serum complement mediated immune complex solubilizing capacity in chronic persistent hepatitis patients.Methods:Serum complement mediated immune complex solubilizing (CMSC)was measured in 18 chronic persistent hepatitis (CPH) patients and in 10 normal individuals.Results:It was found that the level of serum CMSC in the CPH patients was significantly lower than that in normal individuals(P=0.02)，and was significantly increased after treating with Gwe for a month.There was a positive relationship between the CMSC and serum C3 level in 18 patients,while the relationship of the CMSC with serum C4 was not found.Conclusion:The increased activity of CMSC after Gwe treatment is helpful to clean the deposited immune complex,and to discontinue the progress of chronic hepatitis.
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Key words Chronic persistent hepatitis Gwe Serum complement mediated immune complex solubilizing
慢性乙型肝炎是一种免疫复合物性疾病，抗体以及少量自身抗体形成的免疫复合物在血清中存在，并沉积于肝、肾、关节、心脏等组织器官，导致肝组织损伤及一系列肝外表现[1]。血清补体可促进免疫复合物被单核细胞清除[2]，是抗御免疫复合物疾病的重要环节之一。Gwe口服液是一种中草药制剂，具有促进慢性乙型肝炎患者血清HBsAg阴转、肝功恢复等一系列良好的临床疗效,并可使慢性乙肝患者循环免疫复合物显著下降[3]。为了进一步探索其循环免疫复合物下降的机制，我们测定了18例服用Gwe口服液前后一个月左右的患者血清溶解免疫复合物的活性，为临床治疗提供理论依据。
1 材料与方法
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1.1 试剂
1.1.1 可溶性HRP-抗HRP 复合物及底物 购于军事医学科学院微生物及流行病学研究所，效价为1∶3 000。
1.1.2 聚乙二醇(PEG6000) 上海生化所产品。
1.1.3 血清补体C3、C4测定试剂盒 购于海军总医院。
1.2 研究对象
1.2.1 对照组 解放军总医院健康献血员10人。
1.2.2 病人组 慢性迁延型乙型肝炎患者18人。符合1990年上海全国病毒性肝炎会议制定的诊断标准。
1.3 Gwe治疗方案 Gwe口服液，100 ml，1次/d，3个月为1个疗程。
, 百拇医药
1.4 采血方法 分别于病人口服Gwe前及服药1个月后抽静脉血，分离血清，-20℃保存备用。
1.5 检测方法
1.5.1 血清补体溶解免疫复合物能力(CMSC)测定方法 参照天野氏比色法[4]，并加以改良，在96孔微量酶标板中进行。简述如下:可溶性HRP-抗HRP 复合物0.4 μl/孔加待测血清或对照血清15 μl/孔，37℃，温浴1 h，加入pH7.0 磷酸盐缓冲液及PEG6000，终体积为100 μl/孔,PEG终浓度为4%，37℃，温浴1 h，离心25 000 r/min，30 min，弃上清，沉淀中加入邻苯二胺(OPD,0.4 mg/ml)50 μl/孔，呈色后加入50 μl/孔 2 mol/L硫酸终止反应，在492 nm波长处比色，通过测定沉淀中的OD值间接测定血清CMSC活性。重复孔2个样本，全部沉淀时测出的OD值为2.0。
计算方法：设正常人CMSC值为100%，计算公式：
, 百拇医药
1.5.2 血清C3、C4测定方法 参照试剂盒说明书操作。
1.6 统计方法 采用两样本均数t检验。
2 结果
2.1 慢性迁延型肝炎(CPH)患者血清CMSC活性 若取正常人CMSC为100.0%，慢性迁延型肝炎患者的CMSC下降为84.3%(P=0.02),提示慢性迁延型肝炎患者血清溶解免疫复合物的能力下降。
2.2 Gwe口服液治疗对血清CMSC活性的影响 经Gwe口服液治疗后病人血清CMSC的能力显著提高，治疗前为84.3%，治疗后提高为99.1%(P<0.01)，恢复正常。
2.3 慢性迁延型肝炎(CPH)患者血清CMSC与血清C3、C4水平的关系 相关分析表明,18例病人血清C3含量与其CMSC水平呈显著正相关(r=0.922,P<0.01),并未发现血清CMSC与血清C4之间有明显相关性。血清标本经56℃，30 min补体灭活后，CMSC活性显著下降，提示CMSC活性可能主要来源于血清C3。
, 百拇医药
3 讨论
血清补体通过其传统途径及红细胞上的CR1可加速免疫复合物的清除;而血清补体的旁路途径，通过C3b、C3d 插入免疫复合物中，形成酯键，导致免疫复合物中可溶性抗原抗体亲和力的下降，直至抗原抗体分离，免疫复合物溶解，形成较小的免疫复合物分子，丧失激活补体的能力，并促进单核巨噬细胞系统对免疫复合物的清除。免疫复合物本身并非总是有害，只有当它们沉积于组织中时，损害才发生。血清补体作用的最终效应正是减少了免疫复合物在组织中的沉积，从而阻滞了免疫复合物沉积性疾病的发生及发展。慢性肝炎时，肝细胞功能受损，补体合成能力下降，从而使CMSC活性下降;病毒繁殖，抗原-抗体复合物不断产生;由于分子模拟机制导致自身抗体的增加;这些因素加速了血清补体的消耗，加剧了CMSC的下降；进而促进了肝细胞及肝外相关器官的免疫损害。
CMSC活性主要表现为对免疫复合物沉淀的再溶解，产物为可溶性小分子免疫复合物及游离的抗原抗体;而本研究中采用的标志免疫复合物本身即为可溶性的，结果可见血清仍具有将其继续离解的作用。本研究发现血清C3与CMSC相关，经补体灭活处理后血清CMSC下降，认为CMSC的来源主要是C3。提示C3对免疫复合物沉淀溶解为小分子后仍可继续降解，直至成为游离的抗原抗体，更彻底地阻断了免疫复合物在组织中的沉积。
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慢性肝炎时，血清循环免疫复合物升高，白细胞介素2游离受体水平升高，均提示慢性肝炎病人处于一种对肝炎病毒的免疫耐受状态。经Gwe治疗后，循环免疫复合物水平下降，血清游离IL-2R水平下降，提示这一耐受状态解除,增加了机体对肝炎病毒的清除能力[5]；CMSC恢复，进一步阻滞了免疫复合物的病理损害。Gwe制剂的上述作用将成为治疗免疫复合物疾病及病毒性疾病的理论依据，具有广阔的临床应用前景。
作者简介：焦顺昌，男，35岁，博士研究生，主要研究肿瘤化疗及免疫；
李求是，男，42岁，研究员，主要研究基础及临床免疫
4 参考文献
1 Tsai J F, Margolis H S，Jeng J E et al. Circulating immune complexes in chronic hepatitis related to hepatitis C and B viruses infection. Clin Immunol Immunopathol, 1995;75(1)：39
, 百拇医药
2 Davies K A， Chapman P T, Norsworthy P J et al. Clearance pathways of soluble immune complexes in the pig. Insights into the adaptive nature of antigen clearance in humans. J Immunol,1995;155(2):5760
3 李求是，钟大光，周严恒.Gwe治疗乙型肝炎病毒感染的疗效初报.中国免疫学杂志，1992;8(3)：183
4 胡明昌，姜新猷.血清补体溶解免疫复合物能力与小儿肾小球疾病的关系.中国免疫学杂志，1994;10(2)：124
5 焦顺昌，李求是，钟大光 et al. 本草九代对慢性肝炎患者血清可溶性白细胞介素2受体水平的调节作用.中国免疫学杂志，1993；9(4)：235
〔收稿1997-02-27 修回1998-03-23〕, http://www.100md.com
单位：解放军总医院，北京100853
关键词：慢性迁延型肝炎；Gwe；血清溶解免疫复合物能力
中国免疫学杂志990310 中国图书分类号 R512.620.5 R392
摘 要 目的：探讨Gwe口服液对慢性迁延型肝炎患者血清补体溶解免疫复合物能力(CMSC)的影响。方法：以健康献血员为对照，采用改良的天野氏比色法，测定18例慢性迁延型肝炎患者服用Gwe前后1个月左右的CMSC。结果：患者的CMSC下降为84.3%(P=0.02)，经Gwe治疗后恢复正常。血清C3含量与其CMSC水平呈显著正相关(r=0.922,P<0.01)，血清CMSC与C4之间无显著相关性。结论：Gwe治疗后CMSC活性显著升高，有利于减少免疫复合物的沉积，阻断慢性肝炎的病理进程。
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Effects of Gwe on the serum complement mediated immune complex solubilizing capacity in chronic persistent hepatitis patients
JIAO Shun-Chang,LI Qiu-Shi,ZHONG Da-Guang et al.
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Abstract Objective：To discuss the effect of Gwe on the serum complement mediated immune complex solubilizing capacity in chronic persistent hepatitis patients.Methods:Serum complement mediated immune complex solubilizing (CMSC)was measured in 18 chronic persistent hepatitis (CPH) patients and in 10 normal individuals.Results:It was found that the level of serum CMSC in the CPH patients was significantly lower than that in normal individuals(P=0.02)，and was significantly increased after treating with Gwe for a month.There was a positive relationship between the CMSC and serum C3 level in 18 patients,while the relationship of the CMSC with serum C4 was not found.Conclusion:The increased activity of CMSC after Gwe treatment is helpful to clean the deposited immune complex,and to discontinue the progress of chronic hepatitis.
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Key words Chronic persistent hepatitis Gwe Serum complement mediated immune complex solubilizing
慢性乙型肝炎是一种免疫复合物性疾病，抗体以及少量自身抗体形成的免疫复合物在血清中存在，并沉积于肝、肾、关节、心脏等组织器官，导致肝组织损伤及一系列肝外表现[1]。血清补体可促进免疫复合物被单核细胞清除[2]，是抗御免疫复合物疾病的重要环节之一。Gwe口服液是一种中草药制剂，具有促进慢性乙型肝炎患者血清HBsAg阴转、肝功恢复等一系列良好的临床疗效,并可使慢性乙肝患者循环免疫复合物显著下降[3]。为了进一步探索其循环免疫复合物下降的机制，我们测定了18例服用Gwe口服液前后一个月左右的患者血清溶解免疫复合物的活性，为临床治疗提供理论依据。
1 材料与方法
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1.1 试剂
1.1.1 可溶性HRP-抗HRP 复合物及底物 购于军事医学科学院微生物及流行病学研究所，效价为1∶3 000。
1.1.2 聚乙二醇(PEG6000) 上海生化所产品。
1.1.3 血清补体C3、C4测定试剂盒 购于海军总医院。
1.2 研究对象
1.2.1 对照组 解放军总医院健康献血员10人。
1.2.2 病人组 慢性迁延型乙型肝炎患者18人。符合1990年上海全国病毒性肝炎会议制定的诊断标准。
1.3 Gwe治疗方案 Gwe口服液，100 ml，1次/d，3个月为1个疗程。
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1.4 采血方法 分别于病人口服Gwe前及服药1个月后抽静脉血，分离血清，-20℃保存备用。
1.5 检测方法
1.5.1 血清补体溶解免疫复合物能力(CMSC)测定方法 参照天野氏比色法[4]，并加以改良，在96孔微量酶标板中进行。简述如下:可溶性HRP-抗HRP 复合物0.4 μl/孔加待测血清或对照血清15 μl/孔，37℃，温浴1 h，加入pH7.0 磷酸盐缓冲液及PEG6000，终体积为100 μl/孔,PEG终浓度为4%，37℃，温浴1 h，离心25 000 r/min，30 min，弃上清，沉淀中加入邻苯二胺(OPD,0.4 mg/ml)50 μl/孔，呈色后加入50 μl/孔 2 mol/L硫酸终止反应，在492 nm波长处比色，通过测定沉淀中的OD值间接测定血清CMSC活性。重复孔2个样本，全部沉淀时测出的OD值为2.0。
计算方法：设正常人CMSC值为100%，计算公式：
, 百拇医药
1.5.2 血清C3、C4测定方法 参照试剂盒说明书操作。
1.6 统计方法 采用两样本均数t检验。
2 结果
2.1 慢性迁延型肝炎(CPH)患者血清CMSC活性 若取正常人CMSC为100.0%，慢性迁延型肝炎患者的CMSC下降为84.3%(P=0.02),提示慢性迁延型肝炎患者血清溶解免疫复合物的能力下降。
2.2 Gwe口服液治疗对血清CMSC活性的影响 经Gwe口服液治疗后病人血清CMSC的能力显著提高，治疗前为84.3%，治疗后提高为99.1%(P<0.01)，恢复正常。
2.3 慢性迁延型肝炎(CPH)患者血清CMSC与血清C3、C4水平的关系 相关分析表明,18例病人血清C3含量与其CMSC水平呈显著正相关(r=0.922,P<0.01),并未发现血清CMSC与血清C4之间有明显相关性。血清标本经56℃，30 min补体灭活后，CMSC活性显著下降，提示CMSC活性可能主要来源于血清C3。
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3 讨论
血清补体通过其传统途径及红细胞上的CR1可加速免疫复合物的清除;而血清补体的旁路途径，通过C3b、C3d 插入免疫复合物中，形成酯键，导致免疫复合物中可溶性抗原抗体亲和力的下降，直至抗原抗体分离，免疫复合物溶解，形成较小的免疫复合物分子，丧失激活补体的能力，并促进单核巨噬细胞系统对免疫复合物的清除。免疫复合物本身并非总是有害，只有当它们沉积于组织中时，损害才发生。血清补体作用的最终效应正是减少了免疫复合物在组织中的沉积，从而阻滞了免疫复合物沉积性疾病的发生及发展。慢性肝炎时，肝细胞功能受损，补体合成能力下降，从而使CMSC活性下降;病毒繁殖，抗原-抗体复合物不断产生;由于分子模拟机制导致自身抗体的增加;这些因素加速了血清补体的消耗，加剧了CMSC的下降；进而促进了肝细胞及肝外相关器官的免疫损害。
CMSC活性主要表现为对免疫复合物沉淀的再溶解，产物为可溶性小分子免疫复合物及游离的抗原抗体;而本研究中采用的标志免疫复合物本身即为可溶性的，结果可见血清仍具有将其继续离解的作用。本研究发现血清C3与CMSC相关，经补体灭活处理后血清CMSC下降，认为CMSC的来源主要是C3。提示C3对免疫复合物沉淀溶解为小分子后仍可继续降解，直至成为游离的抗原抗体，更彻底地阻断了免疫复合物在组织中的沉积。
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慢性肝炎时，血清循环免疫复合物升高，白细胞介素2游离受体水平升高，均提示慢性肝炎病人处于一种对肝炎病毒的免疫耐受状态。经Gwe治疗后，循环免疫复合物水平下降，血清游离IL-2R水平下降，提示这一耐受状态解除,增加了机体对肝炎病毒的清除能力[5]；CMSC恢复，进一步阻滞了免疫复合物的病理损害。Gwe制剂的上述作用将成为治疗免疫复合物疾病及病毒性疾病的理论依据，具有广阔的临床应用前景。
作者简介：焦顺昌，男，35岁，博士研究生，主要研究肿瘤化疗及免疫；
李求是，男，42岁，研究员，主要研究基础及临床免疫
4 参考文献
1 Tsai J F, Margolis H S，Jeng J E et al. Circulating immune complexes in chronic hepatitis related to hepatitis C and B viruses infection. Clin Immunol Immunopathol, 1995;75(1)：39
, 百拇医药
2 Davies K A， Chapman P T, Norsworthy P J et al. Clearance pathways of soluble immune complexes in the pig. Insights into the adaptive nature of antigen clearance in humans. J Immunol,1995;155(2):5760
3 李求是，钟大光，周严恒.Gwe治疗乙型肝炎病毒感染的疗效初报.中国免疫学杂志，1992;8(3)：183
4 胡明昌，姜新猷.血清补体溶解免疫复合物能力与小儿肾小球疾病的关系.中国免疫学杂志，1994;10(2)：124
5 焦顺昌，李求是，钟大光 et al. 本草九代对慢性肝炎患者血清可溶性白细胞介素2受体水平的调节作用.中国免疫学杂志，1993；9(4)：235
〔收稿1997-02-27 修回1998-03-23〕, http://www.100md.com