中国南方汉族群体HLA-A2基因亚型分析
作者：田伟 李立新 郭实士 程文 陈继嵩 孙科柱
单位：田伟(湖南医科大学免 疫研究室，长沙 410078)；李立新(湖南医科大学免 疫研究室，长沙 410078)；郭实士(湖南医科大学免 疫研究室，长沙 410078)；程文(湖南医科大学免 疫研究室，长沙 410078)；陈继嵩(湖南医科大学免 疫研究室，长沙 410078)；孙科柱(湖南医科大学免 疫研究室，长沙 410078)
关键词：
中国免疫学杂志000409 中国图书分类号 R392.2
HLA-A2是一种主要HLA I类抗原，正式命名的等位基因(截止1997 年)达 22种[1]，本文初步调查了中国南方汉族群体HLA-A2等位基因亚型分布。
1 材料与方法
, http://www.100md.com
1.1 研究对象 40名随机选择、无血缘关系的健康汉族个体来自湖南长沙 地区。
1.2 主要试剂 HLA-A2亚型ARMS-PCR分型引物试剂盒(Dynal公司，批号 ：A625)及A*0201(阳性对照)，A*3101(阴性对照)标准DNA由美国Baylor大学罗亚敏博士 赠送。
1.3 外周血白细胞基因组DNA抽提 同文献[2]。
1.4 PCR扩增基因组DNA筛选HLA-A2阳性标本 PCR引物E21、E22、E31序列 同 文献[3]，由美国Genosys公司合成。用E21、E31引物作HLA-A座位类扩增，用E2 2、E31引物做HLA-A2特异性扩增。PCR循环68℃退火1 min，其余参数同文献[3] 。结果HLA-A2阳性样本两组扩增中均有830 bp的PCR产物条带；HLA-A2阴性标本 仅在 类扩增中有830 bp的PCR产物条带。每批筛选同时做HLA-A2阳性、阴性DNA对照，采用单盲 法重复筛选全部样本。
, 百拇医药
1.5 ARMS-PCR做HLA-2亚型分析 每份HLA-A2阳性样本同时做24管ARMS -PCR反应以测定所含亚型。具体操作参照试剂盒所附实验手册。所用ARMS-PCR分型试剂盒 可测定HLA-A*0201至A*0222等22种亚型。
1.6 PCR产物直接测序 采用Taq DyeDeoxy Terminator Cycle Sequencing Kit在PE 9600型基因扩增仪上完成测序反应，在ABI377型测序仪上自动测序。
1.7 统计学分析 等位基因频率计算按文献[4]。
2 结果
在全部40例样本中筛选出20例HLA-A2阳性样本，HLA-A2基因频率为0.293，检出A*0201 、A*0203、A*0206、A*0207和A*0211等5种HLA-A2基因亚型，其中A*0201占45%( 9/20)，各亚型频率详见表1。
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表1 中国南、北汉族群体HLA-A2基因亚型构成比较
Tab.1 Comparison of HLA-A2 allelic distribution
between southern and no rthern Chinese Han populations Allele
Southern Chinese Han
(40 samples)
Northern Chinese Han
(66 samples)[5]
n
, 百拇医药 af(%)
g f(%)
n
af(%)
gf(%)
0201
9
22.5
12.0 0
19
28.8
16.7
0203
, 百拇医药
3
7.5
3.82
2
3.0
1.5
0206
3
7.5
3.82
10
15.2
7.6
, http://www.100md.com 0207
4
10.0
5.13
7
10.6
5.3
0211
1
2.5
1.26
Note:n.number of individuals having the specific allele;af.antigen fre quency;gf.gene frequency
, http://www.100md.com
3 讨论
根据HLA-A2基因亚型DNA序列差异可分为A*0201和A*0205两大亚群，A*0201见于所有 被调查人群，A*0203、A*0206、A*0207、A*0210仅见于东方人：另一方面，A*02 05、A*0208、A*0209仅见于白人，A*0202、A*0214仅见于黑人，A*0211则可见于 东方人和南美印第安人[5-7]。我们的实验结果也支持这一观点，即HLA-A2等位 基因分布具有明显的种族和地域特征，还检出1例A*0211亚型并由测序证实，表 明 中国南方汉族群体存在该亚型。与白种人中A*0201占全部HLA-A2基因亚型90%以上这一情 形明显不同，中国南、北方汉族群体HLA-A2基因亚型种类较多，频率较为分散，但仍以A *0201为主，该两群体中A*0201，A*0206，A*0207三种亚型均占有一定比例，但频率 存在差别。
, http://www.100md.com
由于中国南方汉族HLA-A*基因亚型具有异质性，提示既往血清学分型HLA-A2相符的器 官 移植供受体在基因水平上存在一定比例的错配。此外，同时对40例样本进行HLA-A、B 血清学分型，其中1份HLA-A2阳性标本(编号L27)血清学分型不能明确指定，因而强调对HL A-A2作基因分型以筛选合适供体，对异基因骨髓移植有重大意义[8]。
作者简介：田伟,男,30岁，医学硕士，助理研究员，从事HLA研究
4 参考文献
1，Bodmer J G,Marsh S G E,Albert E et al. Nomenclature for f actors of the HLA system.Hum Immunol,1997;53:98
2，Kimura A,Sasazuli T. Eleventh international histocompatibility workshop re ference protocol for the HLA DNA typing technique. In:Tsuji K,Aizawa M,Sasazuki T eds. HLA 1991.New York: Oxford University Press,1992:397-419
, http://www.100md.com
3，Ishikawa Y,Tokunaga K,Kashiwase K et al.Suquence-based typing of HLA-A2 alleles using a primer with an extra base mismatch.Hum Immunol,1995;4 2:315
4，赵桐茂.HLA遗传学中的统计分析.见：赵桐茂主编.HLA分型原理及应用.上海：上 海科技出版社，1984：145-148
5，Gao X,Jakobsen I B,Serjeantson S W. Characterization of the HLA-A poly morphi sm by locusspecific polymerase chain reaction amplification and oligonucleotide hybridization. Hum Immunol,1994;41:267
, http://www.100md.com
6，Browning M,Krause P. Genetic diversity of HLA-A2: Evolutionary and functio nal significance. Immunol Tody,1996;17:165
7，Marsh S G E,Fauchet R M,Yang E K et al. Antigen society No.102: HLA -A2,-A68,-A68,-A69,-A9,-A23,-A24. In:Tsuji K, Aizawa M, Sasazuki T(eds). HLA 1991.New York:Oxford University,1992:2,285-289
8，Fleischhauer K,Kernan N A,O'Reilly R J et al.Bone marrow-allog r aft rejection by T lymphocytes recognizing a single amino acid difference in HLA -B44. N Eng J Med,1990;323:1818
[收稿1999-06-30 修回1999-10-08], 百拇医药
单位：田伟(湖南医科大学免 疫研究室，长沙 410078)；李立新(湖南医科大学免 疫研究室，长沙 410078)；郭实士(湖南医科大学免 疫研究室，长沙 410078)；程文(湖南医科大学免 疫研究室，长沙 410078)；陈继嵩(湖南医科大学免 疫研究室，长沙 410078)；孙科柱(湖南医科大学免 疫研究室，长沙 410078)
关键词：
中国免疫学杂志000409 中国图书分类号 R392.2
HLA-A2是一种主要HLA I类抗原，正式命名的等位基因(截止1997 年)达 22种[1]，本文初步调查了中国南方汉族群体HLA-A2等位基因亚型分布。
1 材料与方法
, http://www.100md.com
1.1 研究对象 40名随机选择、无血缘关系的健康汉族个体来自湖南长沙 地区。
1.2 主要试剂 HLA-A2亚型ARMS-PCR分型引物试剂盒(Dynal公司，批号 ：A625)及A*0201(阳性对照)，A*3101(阴性对照)标准DNA由美国Baylor大学罗亚敏博士 赠送。
1.3 外周血白细胞基因组DNA抽提 同文献[2]。
1.4 PCR扩增基因组DNA筛选HLA-A2阳性标本 PCR引物E21、E22、E31序列 同 文献[3]，由美国Genosys公司合成。用E21、E31引物作HLA-A座位类扩增，用E2 2、E31引物做HLA-A2特异性扩增。PCR循环68℃退火1 min，其余参数同文献[3] 。结果HLA-A2阳性样本两组扩增中均有830 bp的PCR产物条带；HLA-A2阴性标本 仅在 类扩增中有830 bp的PCR产物条带。每批筛选同时做HLA-A2阳性、阴性DNA对照，采用单盲 法重复筛选全部样本。
, 百拇医药
1.5 ARMS-PCR做HLA-2亚型分析 每份HLA-A2阳性样本同时做24管ARMS -PCR反应以测定所含亚型。具体操作参照试剂盒所附实验手册。所用ARMS-PCR分型试剂盒 可测定HLA-A*0201至A*0222等22种亚型。
1.6 PCR产物直接测序 采用Taq DyeDeoxy Terminator Cycle Sequencing Kit在PE 9600型基因扩增仪上完成测序反应，在ABI377型测序仪上自动测序。
1.7 统计学分析 等位基因频率计算按文献[4]。
2 结果
在全部40例样本中筛选出20例HLA-A2阳性样本，HLA-A2基因频率为0.293，检出A*0201 、A*0203、A*0206、A*0207和A*0211等5种HLA-A2基因亚型，其中A*0201占45%( 9/20)，各亚型频率详见表1。
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表1 中国南、北汉族群体HLA-A2基因亚型构成比较
Tab.1 Comparison of HLA-A2 allelic distribution
between southern and no rthern Chinese Han populations Allele
Southern Chinese Han
(40 samples)
Northern Chinese Han
(66 samples)[5]
n
, 百拇医药 af(%)
g f(%)
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0201
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22.5
12.0 0
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28.8
16.7
0203
, 百拇医药
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5.13
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10.6
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0211
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2.5
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Note:n.number of individuals having the specific allele;af.antigen fre quency;gf.gene frequency
, http://www.100md.com
3 讨论
根据HLA-A2基因亚型DNA序列差异可分为A*0201和A*0205两大亚群，A*0201见于所有 被调查人群，A*0203、A*0206、A*0207、A*0210仅见于东方人：另一方面，A*02 05、A*0208、A*0209仅见于白人，A*0202、A*0214仅见于黑人，A*0211则可见于 东方人和南美印第安人[5-7]。我们的实验结果也支持这一观点，即HLA-A2等位 基因分布具有明显的种族和地域特征，还检出1例A*0211亚型并由测序证实，表 明 中国南方汉族群体存在该亚型。与白种人中A*0201占全部HLA-A2基因亚型90%以上这一情 形明显不同，中国南、北方汉族群体HLA-A2基因亚型种类较多，频率较为分散，但仍以A *0201为主，该两群体中A*0201，A*0206，A*0207三种亚型均占有一定比例，但频率 存在差别。
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由于中国南方汉族HLA-A*基因亚型具有异质性，提示既往血清学分型HLA-A2相符的器 官 移植供受体在基因水平上存在一定比例的错配。此外，同时对40例样本进行HLA-A、B 血清学分型，其中1份HLA-A2阳性标本(编号L27)血清学分型不能明确指定，因而强调对HL A-A2作基因分型以筛选合适供体，对异基因骨髓移植有重大意义[8]。
作者简介：田伟,男,30岁，医学硕士，助理研究员，从事HLA研究
4 参考文献
1，Bodmer J G,Marsh S G E,Albert E et al. Nomenclature for f actors of the HLA system.Hum Immunol,1997;53:98
2，Kimura A,Sasazuli T. Eleventh international histocompatibility workshop re ference protocol for the HLA DNA typing technique. In:Tsuji K,Aizawa M,Sasazuki T eds. HLA 1991.New York: Oxford University Press,1992:397-419
, http://www.100md.com
3，Ishikawa Y,Tokunaga K,Kashiwase K et al.Suquence-based typing of HLA-A2 alleles using a primer with an extra base mismatch.Hum Immunol,1995;4 2:315
4，赵桐茂.HLA遗传学中的统计分析.见：赵桐茂主编.HLA分型原理及应用.上海：上 海科技出版社，1984：145-148
5，Gao X,Jakobsen I B,Serjeantson S W. Characterization of the HLA-A poly morphi sm by locusspecific polymerase chain reaction amplification and oligonucleotide hybridization. Hum Immunol,1994;41:267
, http://www.100md.com
6，Browning M,Krause P. Genetic diversity of HLA-A2: Evolutionary and functio nal significance. Immunol Tody,1996;17:165
7，Marsh S G E,Fauchet R M,Yang E K et al. Antigen society No.102: HLA -A2,-A68,-A68,-A69,-A9,-A23,-A24. In:Tsuji K, Aizawa M, Sasazuki T(eds). HLA 1991.New York:Oxford University,1992:2,285-289
8，Fleischhauer K,Kernan N A,O'Reilly R J et al.Bone marrow-allog r aft rejection by T lymphocytes recognizing a single amino acid difference in HLA -B44. N Eng J Med,1990;323:1818
[收稿1999-06-30 修回1999-10-08], 百拇医药