抗类风湿性关节炎54 kD和36 kD自身抗体在类风湿性关节炎诊断中的意义
作者：周嘉陵 钟丽民 许 荣 朱 琦 雷 鸣
单位：上海市光华中西医结合医院，上海200052
关键词：自身抗体；类风湿性关节炎；免疫印迹法
中国免疫学杂志990420 中国图书分类号 R593.22
摘 要 目的：研究类风湿性关节炎(RA)中抗类风湿性关节炎54 kD和36 kD自身抗体(抗RA54和抗RA36)的情况。方法：应用免疫印迹技术(IBT)，在过筛和检测盐水可提取核抗原(ENA)的自身抗体谱过程中，发现不仅可检测到抗RA54，还可检测到抗RA36自身抗体，并对169例各种不同风湿性疾病患者测定ENA。结果：抗RA54和抗RA36自身抗体均仅见于类风湿性关节炎(RA)组(n=80)，阳性率分别为15.00%和6.25%。结论：抗RA54和抗RA36对RA的诊断有高度特异性，P<0.005和P<0.01。
, http://www.100md.com
A study of anti-RA54 and anti-RA36 autoantibodies in the diagnosis of rheumatoid arthritis
ZHOU Jia-Ling,ZHONG Li-Min,XU Rong et al. Shanghai Guanghua Hospital,Shanghai 200052
Abstract Objective:To study anti-RA54 and anti-RA36 autoantibodies in rheumatoid arthritis(RA).Methods:In the process of screening and detecting profiles of autoantibodies against lineage of extraetable nuclear antigen(ENA).Observed that not only anti-RA54 but also anti-RA36 autoantibodies could be detected by immunoblotting(IBT).The samples from 169 patients of variant rheumatism were detected by IBT.Results:Both anti-RA54 and anti-RA36 autoantibodies were found only in RA patients. The positive rate for anti-RA54 and anti-RA36 in RA group (n=80) were 15.00% and 6.25% respectively.Conclusion:The two autoantibodies appear to be highly specific for RA (P<0.005 and P<0.01).
, 百拇医药
Key words Autoantibody Rheumatoid arthritis Immunoblotting
近年来在类风湿性关节炎(RA)的自身抗体研究中， 许以华和周志杰等分别报道了抗类风湿关节炎54 kD(抗RA54)和36 kD(抗RA36)自身抗体对RA 的诊断有一定的特异性，由于在抗原来源与抽提方法上存在差别， 文献中尚无同时过筛和检测这两种自身抗体的报道[1，2]。本文在应用免疫印迹技术(IBT)过筛和检测盐水可提取核抗原(ENA)的自身抗体谱过程中，同时发现抗 RA54 和抗RA36自身抗体，因而对这两种抗体在RA诊断上的意义作了进一步的研究[3]。
1 对象与方法
1.1 受检对象 各种风湿性疾病169例，由我院类风湿性关节炎专科按国际公认标准诊断，其中包括RA 80例、系统性红斑狼疮(SLE)25例、混合性结缔组织病(MCTD)9例、干燥综合征(SS)15例、强直性脊柱炎(AS)20例、骨关节炎(OA)20例，对照组为30
, http://www.100md.com
作者简介：周嘉陵，女，56岁，副主任医师，主要从事类风湿性关节炎和强直性脊柱炎的临床研究
例均做过IBT、RF、X光检测，并在病史中无自身免疫性疾病及关节炎症状的健康人。
1.2 检测方法 患者血清均随机收集，保存于-20℃。ENA自身抗体谱的检测采用华南理工大学万学生物技术公司提供的ENA试验盒，该试验盒以兔胸腺丙酮粉的盐水提取物为抗原，由于在抗原抽提、蛋白质分离及电转移印迹等技术上已作了进一步的改进， 因此不仅可检测抗SM、抗U1RNP、抗SS-A、抗SS-B、抗核糖体核糖核蛋白(抗r-RNP)、抗Scl-70及抗JO-1 等自身抗体，还可识别并检测抗RA54、抗RA36、抗DE自身抗体。
按检测操作说明进行：(1)待测血清与印迹在硝酸纤维膜上的蛋白质抗原反应；(2)辣根过氧化物酶标记的羊抗人IgG抗体识别结合在抗原上的IgG 并与之反应；(3)底物显色使硝酸纤维膜上结合自身抗体的部位显色区带。
, 百拇医药
1.3 阳性参考血清 抗RA54、抗RA36和抗DE阳性参考血清取自RA和MCTD患者，由许以华医师提供[4]。
2 结果
在各种风湿病中应用免疫印迹法测定ENA自身抗体，不仅可检测到抗RA54抗体，还可测得抗RA36抗体，这二种抗体仅见于RA组，阳性率分别为15.00%(12/80)和6.25%(5/80)，对RA的诊断有高度特异性，χ2分别为16.44和5.29，P<0.005和P<0.01，见表1。具有上述两种抗体中的任何一种的阳性率为18.75%(15/80)。
表1 各种风湿病中ENA自身抗体检测情况
Tab.1 The positivities for ENA autoantibodies were detected by immunoblotting in patients with various kinds of rheumatic disease Group
, 百拇医药
No.of patients
Anti 52 kD
Anti RA
Anti U1RNP
Anti SM
Anti r-RNP
Anti SS
A and B
54 kD
36 kD
R A
80
, http://www.100md.com
13
12
5
0
0
0
1
SLE
25
6
0
0
4
8
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2
1
MCTD
9
2
0
0
8
0
0
0
S S
15
2
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0
0
0
0
0
7
O A
20
1
0
0
0
0
0
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0
A S
20
1
0
0
0
0
0
0
Normal control
30
2
0
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0
0
0
0
0
3 讨论
近年来应用IBT能检测自身抗体谱，主要包括抗SM、抗U1RNP、抗SS-A、抗SS-B、抗r-RNP、抗Scl-70及抗JO-1这7种特异性自身抗体，有助于提高对SLE、MCTD、SS、系统性硬皮病(PSS)及多发性肌炎或皮肌炎(PM/DM) 等疾病的诊断与鉴别诊断，本文的结果表明在169例风湿病患者中抗RA54和抗RA36自身抗体仅见于RA组，阳性率为15.00%和6.25%，对RA的诊断具有高度特异性(P<0.01)， 因此提高试剂盒质量后，应用IBT测定的ENA抗体谱中增加2种自身抗体，有助于RA 的诊断和鉴别诊断。
, 百拇医药
本文RA患者中虽然只有2例同时存在抗RA54和抗RA36抗体，但该2例发病过程相似，均儿童时起病，并从下肢开始逐步发展到上肢，多关节累及，均诊断为幼年性RA(多关节型)，到成人时，均有明显关节破坏，因此进一步研究抗 RA54和抗RA36阳性患者的临床特点有助于RA中不同临床亚型的研究。
本文9例MCTD患者中有1例抗DE自身抗体阳性，由于试剂盒质量提高后，该患者血清与抗DE阳性参考血清识别的不仅是ENA中13.4 kD和11.5 kD 蛋白多肽，而是一组蛋白质，其分子量分别为28.5、20.0、18.5、13.4和11.5 kD，在硝酸纤维膜上形成一种显色区带分布较为特殊的类型，非常容易识别，因此将该抗体命名为抗DE抗体，因不能反映该抗体的作用和抗原分子特征，征求许以华医师的意见， 认为该抗体首先从姓刘的MCTD患者血清中发现，按国际自身抗体命名原则， 将该抗体命名为抗Liu抗体更为妥当。
4 参考文献
, http://www.100md.com
[1] 许以华，周嘉陵，顾越英 et al.抗RA54 kD自身抗体的识别及其临床意义.标记免疫分析与临床，1995;2(4):197
[2] 周志杰,蒋 明,宋琴芳 et al.抗类风湿关节炎36 kD和33 kD 抗体对类风湿关节炎诊断意义的研究.中华内科杂志，1994;33(4):251
[3] 许以华,顾越英,叶 萍 et al.可提取核抗原多肽抗体谱的测定方法及临床意义.中华医学杂志,1992;72(9):541
[4] 许以华,顾越英,杨虎天 et al.抗DE多肽抗体在混合性结缔组织病上的意义.中华内科杂志，1995;33(8):525 〔收稿1998-04-12 修回1998-07-16〕, 百拇医药
单位：上海市光华中西医结合医院，上海200052
关键词：自身抗体；类风湿性关节炎；免疫印迹法
中国免疫学杂志990420 中国图书分类号 R593.22
摘 要 目的：研究类风湿性关节炎(RA)中抗类风湿性关节炎54 kD和36 kD自身抗体(抗RA54和抗RA36)的情况。方法：应用免疫印迹技术(IBT)，在过筛和检测盐水可提取核抗原(ENA)的自身抗体谱过程中，发现不仅可检测到抗RA54，还可检测到抗RA36自身抗体，并对169例各种不同风湿性疾病患者测定ENA。结果：抗RA54和抗RA36自身抗体均仅见于类风湿性关节炎(RA)组(n=80)，阳性率分别为15.00%和6.25%。结论：抗RA54和抗RA36对RA的诊断有高度特异性，P<0.005和P<0.01。
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A study of anti-RA54 and anti-RA36 autoantibodies in the diagnosis of rheumatoid arthritis
ZHOU Jia-Ling,ZHONG Li-Min,XU Rong et al. Shanghai Guanghua Hospital,Shanghai 200052
Abstract Objective:To study anti-RA54 and anti-RA36 autoantibodies in rheumatoid arthritis(RA).Methods:In the process of screening and detecting profiles of autoantibodies against lineage of extraetable nuclear antigen(ENA).Observed that not only anti-RA54 but also anti-RA36 autoantibodies could be detected by immunoblotting(IBT).The samples from 169 patients of variant rheumatism were detected by IBT.Results:Both anti-RA54 and anti-RA36 autoantibodies were found only in RA patients. The positive rate for anti-RA54 and anti-RA36 in RA group (n=80) were 15.00% and 6.25% respectively.Conclusion:The two autoantibodies appear to be highly specific for RA (P<0.005 and P<0.01).
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Key words Autoantibody Rheumatoid arthritis Immunoblotting
近年来在类风湿性关节炎(RA)的自身抗体研究中， 许以华和周志杰等分别报道了抗类风湿关节炎54 kD(抗RA54)和36 kD(抗RA36)自身抗体对RA 的诊断有一定的特异性，由于在抗原来源与抽提方法上存在差别， 文献中尚无同时过筛和检测这两种自身抗体的报道[1，2]。本文在应用免疫印迹技术(IBT)过筛和检测盐水可提取核抗原(ENA)的自身抗体谱过程中，同时发现抗 RA54 和抗RA36自身抗体，因而对这两种抗体在RA诊断上的意义作了进一步的研究[3]。
1 对象与方法
1.1 受检对象 各种风湿性疾病169例，由我院类风湿性关节炎专科按国际公认标准诊断，其中包括RA 80例、系统性红斑狼疮(SLE)25例、混合性结缔组织病(MCTD)9例、干燥综合征(SS)15例、强直性脊柱炎(AS)20例、骨关节炎(OA)20例，对照组为30
, http://www.100md.com
作者简介：周嘉陵，女，56岁，副主任医师，主要从事类风湿性关节炎和强直性脊柱炎的临床研究
例均做过IBT、RF、X光检测，并在病史中无自身免疫性疾病及关节炎症状的健康人。
1.2 检测方法 患者血清均随机收集，保存于-20℃。ENA自身抗体谱的检测采用华南理工大学万学生物技术公司提供的ENA试验盒，该试验盒以兔胸腺丙酮粉的盐水提取物为抗原，由于在抗原抽提、蛋白质分离及电转移印迹等技术上已作了进一步的改进， 因此不仅可检测抗SM、抗U1RNP、抗SS-A、抗SS-B、抗核糖体核糖核蛋白(抗r-RNP)、抗Scl-70及抗JO-1 等自身抗体，还可识别并检测抗RA54、抗RA36、抗DE自身抗体。
按检测操作说明进行：(1)待测血清与印迹在硝酸纤维膜上的蛋白质抗原反应；(2)辣根过氧化物酶标记的羊抗人IgG抗体识别结合在抗原上的IgG 并与之反应；(3)底物显色使硝酸纤维膜上结合自身抗体的部位显色区带。
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1.3 阳性参考血清 抗RA54、抗RA36和抗DE阳性参考血清取自RA和MCTD患者，由许以华医师提供[4]。
2 结果
在各种风湿病中应用免疫印迹法测定ENA自身抗体，不仅可检测到抗RA54抗体，还可测得抗RA36抗体，这二种抗体仅见于RA组，阳性率分别为15.00%(12/80)和6.25%(5/80)，对RA的诊断有高度特异性，χ2分别为16.44和5.29，P<0.005和P<0.01，见表1。具有上述两种抗体中的任何一种的阳性率为18.75%(15/80)。
表1 各种风湿病中ENA自身抗体检测情况
Tab.1 The positivities for ENA autoantibodies were detected by immunoblotting in patients with various kinds of rheumatic disease Group
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No.of patients
Anti 52 kD
Anti RA
Anti U1RNP
Anti SM
Anti r-RNP
Anti SS
A and B
54 kD
36 kD
R A
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SLE
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MCTD
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3 讨论
近年来应用IBT能检测自身抗体谱，主要包括抗SM、抗U1RNP、抗SS-A、抗SS-B、抗r-RNP、抗Scl-70及抗JO-1这7种特异性自身抗体，有助于提高对SLE、MCTD、SS、系统性硬皮病(PSS)及多发性肌炎或皮肌炎(PM/DM) 等疾病的诊断与鉴别诊断，本文的结果表明在169例风湿病患者中抗RA54和抗RA36自身抗体仅见于RA组，阳性率为15.00%和6.25%，对RA的诊断具有高度特异性(P<0.01)， 因此提高试剂盒质量后，应用IBT测定的ENA抗体谱中增加2种自身抗体，有助于RA 的诊断和鉴别诊断。
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本文RA患者中虽然只有2例同时存在抗RA54和抗RA36抗体，但该2例发病过程相似，均儿童时起病，并从下肢开始逐步发展到上肢，多关节累及，均诊断为幼年性RA(多关节型)，到成人时，均有明显关节破坏，因此进一步研究抗 RA54和抗RA36阳性患者的临床特点有助于RA中不同临床亚型的研究。
本文9例MCTD患者中有1例抗DE自身抗体阳性，由于试剂盒质量提高后，该患者血清与抗DE阳性参考血清识别的不仅是ENA中13.4 kD和11.5 kD 蛋白多肽，而是一组蛋白质，其分子量分别为28.5、20.0、18.5、13.4和11.5 kD，在硝酸纤维膜上形成一种显色区带分布较为特殊的类型，非常容易识别，因此将该抗体命名为抗DE抗体，因不能反映该抗体的作用和抗原分子特征，征求许以华医师的意见， 认为该抗体首先从姓刘的MCTD患者血清中发现，按国际自身抗体命名原则， 将该抗体命名为抗Liu抗体更为妥当。
4 参考文献
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[1] 许以华，周嘉陵，顾越英 et al.抗RA54 kD自身抗体的识别及其临床意义.标记免疫分析与临床，1995;2(4):197
[2] 周志杰,蒋 明,宋琴芳 et al.抗类风湿关节炎36 kD和33 kD 抗体对类风湿关节炎诊断意义的研究.中华内科杂志，1994;33(4):251
[3] 许以华,顾越英,叶 萍 et al.可提取核抗原多肽抗体谱的测定方法及临床意义.中华医学杂志,1992;72(9):541
[4] 许以华,顾越英,杨虎天 et al.抗DE多肽抗体在混合性结缔组织病上的意义.中华内科杂志，1995;33(8):525 〔收稿1998-04-12 修回1998-07-16〕, 百拇医药