6种可提取性核抗原(ENA)的制备及检测方法的建立
作者：许华林 张敏 高敏
单位：许华林 张 敏 高 敏 (铁路总医院免疫室，北京100038)
关键词：
中国免疫学杂志/990510 近20年来，陆续发现对细胞核的不同成分所产生的相应的抗核抗体20余种，其中大部分核抗原可溶于磷酸盐缓冲液中，故称之为可提取性核抗原(Extractable nuclear antigen,ENA)，其抗体称之为抗ENA抗体，而这些抗体的测定为结缔组织病的临床诊断提供了有利的证据，我们参照美国疾病控制中心(Centers for disease control ATLANTA,GEORGIA)所提供的方法，从牛胸腺丙酮粉中制备出含有6种组分的可提取性核抗原，建立了一次能检测抗RNP、抗Sm、抗SSA、抗SSB、抗Jo-1及抗Scl-70抗体的方法，现报道如下。
中国图书分类号 R397.11
, http://www.100md.com
1 材料与方法
1.1 材料 小牛胸腺(购于天津生化厂)，组织捣碎机、磁力搅拌器、低温常速离心机、布氏漏斗、抽滤器、乳钵等。
1.2 试剂 冷生理盐水、冷丙酮、聚乙二醇(PEG 6000)、0.15 mol/L PBS缓冲液(pH 7.2)。
1.3 方法
1.3.1 牛胸腺丙酮粉的制备 小牛胸腺称重后，冷生理盐水漂洗数次，以去掉血水，去除筋膜及结缔组织，切成小块，置于冷丙酮中浸泡20 min，加入的冷丙酮量至少为牛胸腺量的20倍，中速匀浆2 min(转30 s,停30 s)，在布氏漏斗上加滤纸，并用抽滤器抽滤。在抽滤过程中，用少量丙酮不时滴加在即将干燥的胸腺提取物上，将干燥的牛胸腺丙酮粉从滤纸上取下，用乳钵将其研磨成粉，过筛(100目)，在-40℃的低温冰箱中可保存1～2年。
, 百拇医药
1.3.2 牛胸腺丙酮粉制备ENA 取5 g牛胸腺丙酮粉，加入pH 7.2、0.15 mol/L PBS 50 ml,置4℃冰箱中慢速磁力搅拌4～6 h，呈糊状后，1 000 g，离心1 h，取上清，再重复离心取上清一次，将上清液放入透析袋中，用聚乙二醇包埋，浓缩2倍左右，测定蛋白含量为30 mg/ml左右。
2 结果与讨论
抗RNP、Sm、SSA、SSB、Jo-1、Scl-70抗体的检测首先用阳性标准血清作对流免疫电泳，以鉴定所提取的ENA抗原是否有活性；出现沉淀线(此时证明所提的ENA有抗原活性)的再做免疫双扩散，以进一步鉴定抗体的组分和滴度。
我们用上述方法提取的ENA作为抗原，经分别用阳性标准血清(由美国南加州大学医学院病理实验室提供)鉴定，均相应出现清晰的沉淀线，证明由牛胸腺丙酮粉中提取的ENA，含有RNP、Sm、SSA、SSB、Jo-1、Scl-70这6种成分。
, 百拇医药
目前，国内许多实验室，大多采用从动物脏器中提取ENA抗原，分别用免疫双扩散来测定其在血清中的抗体，而从牛胸腺丙酮粉中提取ENA[1-3]，与Sharp法相比[4]，具有操作简便、快速、价廉、无需特殊仪器设备，易于保存，且一次可提取出6种成分，基本满足了风湿病诊断的要求，为保证ENA的质量，在提取过程中，应注意以下内容：为不使ENA失活，在提取过程中，应尽量在4℃下操作；在匀浆时，应避免转速过高，时间过长而使抗原的生物活性下降；适当延长冷丙酮浸泡牛胸腺的时间以及在抽滤过程中，用少量丙酮滴加在即将干燥的胸腺提取物上，可达到彻底去脂的作用。
在与其他ENA提取方法进行比较后，我们认为从牛胸腺丙酮粉中提取的ENA，不受任何条件的限制，基层单位也可开展，是较为满意的方法之一。
作者简介：许华林，女，43岁，主管技师，从事风湿免疫方面的研究；
张 敏，女，34岁，技师，从事风湿免疫方面的研究
, 百拇医药
3 参考文献
[1] 张晓慧，郑德明，杨绍娟 et al. ENA抗体的检测在诊断结缔组织疾病的价值.上海医学检验杂志，1992；7(1)：22
[2] 董 怡，陈培珍，史艳萍 et al. 牛胸腺提取液中的SSA抗原及其临床应用.中国免疫学杂志，1989；5(5)：282
[3] 唐福林，陈培珍，杨桂珍 et al. ENA的提取及RNP抗体、Sm抗体的测定. 中华医学检验杂志，1983；6(3)：169
[4] Sharp G C.Mixed connective tissue diseasean apparently distinct rheum-atic antibody to an extractable nuclear antigen (ENA). Amer J Med,1972;52:148
〔收稿1997-09-22 修回1998-03-23〕, 百拇医药
单位：许华林 张 敏 高 敏 (铁路总医院免疫室，北京100038)
关键词：
中国免疫学杂志/990510 近20年来，陆续发现对细胞核的不同成分所产生的相应的抗核抗体20余种，其中大部分核抗原可溶于磷酸盐缓冲液中，故称之为可提取性核抗原(Extractable nuclear antigen,ENA)，其抗体称之为抗ENA抗体，而这些抗体的测定为结缔组织病的临床诊断提供了有利的证据，我们参照美国疾病控制中心(Centers for disease control ATLANTA,GEORGIA)所提供的方法，从牛胸腺丙酮粉中制备出含有6种组分的可提取性核抗原，建立了一次能检测抗RNP、抗Sm、抗SSA、抗SSB、抗Jo-1及抗Scl-70抗体的方法，现报道如下。
中国图书分类号 R397.11
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1 材料与方法
1.1 材料 小牛胸腺(购于天津生化厂)，组织捣碎机、磁力搅拌器、低温常速离心机、布氏漏斗、抽滤器、乳钵等。
1.2 试剂 冷生理盐水、冷丙酮、聚乙二醇(PEG 6000)、0.15 mol/L PBS缓冲液(pH 7.2)。
1.3 方法
1.3.1 牛胸腺丙酮粉的制备 小牛胸腺称重后，冷生理盐水漂洗数次，以去掉血水，去除筋膜及结缔组织，切成小块，置于冷丙酮中浸泡20 min，加入的冷丙酮量至少为牛胸腺量的20倍，中速匀浆2 min(转30 s,停30 s)，在布氏漏斗上加滤纸，并用抽滤器抽滤。在抽滤过程中，用少量丙酮不时滴加在即将干燥的胸腺提取物上，将干燥的牛胸腺丙酮粉从滤纸上取下，用乳钵将其研磨成粉，过筛(100目)，在-40℃的低温冰箱中可保存1～2年。
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1.3.2 牛胸腺丙酮粉制备ENA 取5 g牛胸腺丙酮粉，加入pH 7.2、0.15 mol/L PBS 50 ml,置4℃冰箱中慢速磁力搅拌4～6 h，呈糊状后，1 000 g，离心1 h，取上清，再重复离心取上清一次，将上清液放入透析袋中，用聚乙二醇包埋，浓缩2倍左右，测定蛋白含量为30 mg/ml左右。
2 结果与讨论
抗RNP、Sm、SSA、SSB、Jo-1、Scl-70抗体的检测首先用阳性标准血清作对流免疫电泳，以鉴定所提取的ENA抗原是否有活性；出现沉淀线(此时证明所提的ENA有抗原活性)的再做免疫双扩散，以进一步鉴定抗体的组分和滴度。
我们用上述方法提取的ENA作为抗原，经分别用阳性标准血清(由美国南加州大学医学院病理实验室提供)鉴定，均相应出现清晰的沉淀线，证明由牛胸腺丙酮粉中提取的ENA，含有RNP、Sm、SSA、SSB、Jo-1、Scl-70这6种成分。
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目前，国内许多实验室，大多采用从动物脏器中提取ENA抗原，分别用免疫双扩散来测定其在血清中的抗体，而从牛胸腺丙酮粉中提取ENA[1-3]，与Sharp法相比[4]，具有操作简便、快速、价廉、无需特殊仪器设备，易于保存，且一次可提取出6种成分，基本满足了风湿病诊断的要求，为保证ENA的质量，在提取过程中，应注意以下内容：为不使ENA失活，在提取过程中，应尽量在4℃下操作；在匀浆时，应避免转速过高，时间过长而使抗原的生物活性下降；适当延长冷丙酮浸泡牛胸腺的时间以及在抽滤过程中，用少量丙酮滴加在即将干燥的胸腺提取物上，可达到彻底去脂的作用。
在与其他ENA提取方法进行比较后，我们认为从牛胸腺丙酮粉中提取的ENA，不受任何条件的限制，基层单位也可开展，是较为满意的方法之一。
作者简介：许华林，女，43岁，主管技师，从事风湿免疫方面的研究；
张 敏，女，34岁，技师，从事风湿免疫方面的研究
, 百拇医药
3 参考文献
[1] 张晓慧，郑德明，杨绍娟 et al. ENA抗体的检测在诊断结缔组织疾病的价值.上海医学检验杂志，1992；7(1)：22
[2] 董 怡，陈培珍，史艳萍 et al. 牛胸腺提取液中的SSA抗原及其临床应用.中国免疫学杂志，1989；5(5)：282
[3] 唐福林，陈培珍，杨桂珍 et al. ENA的提取及RNP抗体、Sm抗体的测定. 中华医学检验杂志，1983；6(3)：169
[4] Sharp G C.Mixed connective tissue diseasean apparently distinct rheum-atic antibody to an extractable nuclear antigen (ENA). Amer J Med,1972;52:148
〔收稿1997-09-22 修回1998-03-23〕, 百拇医药