原因不明习惯性流产与HLA相关性的初步研究
作者：杨珏琴 姚芳娟 许玲娣 范丽安 张锦峰 陆丽华 戴钟英
单位：杨珏琴 姚芳娟 许玲娣 范丽安 (上海第二医科大学上海市免疫学研究所，上海200025)；张锦峰 陆丽华 戴钟英 (上海第六人民医院，上海200233)
关键词：习惯性流产；HLA分型；抗原；易感性
中国免疫学杂志990317 中国图书分类号 R378 R371-33
摘 要 目的：探讨HLA与原因不明习惯性流产(RSA)的关系。方法：用血清学方法对64例3次以上RSA患者及其配偶进行HLA抗原检测，并与100例正常群体比较。结果：HLA-A、-B、-DQ位点抗原频率在RSA病人组与正常对照组中无明显差异，而HLA-DR7抗原频率在RSA夫妇中则明显增高，为21.88%(28/128)，P<0.01，RR值为2.8。HLA-DR8在RSA夫妇组中明显下降，为7.03%(9/128)，P<0.01。结论：在上海人群中HLA-DR7可能与RSA的易感有关。
, http://www.100md.com
Studys on HLA specifities in recurrent spontaneous abortion
YANG Jue-Qin,YAO Fang-Juan,XU Ling-Di et al.
Shanghai Second Medical University,Shanghai Institute of Immunology,Shanghai 200025
Abstract Objective:To investigate the relation between recurrent spontaneous abortion(RSA)and HLA in Chinese Shanghai Han.Methods:Results of HLA typing by serology in 64 couples with at least 3 unexplained fetal loses were compared with those of 100 normal controls.Results:The distribution of HLA-A，-B，and DQ phenotypes did not differ significantly between patients and controls.The frequencies of DR7 was significantly increased in patients(21.88%,28/128),P<0.01,RR=2.8.The frequency of DR8 was significantly decreased in patients(7.03%,9/128),P<0.01.Conclusion:It is possible that the susceptibility of RSA for Chinese Shanghai Han were related with DR7.
, 百拇医药
Key words RSA HLA typing Antigen Susceptibility
原因不明习惯性流产(Recurrent spontaneous abortion,RSA)是妊娠常见并发症之一，病因迄今未明。越来越多的研究表明其发生与免疫有关，特别是与人类主要组织相容性抗原(HLA)的关系已成为生殖免疫研究热点。由于HLA抗原丰富的多态性及其在各人种中分布不同，各国所报道的HLA与RSA关联情况也不同[1,2]。国内仅见少量RSA与HLA-I类相关报道。而HLA-II类基因在抗原提呈及免疫应答中起重要作用。一般而言，免疫性疾病与HLA-II类的关联要比与I类的关联强得多[1]。本文报道用第11届IHWC提供的试剂对上海地区RSA患者及其配偶HLA-I类、II类抗原调查情况，试图从免疫遗传角度探讨RSA的发生。
1 材料与方法
, 百拇医药 1.1 RSA病人来源 64例RSA病人为上海市第六人民医院妇产科习惯性流产专科门诊进行免疫治疗的病人，经严格检查，排除染色体异常，内分泌失调及妇产科检查异常等疾患，并为3次以上(含3次)不明原因早期流产患者。正常对照为100例无流产史的随机健康个体，男女各50例,其中包括36对正常生育夫妇。
1.2 HLA分型方法 用血清学方法进行HLA-I类(-A,-B)、II类(-DR,-DQ)分型。所有分型血清由第11届国际组织相容性专题会议生殖免疫组提供。可用于检测 A位点15个抗原，B位点29个抗原，DR位点10个抗原,DQ位点3个抗原。实验步骤按国际通用的补体依赖微量淋巴细胞毒方法。
1.3 数据处理 抗原频率用百分数表示,χ2值用四格表计算，相对危险度(RR)按Woolf公式计算。
2 结果
2.1 HLA-I类抗原在RSA病人与正常对照组中分布未发现明显差异。
, 百拇医药
2.2 HLA-DR抗原在RSA夫妇组与正常对照组中分布有明显差异。其中HLA-DR7抗原频率在RSA夫妇组中明显增高，为21.88%(28/128),正常对照组中仅为9.00%(9/100),χ2=6.85,P<0.05,RR值为2.8。同时,HLA-DR8在RSA组中明显降低为7.03%(9/128),正常对照组为21.00%(21/100)，两者差异显著,χ2=9.59, P<0.01，见表1,HLA-DQ抗原频率两组无明显差异。
表1 64对习惯性流产夫妇HLA-DR抗原频率分布与100例正常对照组比较
Tab.1 Frequencies of HLA-DR antigens in 64 couples with recurrent spontaneous and 100 controls HLA antigen
RSA(n=128)
, http://www.100md.com
Controls(n=100)
χ2
RR
n
%
n
%
DR1
5
3.91
1
1.00
DR2
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35
27.34
31
31.00
DR3
11
8.59
6
6.00
DR4
40
31.25
23
, 百拇医药
23.00
DR5
56
43.75
52
52.00
DR6
23
17.97
22
22.00
DR7
28
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21.88
9
9.00
6.85
2.8
DR8
9
7.03
21
21.00
9.59
DR9
27
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21.09
21
21.00
DR10
3
2.34
3
3.00
2.3 将RSA夫妇分为妻子组和丈夫组与正常组比较,发现DR7频率在妻子组与丈夫组均比正常对照组高,分别为 20.31% (13/64),23.44%(15/64),正常对照组为 9.00%(9/100),χ2分别为6.51和4.30,P<0.05;而DR8在妻子组与丈夫组中均降低,分别为9.38%(6/64)，4.69%(3/64)，见表2。
, 百拇医药
2.4 对64对RSA夫妇与36对正常生育夫妇HLA各位点(-A、-B、-DR、-DQ)及各位点组合(-A+-B、-DR+-DQ、-A+-B+-DR+-DQ)共享率比较，未发现有统计学上差异[3]。表2 习惯性流产丈夫组、妻子组HLA-DR抗原频率与正常对照组比较
Tab.2 Frequencies of HLA-DR antigens in husbands and wifes with recurrent spontaneous abortion and controls
RSA husband (n=64)
RSA wife (n=64)
Controls (n=100)
RR
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χ2
n
%
n
%
n
%
H
W
H
W
DR1
2
3.13
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4
6.25
1
1.00
DR2
15
23.44
22
34.38
31
31.00
DR3
5
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7.81
2
3.13
6
6.00
DR4
21
32.81
19
29.69
23
23.00
DR5
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28
43.75
27
42.19
52
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DR6
12
18.75
12
18.75
22
22.00
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DR7
15
23.44
13
20.31
9
9.00
3.10
2.58
6.51
4.30
DR8
3
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4.69
6
9.38
21
21.00
8.31
3.84
DR9
14
21.88
13
20.31
21
, 百拇医药
21.00
DR10
2
3.13
1
1.56
3
3.00
3 讨论
HLA抗原具有极丰富的多态性，是研究遗传因子与疾病关联的标志[4]。RSA中约有70%被认为与免疫有关。70年代中期，国外就有学者相继对HLA抗原在RSA发病中的作用进行研究，找到了一些支持免疫与RSA发生有关的证据。主要有RSA夫妇间HLA抗原共有数大于正常生育夫妇，引不出保护胎儿生长的抗体[5]，即夫妇间HLA抗原相容性增大，以致母体不能产生针对胎儿细胞膜上表达的父源HLA抗体，而这些抗体可能是特异性控制母体对其配偶HLA抗原的免疫反应，即具有封闭抗体的作用，胎儿因得不到这些封闭抗体的保护而遭排斥，导致流产；用RSA患者丈夫淋巴细胞对其进行免疫治疗，取得较好疗效[6]。但也有研究发现RSA发生与夫妇间HLA相容性及HLA抗原频率无关[7]。本研究初步结果支持RSA发生与免疫有关，特别是与某些HLA-DR抗原相关。我们结果显示DR7抗原频率在RSA中明显增高。HLA抗原分布有明显的地区差异，DR7抗原在我国北方民族高于南方民族[8]，上海地区为9.00%左右，而RSA患者中却为21.88%，RR值为2.8。更值得注意的是当RSA夫妇分别列组与对照组比较时，二组DR7频率均高于正常对照组，妻子组为20.31%,丈夫组为23.44%，正常对照为9.00%，在统计学上有显著性差异。提示DR7抗原无论是妻子还是丈夫携带都可能与RSA发生有关。HLA-DR在机体识别自身与外来抗原的免疫应答中起重要作用。DR7抗原可能是一个RSA的易感基因，在某些因素刺激下参与免疫应答，引起母胎免疫排斥，导致RSA发生；它也可能是一个与RSA致病基因连锁在一起的基因，在RSA病人中的检出率就明显增高。而HLA-DR8在RSA组中明显降低为7.03%，DR8是中国汉族常见的抗原，频率为21.00%左右。结果显示具有DR8抗原个体不易发生RSA，与日本人结果相似[9]。调查的64对患者用其丈夫淋巴细胞进行免疫治疗后，91%的病人妊娠成功，正常分娩。所有成功病人免疫治疗后其抗丈夫B淋巴细胞抗体均由阴性转为阳性，提示妻子抗丈夫B淋巴细胞抗体在维持妊娠中的重要性。本文未发现RSA夫妇间HLA抗原共享率与正常对照组有差异。因而认为不能简单的用夫妇间HLA相容性增加来解释RSA的发病。
, http://www.100md.com
本研究由于采用血清学方法，不能进行HLA亚型分析，还需扩大样本，用DNA技术对HLA-II直接分型来证实本结果。同时还需开展对只表达在滋养层细胞膜上的HLA-G位点抗原的研究，了解它在滋养层细胞膜上的分布及功能，对揭示RSA的发病机理将有重要意义。
原因不明习惯性流产与HLA相关性的初步研究 本文得到卫生部及上海市自然科学基金资助
作者简介：杨珏琴，女，41岁，副主任技师，主要从事免疫遗传学研究；
陆丽华，女，39岁，副主任医师，主要从事妇产科工作
4 参考文献
1 Christtiansen O B,Mathieson O,Hosth M et al. Studies of RFLP-inferred HLA-DR-DQ haplotype in Danish women with recurrent fetal losses. Tissue Antigens，1992；40:134
, http://www.100md.com
2 Ito K,Obata F,Tanaka T et al.Analysis of HLA-DR types of unexplained recurrent spontaneous aborters in the Japanese population by oligonucleotide-DNA typing. Tissue Antigen，1992；40:204
3 范丽安，许玲娣，姚芳娟 et al. 原因不明习惯性流产HLA相容性研究.中国免疫学杂志，1994；10(Suppl.):172
4 范丽安. HLA系统研究的一些进展及其与疾病关联.免疫学杂志,1992；8(1):61
5 Thomas M L, Harger J H, Wagener D K et al. HLA sharing and spontaneous abortion in humans. Am J Obstet Gynecol,1995；151:10
, 百拇医药
6 Vnander A M, Olding L B. Habitual Abortion: Parental sharing of HLA antigens, absence of maternal blocking antibody, and suppression of maternallymphocytes. Am J Reprod Immunol，1983；4:171
7 Balasch J C,Martorell J,Jove C et al. Further data against HLA sharing in couples with recurrent spontaneous abortion. Gynecol Endocrinol, 1989；3:63
8 Chen R B,Ye G Y,Geng Z C. HLA polymorphism of the principal minority nationalities in mainland China. In :Tsujik K, Azawa M,Sasazuki T eds.Proc of the 11th histocompatibility workshop and conference. New York:Oxford University Press,1992：676-679
9 Takamizawa M,Juji T,Tsuneyoshi H. Recurrent spontaneous abortion and human leukocyte antigen DRw8. Am J Obstet Gynecol,1989；157:517
〔收稿1997-07-17 修回1997-12-11〕, 百拇医药
单位：杨珏琴 姚芳娟 许玲娣 范丽安 (上海第二医科大学上海市免疫学研究所，上海200025)；张锦峰 陆丽华 戴钟英 (上海第六人民医院，上海200233)
关键词：习惯性流产；HLA分型；抗原；易感性
中国免疫学杂志990317 中国图书分类号 R378 R371-33
摘 要 目的：探讨HLA与原因不明习惯性流产(RSA)的关系。方法：用血清学方法对64例3次以上RSA患者及其配偶进行HLA抗原检测，并与100例正常群体比较。结果：HLA-A、-B、-DQ位点抗原频率在RSA病人组与正常对照组中无明显差异，而HLA-DR7抗原频率在RSA夫妇中则明显增高，为21.88%(28/128)，P<0.01，RR值为2.8。HLA-DR8在RSA夫妇组中明显下降，为7.03%(9/128)，P<0.01。结论：在上海人群中HLA-DR7可能与RSA的易感有关。
, http://www.100md.com
Studys on HLA specifities in recurrent spontaneous abortion
YANG Jue-Qin,YAO Fang-Juan,XU Ling-Di et al.
Shanghai Second Medical University,Shanghai Institute of Immunology,Shanghai 200025
Abstract Objective:To investigate the relation between recurrent spontaneous abortion(RSA)and HLA in Chinese Shanghai Han.Methods:Results of HLA typing by serology in 64 couples with at least 3 unexplained fetal loses were compared with those of 100 normal controls.Results:The distribution of HLA-A，-B，and DQ phenotypes did not differ significantly between patients and controls.The frequencies of DR7 was significantly increased in patients(21.88%,28/128),P<0.01,RR=2.8.The frequency of DR8 was significantly decreased in patients(7.03%,9/128),P<0.01.Conclusion:It is possible that the susceptibility of RSA for Chinese Shanghai Han were related with DR7.
, 百拇医药
Key words RSA HLA typing Antigen Susceptibility
原因不明习惯性流产(Recurrent spontaneous abortion,RSA)是妊娠常见并发症之一，病因迄今未明。越来越多的研究表明其发生与免疫有关，特别是与人类主要组织相容性抗原(HLA)的关系已成为生殖免疫研究热点。由于HLA抗原丰富的多态性及其在各人种中分布不同，各国所报道的HLA与RSA关联情况也不同[1,2]。国内仅见少量RSA与HLA-I类相关报道。而HLA-II类基因在抗原提呈及免疫应答中起重要作用。一般而言，免疫性疾病与HLA-II类的关联要比与I类的关联强得多[1]。本文报道用第11届IHWC提供的试剂对上海地区RSA患者及其配偶HLA-I类、II类抗原调查情况，试图从免疫遗传角度探讨RSA的发生。
1 材料与方法
, 百拇医药 1.1 RSA病人来源 64例RSA病人为上海市第六人民医院妇产科习惯性流产专科门诊进行免疫治疗的病人，经严格检查，排除染色体异常，内分泌失调及妇产科检查异常等疾患，并为3次以上(含3次)不明原因早期流产患者。正常对照为100例无流产史的随机健康个体，男女各50例,其中包括36对正常生育夫妇。
1.2 HLA分型方法 用血清学方法进行HLA-I类(-A,-B)、II类(-DR,-DQ)分型。所有分型血清由第11届国际组织相容性专题会议生殖免疫组提供。可用于检测 A位点15个抗原，B位点29个抗原，DR位点10个抗原,DQ位点3个抗原。实验步骤按国际通用的补体依赖微量淋巴细胞毒方法。
1.3 数据处理 抗原频率用百分数表示,χ2值用四格表计算，相对危险度(RR)按Woolf公式计算。
2 结果
2.1 HLA-I类抗原在RSA病人与正常对照组中分布未发现明显差异。
, 百拇医药
2.2 HLA-DR抗原在RSA夫妇组与正常对照组中分布有明显差异。其中HLA-DR7抗原频率在RSA夫妇组中明显增高，为21.88%(28/128),正常对照组中仅为9.00%(9/100),χ2=6.85,P<0.05,RR值为2.8。同时,HLA-DR8在RSA组中明显降低为7.03%(9/128),正常对照组为21.00%(21/100)，两者差异显著,χ2=9.59, P<0.01，见表1,HLA-DQ抗原频率两组无明显差异。
表1 64对习惯性流产夫妇HLA-DR抗原频率分布与100例正常对照组比较
Tab.1 Frequencies of HLA-DR antigens in 64 couples with recurrent spontaneous and 100 controls HLA antigen
RSA(n=128)
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Controls(n=100)
χ2
RR
n
%
n
%
DR1
5
3.91
1
1.00
DR2
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35
27.34
31
31.00
DR3
11
8.59
6
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DR4
40
31.25
23
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23.00
DR5
56
43.75
52
52.00
DR6
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DR7
28
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21.88
9
9.00
6.85
2.8
DR8
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21
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9.59
DR9
27
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21.09
21
21.00
DR10
3
2.34
3
3.00
2.3 将RSA夫妇分为妻子组和丈夫组与正常组比较,发现DR7频率在妻子组与丈夫组均比正常对照组高,分别为 20.31% (13/64),23.44%(15/64),正常对照组为 9.00%(9/100),χ2分别为6.51和4.30,P<0.05;而DR8在妻子组与丈夫组中均降低,分别为9.38%(6/64)，4.69%(3/64)，见表2。
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2.4 对64对RSA夫妇与36对正常生育夫妇HLA各位点(-A、-B、-DR、-DQ)及各位点组合(-A+-B、-DR+-DQ、-A+-B+-DR+-DQ)共享率比较，未发现有统计学上差异[3]。表2 习惯性流产丈夫组、妻子组HLA-DR抗原频率与正常对照组比较
Tab.2 Frequencies of HLA-DR antigens in husbands and wifes with recurrent spontaneous abortion and controls
RSA husband (n=64)
RSA wife (n=64)
Controls (n=100)
RR
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χ2
n
%
n
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H
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H
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DR1
2
3.13
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4
6.25
1
1.00
DR2
15
23.44
22
34.38
31
31.00
DR3
5
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7.81
2
3.13
6
6.00
DR4
21
32.81
19
29.69
23
23.00
DR5
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28
43.75
27
42.19
52
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DR6
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18.75
12
18.75
22
22.00
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DR7
15
23.44
13
20.31
9
9.00
3.10
2.58
6.51
4.30
DR8
3
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4.69
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21
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8.31
3.84
DR9
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21.88
13
20.31
21
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DR10
2
3.13
1
1.56
3
3.00
3 讨论
HLA抗原具有极丰富的多态性，是研究遗传因子与疾病关联的标志[4]。RSA中约有70%被认为与免疫有关。70年代中期，国外就有学者相继对HLA抗原在RSA发病中的作用进行研究，找到了一些支持免疫与RSA发生有关的证据。主要有RSA夫妇间HLA抗原共有数大于正常生育夫妇，引不出保护胎儿生长的抗体[5]，即夫妇间HLA抗原相容性增大，以致母体不能产生针对胎儿细胞膜上表达的父源HLA抗体，而这些抗体可能是特异性控制母体对其配偶HLA抗原的免疫反应，即具有封闭抗体的作用，胎儿因得不到这些封闭抗体的保护而遭排斥，导致流产；用RSA患者丈夫淋巴细胞对其进行免疫治疗，取得较好疗效[6]。但也有研究发现RSA发生与夫妇间HLA相容性及HLA抗原频率无关[7]。本研究初步结果支持RSA发生与免疫有关，特别是与某些HLA-DR抗原相关。我们结果显示DR7抗原频率在RSA中明显增高。HLA抗原分布有明显的地区差异，DR7抗原在我国北方民族高于南方民族[8]，上海地区为9.00%左右，而RSA患者中却为21.88%，RR值为2.8。更值得注意的是当RSA夫妇分别列组与对照组比较时，二组DR7频率均高于正常对照组，妻子组为20.31%,丈夫组为23.44%，正常对照为9.00%，在统计学上有显著性差异。提示DR7抗原无论是妻子还是丈夫携带都可能与RSA发生有关。HLA-DR在机体识别自身与外来抗原的免疫应答中起重要作用。DR7抗原可能是一个RSA的易感基因，在某些因素刺激下参与免疫应答，引起母胎免疫排斥，导致RSA发生；它也可能是一个与RSA致病基因连锁在一起的基因，在RSA病人中的检出率就明显增高。而HLA-DR8在RSA组中明显降低为7.03%，DR8是中国汉族常见的抗原，频率为21.00%左右。结果显示具有DR8抗原个体不易发生RSA，与日本人结果相似[9]。调查的64对患者用其丈夫淋巴细胞进行免疫治疗后，91%的病人妊娠成功，正常分娩。所有成功病人免疫治疗后其抗丈夫B淋巴细胞抗体均由阴性转为阳性，提示妻子抗丈夫B淋巴细胞抗体在维持妊娠中的重要性。本文未发现RSA夫妇间HLA抗原共享率与正常对照组有差异。因而认为不能简单的用夫妇间HLA相容性增加来解释RSA的发病。
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本研究由于采用血清学方法，不能进行HLA亚型分析，还需扩大样本，用DNA技术对HLA-II直接分型来证实本结果。同时还需开展对只表达在滋养层细胞膜上的HLA-G位点抗原的研究，了解它在滋养层细胞膜上的分布及功能，对揭示RSA的发病机理将有重要意义。
原因不明习惯性流产与HLA相关性的初步研究 本文得到卫生部及上海市自然科学基金资助
作者简介：杨珏琴，女，41岁，副主任技师，主要从事免疫遗传学研究；
陆丽华，女，39岁，副主任医师，主要从事妇产科工作
4 参考文献
1 Christtiansen O B,Mathieson O,Hosth M et al. Studies of RFLP-inferred HLA-DR-DQ haplotype in Danish women with recurrent fetal losses. Tissue Antigens，1992；40:134
, http://www.100md.com
2 Ito K,Obata F,Tanaka T et al.Analysis of HLA-DR types of unexplained recurrent spontaneous aborters in the Japanese population by oligonucleotide-DNA typing. Tissue Antigen，1992；40:204
3 范丽安，许玲娣，姚芳娟 et al. 原因不明习惯性流产HLA相容性研究.中国免疫学杂志，1994；10(Suppl.):172
4 范丽安. HLA系统研究的一些进展及其与疾病关联.免疫学杂志,1992；8(1):61
5 Thomas M L, Harger J H, Wagener D K et al. HLA sharing and spontaneous abortion in humans. Am J Obstet Gynecol,1995；151:10
, 百拇医药
6 Vnander A M, Olding L B. Habitual Abortion: Parental sharing of HLA antigens, absence of maternal blocking antibody, and suppression of maternallymphocytes. Am J Reprod Immunol，1983；4:171
7 Balasch J C,Martorell J,Jove C et al. Further data against HLA sharing in couples with recurrent spontaneous abortion. Gynecol Endocrinol, 1989；3:63
8 Chen R B,Ye G Y,Geng Z C. HLA polymorphism of the principal minority nationalities in mainland China. In :Tsujik K, Azawa M,Sasazuki T eds.Proc of the 11th histocompatibility workshop and conference. New York:Oxford University Press,1992：676-679
9 Takamizawa M,Juji T,Tsuneyoshi H. Recurrent spontaneous abortion and human leukocyte antigen DRw8. Am J Obstet Gynecol,1989；157:517
〔收稿1997-07-17 修回1997-12-11〕, 百拇医药