类风湿性关节炎患者2H4+T淋巴细胞亚群的流式细胞仪分析
作者：吴福国 邱翠娥 韩晓琳 朱立平 蒋 明
单位：山东济宁医学院生化教研室，济宁 272113
关键词：类风湿性关节炎；T淋巴细胞亚群；免疫球蛋白；流式细胞仪
中国免疫学杂志990316 中国图书分类号 R593.2 R392
摘 要 目的：了解类风湿性关节炎患者免疫功能的异常变化，探讨其发病机制。方法：使用间接免疫荧光和直接免疫荧光方法对11例RA患者和12例健康人的外周血T淋巴细胞进行了研究。结果：RA 患者与对照组比较CD3+T细胞和CD4+T细胞无明显变化，CD8+T细胞明显减少，CD4+/CD8+比值增加。CD4+2H4+T细胞在CD4+T细胞中的比例减少，而CD4+4B4+T细胞的比例增加。 进一步研究发现，RA患者活化的CD25+T淋巴细胞比率增加。此外，血清学研究发现，RA患者IgG 含量显著增加，IgM和IgA含量与正常组比较无明显差别。结论：RA患者存在细胞免疫和体液免疫的功能紊乱，而大量自身免疫球蛋白的产生可能是辅助性T淋巴细胞升高，抑制性T淋巴细胞减少以及活化T淋巴细胞增加的结果，因此，T淋巴细胞亚群比例失衡在RA的发病中可能起着更为重要的作用。
, 百拇医药
Analysis of 2H4+T lymphocyte subsets in the peripheral blood of patients with rheumatoid arthritis
WU Fu-Guo，QIU Cui-E，HAN Xiao-Lin et al.
Department of Biochemistry,Jining Medical College, Shandong 272113
Abstract Objective:To explore the phenotypic characteristics of T lymphocyte subsets in the peripheral blood(PB) of patients with rheumatoid arthritis( RA).Methods:T lymphocyte subsets in 11 patients with RA and 12 healthy controls were analyzed by using single and 2 color fluorescence flow cytometry.Results:(1)RA patients were similar to healthy controls in the percentages of CD3+ cells and CD4+ cells in PB, but the percentage of CD8+ cells was significantly lower(P<0.05) and the ratio of CD4+ cells to CD8+ cells was significantly higher(P<0.01) in the patients with RA. In addition, the percentage of CD25+ cells was also increased compared to that in PB from healthy controls.(2)The percentage of CD4+2H4+cells among CD4+ cells in PB from patients with RA was markedly decreased (P<0.01),but the percentage of CD4+4B4+ cells was significantly increased(P<0.01) compared with that in PB from healthy controls. (3) Serum IgG concentrations in RA patients were significantly higher than that in healthy controls. However, there were no significantly differences between RA patients and healthy controls in the serum IgM and IgA.Conclusion:The combination of the increment in helper T cells, the reduction in suppressor T cells, and the increment in activated T cells may lead to excessive production of autoantibodies in RA patients.
, 百拇医药
Key words Rheumatoid arthritis T lymphocyte subsets Immunoglobulin Flow cytometry
类风湿性关节炎(Rheumatoid Arthritis，RA)是一种病因复杂的自身免疫性疾病，其发病机制至今还不清楚。许多学者认为T淋巴细胞亚群比率异常在RA 发病机制中可能具有重要作用[1]。但这种异常在类风湿性关节炎患者中尚无一定的规律。鉴于此， 本文利用流式细胞仪技术对11例RA患者外周血淋巴细胞亚群进行了检测，并观察了其血清免疫球蛋白含量的变化，以寻找其免疫功能紊乱的证据，揭示细胞和体液免疫功能异常在RA发病机制中的意义。
1 材料与方法
1.1 研究对象 12例正常对照为本室自愿献血者，男5例，女7例，年龄19～50岁，平均34岁。11 例类风湿性关节炎患者为北京协和医院内科临床免疫及风湿病学组门诊病人，均符合美国风湿病学会1982年RA的分类标准，其中男3例，女8例，年龄24～72岁，平均46岁。均处于活动期。检测前均未服用对免疫功能有影响的药物如糖皮质激素等。
, 百拇医药
1.2 主要试剂 CD3，CD4和CD8单克隆抗体试剂由中国医科院基础所单抗室提供。抗Tac，MsIgG1-RD1，MsIgG-FITC，T4-FITC/2H4-RD1单克隆抗体为美国Coulter公司产品。FITC标记兔抗鼠 IgG为卫生部北京生物制品研究所产品。免疫球蛋白IgG、IgM和IgA 单向扩散定量检测板和标准曲线是由北京科兴实验试剂开发公司提供。
1.3 外周血单个核细胞(PBMNC)的制备 从肘静脉取10 ml血，肝素抗凝，与等量磷酸盐缓冲液(PBS)混匀后，置含10 ml 淋巴细胞分离液(上海试剂二厂产品)的离心管中，离心后取界面层细胞，洗涤3次，计数细胞,调整细胞浓度为1×106ml-1[2]。
1.4 细胞表面分化抗原间接免疫荧光染色与直接免疫荧光染色 取1×106PBMNC,分别与各种稀释的单抗100 μl混匀,置冰浴30 min, 冷洗涤液洗3次。若为直接免疫荧光染色试剂则直接加0.5 ml PBS上机。 若为非直接免疫荧光染色试剂则需要加1:30稀释的FITC标记兔抗鼠IgG 100 μl,冰浴30 min,洗3次,最后加0.5 ml PBS 悬起细胞上机。同时，根据抗体的来源，分别设 SP2/0 细胞腹水对照管、PBS对照管和 MsIgG1-RD1/MsIgG1-FITC对照管[3]。
, 百拇医药
1.5 流式细胞仪分析 用Coulter公司生产的EPICSⅤ型流式细胞仪分析。每个样品均检测10 000个细胞，用仪器内装的MDADSⅡ计算机分析。
2 结果
2.1 类风湿性关节炎患者T淋巴细胞亚群分析 RA患者与对照组比较，CD3+和CD4+T淋巴细胞无明显变化。而 CD8+T细胞明显减少，CD4+/CD8+比值明显升高。CD25+细胞亦明显升高(见表1)。
表1 RA患者与正常人T淋巴细胞亚群检测结果比较(%)
Tab.1 Cell surface characteristics of T lymphocytes in blood from patients with RA and healthy controls(%)
, http://www.100md.com
n
CD3
CD4
CD8
CD4/CD8
Tac(CD25)
Normal
12
62.79±6.35
46.23±6.12
25.81±6.41
1.79±0.20
, 百拇医药
3.49±1.38
RA
11
60.69±7.22
48.16±7.25
20.50±7.11
2.34±0.23
8.91±1.74
P
>0.05
>0.05
<0.05
, 百拇医药
<0.01
<0.01
2.2 类风湿性关节炎患者CD4+T淋巴细胞亚群分析 上述结果提示，RA患者CD4+T细胞与对照组比较无明显变化，为进一步观察组成 CD4+T细胞的两个亚群之间是否有区别，用抗2H4单抗又分别对10例正常人和10例RA 患者外周血淋巴细胞进行了测定。结果表明，RA患者CD4+2H4+T细胞和CD4+4B4+T细胞在CD4+T 细胞中所占的比例与正常对照组比较均有显著性差异，而且两者的比值与正常对照组比较也有非常显著的差异(见表2)。表2 RA患者与正常对照CD4+T淋巴细胞亚群检测结果比较
Tab.2 Cell surface characteristics of CD4+ cell subsets in peripheral blood from patients with RA and healthy controls
, http://www.100md.com
n
CD4+2H4+T cells
CD4+4B4+T cells
CD4+4B4+T cells
CD4+T cells(%)
CD4+T cells(%)
CD4+2H4+T cells(ratio)
Normal
, 百拇医药 10
42.41±8.62
57.59±8.73
1.34±0.76
RA
10
22.87±9.21
77.13±8.87
3.37±0.65
P
<0.01
<0.01
, 百拇医药 <0.01
2.3 类风湿性关节炎患者血清免疫球蛋白含量比较 RA患者与正常对照组血清IgG、IgM、IgA含量测定结果见表3。两组比较IgG 存在显著性差异，而IgM、IgA差异无显著性。表3 RA患者与正常对照组血清免疫球蛋白含量比较(g/L)
Tab.3 Concentrations of serum IgG、IgM and IgA in patients with RA and healthy controls(g/L)
n
IgG
IgM
IgA
Normal
, http://www.100md.com
12
12.6±3.4
1.4±0.3
2.2±0.3
RA
11
27.3±8.1
1.7±0.8
2.6±1.1
P
<0.01
>0.05
>0.05
, 百拇医药
3 讨论
RA在我国是一种比较常见的风湿性疾病。尽管国内外对其发病机制进行了大量的研究，但目前仍不十分清楚。已有的研究表明，RA是一种病因复杂的自身免疫性疾病，其免疫学方面的改变各家报道不一。Nakao等报道，RA患者外周血CD4+T细胞和CD8+T细胞与正常人比较均没有明显变化[4]。本文结果表明，RA患者外周血CD4+T 细胞与正常人比较无明显变化，而CD8+T细胞明显减少，活化T细胞明显升高。 这一结果与前者不完全相同， 但与Ichikawa等的结果一致[5-7]。CD4+T细胞的比率正常是否也说明CD4+2H4+和CD4+ 4B4+T细胞也正常呢？为此，本文做了进一步分析，发现CD4+2H4+T细胞( 抑制性诱导细胞 ) 在CD4+细胞中所占的比例明显减少，而CD4+4B4+T细胞(辅助性T细胞)明显增加，可见这两种亚群的组成与正常人明显不同，此结果与Nakao等的报道一致[4，5，8]。这说明RA患者由于CD4+2H4+T细胞减少，势必引起CD8+CD11b+T细胞(抑制性效应细胞)减少，抑制功能相对不足。相反，辅助T细胞(CD4+4B4+T细胞)的增加以及由抗原活化的T细胞(CD25+T细胞) 的增加，使免疫功能亢进，引发细胞介导的免疫反应。其结果可使休止B细胞分化、 增殖为抗体形成细胞，产生大量免疫球蛋白。本文的测定结果血清IgG含量明显增高， 也证实了我们的推断。由此可见， RA患者体内不仅存在体液免疫的功能紊乱，而且细胞免疫中各种T淋巴细胞亚群的比例失衡在RA的发病中可能起着更为重要的作用。至于T 淋巴细胞亚群的比例失衡是RA发病的原因，还是RA发病的结果，还需要进一步证实。
, 百拇医药
有趣的是，在检测中发现，CD25+T细胞百分率的高低与病人的疼痛关节数和压痛指数有关。CD25+细胞百分率愈高的RA患者其病人的疼痛关节数愈多,压痛指数也愈高。提示RA患者外周血淋巴细胞亚群的变化可能部分地与临床表现和病情活动有关。
本文的工作只是证实了RA患者体内存在着T淋巴细胞亚群比例失衡的实验证据， 并不能由此就可清楚地解释RA的致病机制。由于T淋巴细胞在RA患者体内的作用是非常复杂的，因此，对T淋巴细胞在RA 患者外周血和关节液内的确切作用及其代谢动力学改变尚需做进一步研究。
类风湿性关节炎患者2H4+T淋巴细胞亚群的流式细胞仪分析 中国医学科学院基金资助
朱立平 中国医学科学院基础医学研究所单克隆抗体研究室，北京 100005
蒋 明 北京协和医院内科，北京 100730
, 百拇医药
作者简介:吴福国，男，34岁，副教授，硕士研究生，主要从事风湿病的分子发病机制和诊断研究；
朱立平，男，60岁，研究员，博士生导师，主要从事细胞和分子免疫学研究, 特别是淋巴细胞分化抗原的分子生物学研究
4 参考文献
1 Morimoto C,Romain P L,Fox D A et al. Abnormalities in CD4+ T lymphocyte subsets in inflammatory rheumatic diseases. Am J Med,1988;84:817
2 Zhu L P,Chen D,Zhang S Z et al.Observation of substance P on human T and B lymphocyte proliferation. Immunological Communications,1984;13(5):457
, 百拇医药
3 房 芳,朱立平,蒋 明 et al.雷公藤总甙抑制T细胞转化的流式细胞分析.中华微生物学和免疫学杂志,1989;9(2):95
4 Nakao H,Eguchi K,Kawakami A et al. Phenotypic characterization of lymphocytes infiltrating synovial tissue from patients with rheumatoid arthritis: Analysis of lymphocytes isolated from minced synovial tissue by dual immunofluorescent staining. J Rheumatol，1990;17:142
5 Ichikawa Y,Shimizu H,Yoshida M et al. Lymphocyte subsets and T cells at various stages of activation in joint fluid from rheumatoid arthritis patients. Japanese J Rheumatol,1991;3(2):95
, 百拇医药
6 王国春,吴东海.雷公藤对类风湿性关节炎患者淋巴细胞亚群的影响.中华内科杂志,1994;33(1):41
7 Russell A S. Activated lymphocytes in the peripheral blood of patients with rheumatoid arthritis. J Rheumatol,1990;17:589
8 Cush J J,Lipsky P E. Phenotypic analysis of synovial tissue and peripheral blood lymphocytes isolated from patients with rheumatoid arthritis.Arthritis Rheum,1988;31:1230
〔收稿1997-03-28 修回1998-05-20〕, http://www.100md.com
单位：山东济宁医学院生化教研室，济宁 272113
关键词：类风湿性关节炎；T淋巴细胞亚群；免疫球蛋白；流式细胞仪
中国免疫学杂志990316 中国图书分类号 R593.2 R392
摘 要 目的：了解类风湿性关节炎患者免疫功能的异常变化，探讨其发病机制。方法：使用间接免疫荧光和直接免疫荧光方法对11例RA患者和12例健康人的外周血T淋巴细胞进行了研究。结果：RA 患者与对照组比较CD3+T细胞和CD4+T细胞无明显变化，CD8+T细胞明显减少，CD4+/CD8+比值增加。CD4+2H4+T细胞在CD4+T细胞中的比例减少，而CD4+4B4+T细胞的比例增加。 进一步研究发现，RA患者活化的CD25+T淋巴细胞比率增加。此外，血清学研究发现，RA患者IgG 含量显著增加，IgM和IgA含量与正常组比较无明显差别。结论：RA患者存在细胞免疫和体液免疫的功能紊乱，而大量自身免疫球蛋白的产生可能是辅助性T淋巴细胞升高，抑制性T淋巴细胞减少以及活化T淋巴细胞增加的结果，因此，T淋巴细胞亚群比例失衡在RA的发病中可能起着更为重要的作用。
, 百拇医药
Analysis of 2H4+T lymphocyte subsets in the peripheral blood of patients with rheumatoid arthritis
WU Fu-Guo，QIU Cui-E，HAN Xiao-Lin et al.
Department of Biochemistry,Jining Medical College, Shandong 272113
Abstract Objective:To explore the phenotypic characteristics of T lymphocyte subsets in the peripheral blood(PB) of patients with rheumatoid arthritis( RA).Methods:T lymphocyte subsets in 11 patients with RA and 12 healthy controls were analyzed by using single and 2 color fluorescence flow cytometry.Results:(1)RA patients were similar to healthy controls in the percentages of CD3+ cells and CD4+ cells in PB, but the percentage of CD8+ cells was significantly lower(P<0.05) and the ratio of CD4+ cells to CD8+ cells was significantly higher(P<0.01) in the patients with RA. In addition, the percentage of CD25+ cells was also increased compared to that in PB from healthy controls.(2)The percentage of CD4+2H4+cells among CD4+ cells in PB from patients with RA was markedly decreased (P<0.01),but the percentage of CD4+4B4+ cells was significantly increased(P<0.01) compared with that in PB from healthy controls. (3) Serum IgG concentrations in RA patients were significantly higher than that in healthy controls. However, there were no significantly differences between RA patients and healthy controls in the serum IgM and IgA.Conclusion:The combination of the increment in helper T cells, the reduction in suppressor T cells, and the increment in activated T cells may lead to excessive production of autoantibodies in RA patients.
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Key words Rheumatoid arthritis T lymphocyte subsets Immunoglobulin Flow cytometry
类风湿性关节炎(Rheumatoid Arthritis，RA)是一种病因复杂的自身免疫性疾病，其发病机制至今还不清楚。许多学者认为T淋巴细胞亚群比率异常在RA 发病机制中可能具有重要作用[1]。但这种异常在类风湿性关节炎患者中尚无一定的规律。鉴于此， 本文利用流式细胞仪技术对11例RA患者外周血淋巴细胞亚群进行了检测，并观察了其血清免疫球蛋白含量的变化，以寻找其免疫功能紊乱的证据，揭示细胞和体液免疫功能异常在RA发病机制中的意义。
1 材料与方法
1.1 研究对象 12例正常对照为本室自愿献血者，男5例，女7例，年龄19～50岁，平均34岁。11 例类风湿性关节炎患者为北京协和医院内科临床免疫及风湿病学组门诊病人，均符合美国风湿病学会1982年RA的分类标准，其中男3例，女8例，年龄24～72岁，平均46岁。均处于活动期。检测前均未服用对免疫功能有影响的药物如糖皮质激素等。
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1.2 主要试剂 CD3，CD4和CD8单克隆抗体试剂由中国医科院基础所单抗室提供。抗Tac，MsIgG1-RD1，MsIgG-FITC，T4-FITC/2H4-RD1单克隆抗体为美国Coulter公司产品。FITC标记兔抗鼠 IgG为卫生部北京生物制品研究所产品。免疫球蛋白IgG、IgM和IgA 单向扩散定量检测板和标准曲线是由北京科兴实验试剂开发公司提供。
1.3 外周血单个核细胞(PBMNC)的制备 从肘静脉取10 ml血，肝素抗凝，与等量磷酸盐缓冲液(PBS)混匀后，置含10 ml 淋巴细胞分离液(上海试剂二厂产品)的离心管中，离心后取界面层细胞，洗涤3次，计数细胞,调整细胞浓度为1×106ml-1[2]。
1.4 细胞表面分化抗原间接免疫荧光染色与直接免疫荧光染色 取1×106PBMNC,分别与各种稀释的单抗100 μl混匀,置冰浴30 min, 冷洗涤液洗3次。若为直接免疫荧光染色试剂则直接加0.5 ml PBS上机。 若为非直接免疫荧光染色试剂则需要加1:30稀释的FITC标记兔抗鼠IgG 100 μl,冰浴30 min,洗3次,最后加0.5 ml PBS 悬起细胞上机。同时，根据抗体的来源，分别设 SP2/0 细胞腹水对照管、PBS对照管和 MsIgG1-RD1/MsIgG1-FITC对照管[3]。
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1.5 流式细胞仪分析 用Coulter公司生产的EPICSⅤ型流式细胞仪分析。每个样品均检测10 000个细胞，用仪器内装的MDADSⅡ计算机分析。
2 结果
2.1 类风湿性关节炎患者T淋巴细胞亚群分析 RA患者与对照组比较，CD3+和CD4+T淋巴细胞无明显变化。而 CD8+T细胞明显减少，CD4+/CD8+比值明显升高。CD25+细胞亦明显升高(见表1)。
表1 RA患者与正常人T淋巴细胞亚群检测结果比较(%)
Tab.1 Cell surface characteristics of T lymphocytes in blood from patients with RA and healthy controls(%)
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n
CD3
CD4
CD8
CD4/CD8
Tac(CD25)
Normal
12
62.79±6.35
46.23±6.12
25.81±6.41
1.79±0.20
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3.49±1.38
RA
11
60.69±7.22
48.16±7.25
20.50±7.11
2.34±0.23
8.91±1.74
P
>0.05
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<0.05
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2.2 类风湿性关节炎患者CD4+T淋巴细胞亚群分析 上述结果提示，RA患者CD4+T细胞与对照组比较无明显变化，为进一步观察组成 CD4+T细胞的两个亚群之间是否有区别，用抗2H4单抗又分别对10例正常人和10例RA 患者外周血淋巴细胞进行了测定。结果表明，RA患者CD4+2H4+T细胞和CD4+4B4+T细胞在CD4+T 细胞中所占的比例与正常对照组比较均有显著性差异，而且两者的比值与正常对照组比较也有非常显著的差异(见表2)。表2 RA患者与正常对照CD4+T淋巴细胞亚群检测结果比较
Tab.2 Cell surface characteristics of CD4+ cell subsets in peripheral blood from patients with RA and healthy controls
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n
CD4+2H4+T cells
CD4+4B4+T cells
CD4+4B4+T cells
CD4+T cells(%)
CD4+T cells(%)
CD4+2H4+T cells(ratio)
Normal
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42.41±8.62
57.59±8.73
1.34±0.76
RA
10
22.87±9.21
77.13±8.87
3.37±0.65
P
<0.01
<0.01
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2.3 类风湿性关节炎患者血清免疫球蛋白含量比较 RA患者与正常对照组血清IgG、IgM、IgA含量测定结果见表3。两组比较IgG 存在显著性差异，而IgM、IgA差异无显著性。表3 RA患者与正常对照组血清免疫球蛋白含量比较(g/L)
Tab.3 Concentrations of serum IgG、IgM and IgA in patients with RA and healthy controls(g/L)
n
IgG
IgM
IgA
Normal
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12
12.6±3.4
1.4±0.3
2.2±0.3
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1.7±0.8
2.6±1.1
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3 讨论
RA在我国是一种比较常见的风湿性疾病。尽管国内外对其发病机制进行了大量的研究，但目前仍不十分清楚。已有的研究表明，RA是一种病因复杂的自身免疫性疾病，其免疫学方面的改变各家报道不一。Nakao等报道，RA患者外周血CD4+T细胞和CD8+T细胞与正常人比较均没有明显变化[4]。本文结果表明，RA患者外周血CD4+T 细胞与正常人比较无明显变化，而CD8+T细胞明显减少，活化T细胞明显升高。 这一结果与前者不完全相同， 但与Ichikawa等的结果一致[5-7]。CD4+T细胞的比率正常是否也说明CD4+2H4+和CD4+ 4B4+T细胞也正常呢？为此，本文做了进一步分析，发现CD4+2H4+T细胞( 抑制性诱导细胞 ) 在CD4+细胞中所占的比例明显减少，而CD4+4B4+T细胞(辅助性T细胞)明显增加，可见这两种亚群的组成与正常人明显不同，此结果与Nakao等的报道一致[4，5，8]。这说明RA患者由于CD4+2H4+T细胞减少，势必引起CD8+CD11b+T细胞(抑制性效应细胞)减少，抑制功能相对不足。相反，辅助T细胞(CD4+4B4+T细胞)的增加以及由抗原活化的T细胞(CD25+T细胞) 的增加，使免疫功能亢进，引发细胞介导的免疫反应。其结果可使休止B细胞分化、 增殖为抗体形成细胞，产生大量免疫球蛋白。本文的测定结果血清IgG含量明显增高， 也证实了我们的推断。由此可见， RA患者体内不仅存在体液免疫的功能紊乱，而且细胞免疫中各种T淋巴细胞亚群的比例失衡在RA的发病中可能起着更为重要的作用。至于T 淋巴细胞亚群的比例失衡是RA发病的原因，还是RA发病的结果，还需要进一步证实。
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有趣的是，在检测中发现，CD25+T细胞百分率的高低与病人的疼痛关节数和压痛指数有关。CD25+细胞百分率愈高的RA患者其病人的疼痛关节数愈多,压痛指数也愈高。提示RA患者外周血淋巴细胞亚群的变化可能部分地与临床表现和病情活动有关。
本文的工作只是证实了RA患者体内存在着T淋巴细胞亚群比例失衡的实验证据， 并不能由此就可清楚地解释RA的致病机制。由于T淋巴细胞在RA患者体内的作用是非常复杂的，因此，对T淋巴细胞在RA 患者外周血和关节液内的确切作用及其代谢动力学改变尚需做进一步研究。
类风湿性关节炎患者2H4+T淋巴细胞亚群的流式细胞仪分析 中国医学科学院基金资助
朱立平 中国医学科学院基础医学研究所单克隆抗体研究室，北京 100005
蒋 明 北京协和医院内科，北京 100730
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作者简介:吴福国，男，34岁，副教授，硕士研究生，主要从事风湿病的分子发病机制和诊断研究；
朱立平，男，60岁，研究员，博士生导师，主要从事细胞和分子免疫学研究, 特别是淋巴细胞分化抗原的分子生物学研究
4 参考文献
1 Morimoto C,Romain P L,Fox D A et al. Abnormalities in CD4+ T lymphocyte subsets in inflammatory rheumatic diseases. Am J Med,1988;84:817
2 Zhu L P,Chen D,Zhang S Z et al.Observation of substance P on human T and B lymphocyte proliferation. Immunological Communications,1984;13(5):457
, 百拇医药
3 房 芳,朱立平,蒋 明 et al.雷公藤总甙抑制T细胞转化的流式细胞分析.中华微生物学和免疫学杂志,1989;9(2):95
4 Nakao H,Eguchi K,Kawakami A et al. Phenotypic characterization of lymphocytes infiltrating synovial tissue from patients with rheumatoid arthritis: Analysis of lymphocytes isolated from minced synovial tissue by dual immunofluorescent staining. J Rheumatol，1990;17:142
5 Ichikawa Y,Shimizu H,Yoshida M et al. Lymphocyte subsets and T cells at various stages of activation in joint fluid from rheumatoid arthritis patients. Japanese J Rheumatol,1991;3(2):95
, 百拇医药
6 王国春,吴东海.雷公藤对类风湿性关节炎患者淋巴细胞亚群的影响.中华内科杂志,1994;33(1):41
7 Russell A S. Activated lymphocytes in the peripheral blood of patients with rheumatoid arthritis. J Rheumatol,1990;17:589
8 Cush J J,Lipsky P E. Phenotypic analysis of synovial tissue and peripheral blood lymphocytes isolated from patients with rheumatoid arthritis.Arthritis Rheum,1988;31:1230
〔收稿1997-03-28 修回1998-05-20〕, http://www.100md.com