C5a受体(CD88)在急性肺损伤中对PVEC-PMN粘附特性的研究(摘要)*
作者：吕凤林 朱锡华d!pf, 百拇医药
单位：第三军医大学免疫学教研室 重庆 400038d!pf, 百拇医药
关键词：分子设计 急性肺损伤 粘附分子 粘附行为 C5aRd!pf, 百拇医药
免疫学杂志990427 C5a-C5aR相互作用是急性肺损伤(ALI)、急性呼吸窘迫综合征(ARDS)的重要病因之一。本研究从C5aR结构与功能的关系出发，探讨了C5aR亲水性基序和B细胞优势表位的结构特点，以此多肽为免疫原成功地获得了一株小鼠抗人C5aR(9-30)短肽单克隆抗体，并探讨了C5a、C5aR及其抗体在急性肺损伤中对细胞粘附特性的影响，结果如下：d!pf, 百拇医药
1.C5aR N-端第1～36位为无规卷曲结构；第38～63位、第73～96位、第104～139位、第150～173位、第207～227位、第242～267位的螺旋参数值都较高，这是α-螺旋结构的好发区，正好也是C5aR的7次跨膜区。C5aR N-端第9～36，第189～203位，第233～245位，第329～343位为高亲水性区域，理想的B细胞优势表位在第8～38位区域内，按其抗原性指数排序，第9-30位的22-肽是B细胞优势表位。d!pf, 百拇医药
2.固相合成C5aR第9-30位多肽P22，合成效率95.19%，每次缩合平均效率99.78%，以20ng/ml P22包被酶联板，能与10-4的小鼠抗人C5aR McAb(S5/1)呈特异性结合，而且P22与rh-C5a可竞争结合anti-C5aR McAb，随着rh-C5a浓度的递增酶联OD490值递减。将P22为免疫原，按100μg/只免疫Balb/c小鼠，经4次亚克隆得到了1株杂交瘤细胞E3。经ELISA测定，E3上清抗体效价为1∶32-1∶128，腹水效价为1∶10-4-1∶10-6；亲和常数2.5×105M-1；染色体数目平均102条；以C5aR+细胞培养于酶联板，E3上清与之呈阳性反应。与针对C5aR第15-21位的单抗(S5/1)作表位对比分析，发现E3抗体所针对的表位是C5aR第15-21位。d!pf, 百拇医药
3.急性肺损伤时PVEC表达 ICAM-1上调，并使胞浆Ca2+浓度上升，施以E3抗体可显著降低该过程。ALI促进了PVEC对PMN的粘附，造成对肺组织的损伤。微管吸吮技术定量观测PVEC-PMN的粘附行为，解决了以往只能对粘附分子进行定量而不能对其粘附效应进行定量的困难。ALI时使PVEC-PMN粘附力值达56.6228×10-10牛顿，明显高于正常Fa值(P<0.01)，该粘附力受E3上清和anti-C5aR McAb不同程度地抑制。d!pf, 百拇医药
本研究从蛋白质分子设计的角度，寻找的表位多肽具有诱导产生抗体的能力，这丰富了C5a-C5aR领域的研究内容，并将急性肺损伤发病机制的研究重心转移到了免疫系统，尤其是补体系统所参与的分子机制上来。d!pf, 百拇医药
*国家自然科学基金资助项目(编号：39770315)(吕凤林 朱锡华)
单位：第三军医大学免疫学教研室 重庆 400038d!pf, 百拇医药
关键词：分子设计 急性肺损伤 粘附分子 粘附行为 C5aRd!pf, 百拇医药
免疫学杂志990427 C5a-C5aR相互作用是急性肺损伤(ALI)、急性呼吸窘迫综合征(ARDS)的重要病因之一。本研究从C5aR结构与功能的关系出发，探讨了C5aR亲水性基序和B细胞优势表位的结构特点，以此多肽为免疫原成功地获得了一株小鼠抗人C5aR(9-30)短肽单克隆抗体，并探讨了C5a、C5aR及其抗体在急性肺损伤中对细胞粘附特性的影响，结果如下：d!pf, 百拇医药
1.C5aR N-端第1～36位为无规卷曲结构；第38～63位、第73～96位、第104～139位、第150～173位、第207～227位、第242～267位的螺旋参数值都较高，这是α-螺旋结构的好发区，正好也是C5aR的7次跨膜区。C5aR N-端第9～36，第189～203位，第233～245位，第329～343位为高亲水性区域，理想的B细胞优势表位在第8～38位区域内，按其抗原性指数排序，第9-30位的22-肽是B细胞优势表位。d!pf, 百拇医药
2.固相合成C5aR第9-30位多肽P22，合成效率95.19%，每次缩合平均效率99.78%，以20ng/ml P22包被酶联板，能与10-4的小鼠抗人C5aR McAb(S5/1)呈特异性结合，而且P22与rh-C5a可竞争结合anti-C5aR McAb，随着rh-C5a浓度的递增酶联OD490值递减。将P22为免疫原，按100μg/只免疫Balb/c小鼠，经4次亚克隆得到了1株杂交瘤细胞E3。经ELISA测定，E3上清抗体效价为1∶32-1∶128，腹水效价为1∶10-4-1∶10-6；亲和常数2.5×105M-1；染色体数目平均102条；以C5aR+细胞培养于酶联板，E3上清与之呈阳性反应。与针对C5aR第15-21位的单抗(S5/1)作表位对比分析，发现E3抗体所针对的表位是C5aR第15-21位。d!pf, 百拇医药
3.急性肺损伤时PVEC表达 ICAM-1上调，并使胞浆Ca2+浓度上升，施以E3抗体可显著降低该过程。ALI促进了PVEC对PMN的粘附，造成对肺组织的损伤。微管吸吮技术定量观测PVEC-PMN的粘附行为，解决了以往只能对粘附分子进行定量而不能对其粘附效应进行定量的困难。ALI时使PVEC-PMN粘附力值达56.6228×10-10牛顿，明显高于正常Fa值(P<0.01)，该粘附力受E3上清和anti-C5aR McAb不同程度地抑制。d!pf, 百拇医药
本研究从蛋白质分子设计的角度，寻找的表位多肽具有诱导产生抗体的能力，这丰富了C5a-C5aR领域的研究内容，并将急性肺损伤发病机制的研究重心转移到了免疫系统，尤其是补体系统所参与的分子机制上来。d!pf, 百拇医药
*国家自然科学基金资助项目(编号：39770315)(吕凤林 朱锡华)