食管癌患者血清血管内皮生长因子水平的初步研究PRELIMINARY STUDY ON LEVEL OF VASCULAR ENDOTHELIAL GROWTH FACTOR IN THE SERUM WITH ESOPHAGEAL CANCER PATIE
作者：李 健 唐芙爱 牛正先 王立东p|@r&, 百拇医药
单位：李 健 唐芙爱(河南医科大学附二院消化科 郑州450003)；牛正先(河南医科大学一院消化科 郑州 450052)；王立东(河南医科大学癌症研究室 郑州 450052)p|@r&, 百拇医药
关键词：p|@r&, 百拇医药
免疫学杂志990425PRELIMINARY STUDY ON LEVEL OF VASCULARp|@r&, 百拇医药
ENDOTHELIAL GROWTH FACTOR IN THE SERUMp|@r&, 百拇医药
WITH ESOPHAGEAL CANCER PATIENTSp|@r&, 百拇医药
血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor，VEGF)是新近被证实和鉴定在肿瘤血管发生中起重要作用的内源性血管发生因子，VEGF在乳腺癌等肿瘤组织中的表达提示可作为独立的预后因素[1]。但是，有关肿瘤患者血清中VEGF变化的研究报道甚少。本文应用ELISA方法对食管癌患者血清中的VEGF水平进行了初步研究。p|@r&, 百拇医药
1 材料与方法p|@r&, 百拇医药
1.1 材料 收集食管癌38例，其中男性22例，女性16例，年龄区间为39～72岁，平均年龄58.2岁。所有食管癌患者术前均未进行化疗和放疗。正常对照组均为胃镜在食管中段所取的活检组织，共82例，男性47例，女性35例，年龄区间为30～69岁，平均年龄45.8岁，无肝病等全身性疾病病史。同时对上述人群进行血样采集。全血经离心，并分装血清，备进一步进行ELISA VEGF测定。p|@r&, 百拇医药
1.2 病理学诊断标准 38例食管癌病理诊断均为食管鳞状细胞癌。TNM分期：Ⅰ级3例，Ⅱa级11例，Ⅱb级8例，Ⅲ级11例，Ⅳ级5例。正常对照组82例为病理证实的正常食管粘膜组织。p|@r&, 百拇医药
1.3 ELISA测定血清VEGF ELISA测定方法步骤按R＆D System提供的测试方法。主要步骤如下：配制VEGF标准曲线(将VEGF标准试剂稀释配制成6个不同工作浓度)；用缓冲液稀释人血清到1∶10；加100μl VEGF标准工作浓度的溶液和稀释的人血清至96孔板孔内，室温孵育2h，4%洗涤液冲洗3次；加200μl VEGF165结合物，室温孵育1h，4%洗涤液冲洗3次；加50μl酶底物室温孵育30min；加50μl终止液，终止反应。用ELISA全自动读数仪测试光密度(波长：450nm)；并采用计算机程序计算出样本浓度。
1.4 统计学分析 实验结果采用方差分析和秩和检验进行统计学处理。k3z0g, 百拇医药
2 结果k3z0g, 百拇医药
2.1 食管癌和正常对照组中VEGF水平的测定结果 38例食管鳞癌患者血清VEGF含量(0.174±0.145μg/L)明显高于82例正常对照组VEGF水平(0.092±0.048μg/L)，P<0.05。k3z0g, 百拇医药
2.2 血清VEGF水平与食管鳞癌临床病理各参数的关系 在食管鳞癌临床病理分期中，16例(Ⅲ+Ⅳ)期食管鳞癌患者血清VEGF水平(0.267±0.191μg/L)明显高于22例(Ⅰ+Ⅱa+Ⅱb)期食管鳞癌患者血清VEGF水平(0.110±0.045μg/L)，P<0.05；24例淋巴结转移组食管癌患者血清VEGF水平(0.221±0.164μg/L)高于14例无淋巴结转移组食管癌患者血清VEGF水平(0.093±0.035μg/L)，P<0.05。k3z0g, 百拇医药
3 讨论k3z0g, 百拇医药
VEGF是一个分子量为34～45KD的高度糖基化的碱性蛋白，是由分子量为17～22KD的同源双聚体所构成，具有体外试验可促进内皮细胞增殖和迁移，体内实验具有血管渗透性的生物学功能[2]。k3z0g, 百拇医药
我们利用ELISA法发现在健康人群血清中存在VEGF，这与Yamamoto等[3]应用EIA检测健康者血清VEGF121的结果相似。尽管我们尚未证实这些VEGF蛋白的免疫活性，但我们认为一定的VEGF水平可能是机体所必需的，体内VEGF的存在是机体病变进程(如血管发生)所必需的。Ferrara等[4]研究证实若血清中VEGF的浓度低于0.05μg/L时，其多种生物学活性对静息内皮细胞无作用，但是对某些因素已经敏感的内皮细胞有作用，如包括生长因子、细胞因子、生理环境的改变以及脏器损伤等因素。k3z0g, 百拇医药
我们的研究还发现；食管鳞癌患者血清中VEGF水平明显高于正常对照组；且随着肿瘤浸润深度的增加和淋巴结转移的出现，(Ⅲ+Ⅳ)期食管鳞癌患者血清中的VEGF水平明显高于(Ⅰ+Ⅱa+Ⅱb)期，肿瘤的大小、淋巴结转移与食管癌患者血清VEGF水平有关，提示肿瘤浸润以及转移过程中需要一定量的VEGF参与。以正常人血清VEGF水平加上两个标准差为正常值高限(0.188μg/L)，其中6例临床病理分期为Ⅲ和Ⅳ期，肿瘤一般浸润外膜层或淋巴结转移，提示肿瘤患者血清VEGF水平在一定程度上可反映食管鳞癌的进展情况。k3z0g, 百拇医药
*国家自然科学基金资助课题(39670290)k3z0g, 百拇医药
第一作者:男,30岁,研究生,主治医师k3z0g, 百拇医药
参考文献k3z0g, 百拇医药
1 Dvorak HF，Brown LF，Detmar M，et al.Vascular permeability factor/vascular endothelial growth factor，microvascular hyperpermeability，and angiogenesis.Am J Pathol，1995，146：1029k3z0g, 百拇医药
2 李 健，牛正先，王立东.血管内皮生长因子(VEGF)与肿瘤微环境.国外医学临床生物化学与检验学分册，1997，18(5)：231k3z0g, 百拇医药
3 Yamamoto Y，Toi M，Kondo S，et al.Concentrations of vascular endothelial growth factor in the sera of normal controls and concer patients.Clin Cancer Res，1996，2：821k3z0g, 百拇医药
4 Ferrara N.The role of vascular endothelial growth factor in pathological angiogenesis.Breast Cancer Res Treat，1995，36：127k3z0g, 百拇医药
(1998-11-07收稿；1999-05-12修回)(李 健 唐芙爱 牛正先 王立东)
单位：李 健 唐芙爱(河南医科大学附二院消化科 郑州450003)；牛正先(河南医科大学一院消化科 郑州 450052)；王立东(河南医科大学癌症研究室 郑州 450052)p|@r&, 百拇医药
关键词：p|@r&, 百拇医药
免疫学杂志990425PRELIMINARY STUDY ON LEVEL OF VASCULARp|@r&, 百拇医药
ENDOTHELIAL GROWTH FACTOR IN THE SERUMp|@r&, 百拇医药
WITH ESOPHAGEAL CANCER PATIENTSp|@r&, 百拇医药
血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor，VEGF)是新近被证实和鉴定在肿瘤血管发生中起重要作用的内源性血管发生因子，VEGF在乳腺癌等肿瘤组织中的表达提示可作为独立的预后因素[1]。但是，有关肿瘤患者血清中VEGF变化的研究报道甚少。本文应用ELISA方法对食管癌患者血清中的VEGF水平进行了初步研究。p|@r&, 百拇医药
1 材料与方法p|@r&, 百拇医药
1.1 材料 收集食管癌38例，其中男性22例，女性16例，年龄区间为39～72岁，平均年龄58.2岁。所有食管癌患者术前均未进行化疗和放疗。正常对照组均为胃镜在食管中段所取的活检组织，共82例，男性47例，女性35例，年龄区间为30～69岁，平均年龄45.8岁，无肝病等全身性疾病病史。同时对上述人群进行血样采集。全血经离心，并分装血清，备进一步进行ELISA VEGF测定。p|@r&, 百拇医药
1.2 病理学诊断标准 38例食管癌病理诊断均为食管鳞状细胞癌。TNM分期：Ⅰ级3例，Ⅱa级11例，Ⅱb级8例，Ⅲ级11例，Ⅳ级5例。正常对照组82例为病理证实的正常食管粘膜组织。p|@r&, 百拇医药
1.3 ELISA测定血清VEGF ELISA测定方法步骤按R＆D System提供的测试方法。主要步骤如下：配制VEGF标准曲线(将VEGF标准试剂稀释配制成6个不同工作浓度)；用缓冲液稀释人血清到1∶10；加100μl VEGF标准工作浓度的溶液和稀释的人血清至96孔板孔内，室温孵育2h，4%洗涤液冲洗3次；加200μl VEGF165结合物，室温孵育1h，4%洗涤液冲洗3次；加50μl酶底物室温孵育30min；加50μl终止液，终止反应。用ELISA全自动读数仪测试光密度(波长：450nm)；并采用计算机程序计算出样本浓度。
1.4 统计学分析 实验结果采用方差分析和秩和检验进行统计学处理。k3z0g, 百拇医药
2 结果k3z0g, 百拇医药
2.1 食管癌和正常对照组中VEGF水平的测定结果 38例食管鳞癌患者血清VEGF含量(0.174±0.145μg/L)明显高于82例正常对照组VEGF水平(0.092±0.048μg/L)，P<0.05。k3z0g, 百拇医药
2.2 血清VEGF水平与食管鳞癌临床病理各参数的关系 在食管鳞癌临床病理分期中，16例(Ⅲ+Ⅳ)期食管鳞癌患者血清VEGF水平(0.267±0.191μg/L)明显高于22例(Ⅰ+Ⅱa+Ⅱb)期食管鳞癌患者血清VEGF水平(0.110±0.045μg/L)，P<0.05；24例淋巴结转移组食管癌患者血清VEGF水平(0.221±0.164μg/L)高于14例无淋巴结转移组食管癌患者血清VEGF水平(0.093±0.035μg/L)，P<0.05。k3z0g, 百拇医药
3 讨论k3z0g, 百拇医药
VEGF是一个分子量为34～45KD的高度糖基化的碱性蛋白，是由分子量为17～22KD的同源双聚体所构成，具有体外试验可促进内皮细胞增殖和迁移，体内实验具有血管渗透性的生物学功能[2]。k3z0g, 百拇医药
我们利用ELISA法发现在健康人群血清中存在VEGF，这与Yamamoto等[3]应用EIA检测健康者血清VEGF121的结果相似。尽管我们尚未证实这些VEGF蛋白的免疫活性，但我们认为一定的VEGF水平可能是机体所必需的，体内VEGF的存在是机体病变进程(如血管发生)所必需的。Ferrara等[4]研究证实若血清中VEGF的浓度低于0.05μg/L时，其多种生物学活性对静息内皮细胞无作用，但是对某些因素已经敏感的内皮细胞有作用，如包括生长因子、细胞因子、生理环境的改变以及脏器损伤等因素。k3z0g, 百拇医药
我们的研究还发现；食管鳞癌患者血清中VEGF水平明显高于正常对照组；且随着肿瘤浸润深度的增加和淋巴结转移的出现，(Ⅲ+Ⅳ)期食管鳞癌患者血清中的VEGF水平明显高于(Ⅰ+Ⅱa+Ⅱb)期，肿瘤的大小、淋巴结转移与食管癌患者血清VEGF水平有关，提示肿瘤浸润以及转移过程中需要一定量的VEGF参与。以正常人血清VEGF水平加上两个标准差为正常值高限(0.188μg/L)，其中6例临床病理分期为Ⅲ和Ⅳ期，肿瘤一般浸润外膜层或淋巴结转移，提示肿瘤患者血清VEGF水平在一定程度上可反映食管鳞癌的进展情况。k3z0g, 百拇医药
*国家自然科学基金资助课题(39670290)k3z0g, 百拇医药
第一作者:男,30岁,研究生,主治医师k3z0g, 百拇医药
参考文献k3z0g, 百拇医药
1 Dvorak HF，Brown LF，Detmar M，et al.Vascular permeability factor/vascular endothelial growth factor，microvascular hyperpermeability，and angiogenesis.Am J Pathol，1995，146：1029k3z0g, 百拇医药
2 李 健，牛正先，王立东.血管内皮生长因子(VEGF)与肿瘤微环境.国外医学临床生物化学与检验学分册，1997，18(5)：231k3z0g, 百拇医药
3 Yamamoto Y，Toi M，Kondo S，et al.Concentrations of vascular endothelial growth factor in the sera of normal controls and concer patients.Clin Cancer Res，1996，2：821k3z0g, 百拇医药
4 Ferrara N.The role of vascular endothelial growth factor in pathological angiogenesis.Breast Cancer Res Treat，1995，36：127k3z0g, 百拇医药
(1998-11-07收稿；1999-05-12修回)(李 健 唐芙爱 牛正先 王立东)