视网膜母细胞瘤中Fas／FasL表型的检测及意义
作者：孔令非 刘正国 赵耀武 银平章$2:^{8/, 百拇医药
单位：孔令非(河南省人民医院免疫病理室，河南 郑州 450003)；刘正国(河南省人民医院免疫病理室，河南 郑州 450003)；赵耀武(河南省人民医院免疫病理室，河南 郑州 450003)；银平章(河南省人民医院免疫病理室，河南 郑州 450003)$2:^{8/, 百拇医药
关键词：视网膜母细胞瘤；凋亡；Fas；FasL；免疫逃逸$2:^{8/, 百拇医药
免疫学杂志000528 [中图分类号] 744.1 [文献标识码] B$2:^{8/, 百拇医药
[文章编号]1000-8861(2000)05-0398-01$2:^{8/, 百拇医药
Detection and significance of the phenotype of Fas/FasL in retinoblastoma$2:^{8/, 百拇医药
Fas是一种细胞表面分子[1]，可与其特异性配体Fas-Ligand(FasL)结合，诱导细胞凋亡的发生。许多肿瘤细胞可表达FasL，明显减弱Fas阳性细胞毒性淋巴细胞的攻击能力，是肿瘤细胞逃避机体免疫攻击的新机制，在肿瘤的发生和发展中起重要作用。本文拟研究Fas、FasL在视网膜母细胞瘤中的表型及其意义。$2:^{8/, 百拇医药
1 材料与方法$2:^{8/, 百拇医药
1.1 材料 视网膜母细胞瘤45例及正常视网膜组织12例。$2:^{8/, 百拇医药
1.2 方法 石蜡切片4 μm，经脱蜡，水化，内源性酶灭活，封闭，微波修复5 min 2次，分别加入一抗FasL(1∶300)Fas(1∶500)，4 °C过夜；加入生物素化的二抗，室温孵育15 min，再加入酶复合物，室温孵育15 min，DAB显色。经高清晰彩色病理图象分析系统(HPIAS-1 000)处理，根据染色范围分为：0～4(“0”表示阳性细胞数为0；“1”表达细胞数1%～25%；“2”表达细胞数在26%～50%；“3”表达细胞数在51%～75%；“4”表达细胞数在76%～100%)[2]。Fas及FasL分别用肺癌组织和睾丸组织作阳性对照，结果均阳性。$2:^{8/, 百拇医药
1.3 统计学处理 数据用均数±标准差表示，用非配对t检验，取P<0.01为显著性的标准。
2 结果/fu, 百拇医药
2.1 FasL在视网膜母细胞瘤中表型的检测 FasL主要在胞浆及胞膜上表达，分布弥散(3.021±0.847)；正常视网膜细胞全层表达(3.583±0.668，P＝0.023)，均为高表达。/fu, 百拇医药
2.2 Fas在视网膜母细胞瘤中表型的检测 Fas在正常视网膜组织中几乎无表达(0.083±0.289)，在视网膜母细胞瘤中有极弱的表达(0.255±0.441，P＝0.1148)，均为低表达。/fu, 百拇医药
3 讨论/fu, 百拇医药
Fas与FasL相互作用是诱导细胞凋亡的重要途径之一；FasL不仅在激活的淋巴细胞及单核细胞中有表达[3]，在某些特殊部位如睾丸、眼、脾脏及神经组织等处有高的表达，并且在许多恶性肿瘤中也有高的表达，认为肿瘤细胞FasL的表达可诱导浸润淋巴细胞的凋亡，而使肿瘤细胞本身逃避免疫系统的监视和控制。有实验表明[4]：当把HSV-1注射到眼前房，开始时有中性白细胞及淋巴细胞的浸润，但在注射后24 h，浸润细胞发生明显的凋亡；在正常情况下，炎症只局限在前房，很少波及后房，更不会影响视网膜；当把HSV-1病毒注入Fas-的小鼠和FasL-的小鼠前房，均引起强烈的炎症反应而不伴随凋亡的发生，表明浸润细胞凋亡的发生依赖于功能性Fas及FasL的表达；并发现FasL在正常角膜上皮、角膜内皮、睫状体及视网膜全层均有强的表达，是免疫特赦的物质基础。本研究结果显示：视网膜母细胞瘤的细胞浆和细胞膜上表达较强的FasL和极弱的Fas与正常视网膜组织相比均无显著性差异(P>0.01)，表明FasL在正常视网膜组织和肿瘤组织中均高表达，而Fas均为低表达，是贯穿视网膜母细胞瘤发生发展过程的一个事件，正常情况下是免疫特赦的物质基础，肿瘤情况下是逃避免疫功击的途径之一，有利于视网膜母细胞瘤的失控性增生，在肿瘤的发展中起重要作用。/fu, 百拇医药
[作者简介] 孔令非(1963-)，男，河南郑州市人，副主任医师，医学硕士，主要从事肿瘤免疫诊断的研究。/fu, 百拇医药
[参考文献]/fu, 百拇医药
[1] KAWAHARA A， KOBAYASHI T， NAGATA S. Inhibition of Fas-induced apoptosis by bcl-2[J]. Oncogene， 1998，17(20)：2 549-2 554./fu, 百拇医药
[2] MITSIADES N， POULAKI V， KOTOULA V， et al. Fas/fas ligand up-regulation and bcl-2 down-regulation may be significant in the pathogenesis of Hashimoto’s thyroiditis [J]. J Clin Endocrinol Metab， 1998，83(6)：2 199-2 203./fu, 百拇医药
[3] SASAKI Y， AHMED H， TAKEUCHI T， et al. Immunohistochemical study of Fas， Fas-ligand and interleukin-1 beta converting enzyme expression in human prostatic cancer[J]. Br J Urol， 1998，81(6)：852-855./fu, 百拇医药
[4] THOMAS SG， THOMAS B， SHARON M， et al. Fas ligand-induced apoptosis as a mechanism of immune privilege[J]. Science， 1995，270(17)：1 189-1 192./fu, 百拇医药
[收稿日期] 2000-01-07； [修回日期] 2000-04-17(孔令非 刘正国 赵耀武 银平章)
单位：孔令非(河南省人民医院免疫病理室，河南 郑州 450003)；刘正国(河南省人民医院免疫病理室，河南 郑州 450003)；赵耀武(河南省人民医院免疫病理室，河南 郑州 450003)；银平章(河南省人民医院免疫病理室，河南 郑州 450003)$2:^{8/, 百拇医药
关键词：视网膜母细胞瘤；凋亡；Fas；FasL；免疫逃逸$2:^{8/, 百拇医药
免疫学杂志000528 [中图分类号] 744.1 [文献标识码] B$2:^{8/, 百拇医药
[文章编号]1000-8861(2000)05-0398-01$2:^{8/, 百拇医药
Detection and significance of the phenotype of Fas/FasL in retinoblastoma$2:^{8/, 百拇医药
Fas是一种细胞表面分子[1]，可与其特异性配体Fas-Ligand(FasL)结合，诱导细胞凋亡的发生。许多肿瘤细胞可表达FasL，明显减弱Fas阳性细胞毒性淋巴细胞的攻击能力，是肿瘤细胞逃避机体免疫攻击的新机制，在肿瘤的发生和发展中起重要作用。本文拟研究Fas、FasL在视网膜母细胞瘤中的表型及其意义。$2:^{8/, 百拇医药
1 材料与方法$2:^{8/, 百拇医药
1.1 材料 视网膜母细胞瘤45例及正常视网膜组织12例。$2:^{8/, 百拇医药
1.2 方法 石蜡切片4 μm，经脱蜡，水化，内源性酶灭活，封闭，微波修复5 min 2次，分别加入一抗FasL(1∶300)Fas(1∶500)，4 °C过夜；加入生物素化的二抗，室温孵育15 min，再加入酶复合物，室温孵育15 min，DAB显色。经高清晰彩色病理图象分析系统(HPIAS-1 000)处理，根据染色范围分为：0～4(“0”表示阳性细胞数为0；“1”表达细胞数1%～25%；“2”表达细胞数在26%～50%；“3”表达细胞数在51%～75%；“4”表达细胞数在76%～100%)[2]。Fas及FasL分别用肺癌组织和睾丸组织作阳性对照，结果均阳性。$2:^{8/, 百拇医药
1.3 统计学处理 数据用均数±标准差表示，用非配对t检验，取P<0.01为显著性的标准。
2 结果/fu, 百拇医药
2.1 FasL在视网膜母细胞瘤中表型的检测 FasL主要在胞浆及胞膜上表达，分布弥散(3.021±0.847)；正常视网膜细胞全层表达(3.583±0.668，P＝0.023)，均为高表达。/fu, 百拇医药
2.2 Fas在视网膜母细胞瘤中表型的检测 Fas在正常视网膜组织中几乎无表达(0.083±0.289)，在视网膜母细胞瘤中有极弱的表达(0.255±0.441，P＝0.1148)，均为低表达。/fu, 百拇医药
3 讨论/fu, 百拇医药
Fas与FasL相互作用是诱导细胞凋亡的重要途径之一；FasL不仅在激活的淋巴细胞及单核细胞中有表达[3]，在某些特殊部位如睾丸、眼、脾脏及神经组织等处有高的表达，并且在许多恶性肿瘤中也有高的表达，认为肿瘤细胞FasL的表达可诱导浸润淋巴细胞的凋亡，而使肿瘤细胞本身逃避免疫系统的监视和控制。有实验表明[4]：当把HSV-1注射到眼前房，开始时有中性白细胞及淋巴细胞的浸润，但在注射后24 h，浸润细胞发生明显的凋亡；在正常情况下，炎症只局限在前房，很少波及后房，更不会影响视网膜；当把HSV-1病毒注入Fas-的小鼠和FasL-的小鼠前房，均引起强烈的炎症反应而不伴随凋亡的发生，表明浸润细胞凋亡的发生依赖于功能性Fas及FasL的表达；并发现FasL在正常角膜上皮、角膜内皮、睫状体及视网膜全层均有强的表达，是免疫特赦的物质基础。本研究结果显示：视网膜母细胞瘤的细胞浆和细胞膜上表达较强的FasL和极弱的Fas与正常视网膜组织相比均无显著性差异(P>0.01)，表明FasL在正常视网膜组织和肿瘤组织中均高表达，而Fas均为低表达，是贯穿视网膜母细胞瘤发生发展过程的一个事件，正常情况下是免疫特赦的物质基础，肿瘤情况下是逃避免疫功击的途径之一，有利于视网膜母细胞瘤的失控性增生，在肿瘤的发展中起重要作用。/fu, 百拇医药
[作者简介] 孔令非(1963-)，男，河南郑州市人，副主任医师，医学硕士，主要从事肿瘤免疫诊断的研究。/fu, 百拇医药
[参考文献]/fu, 百拇医药
[1] KAWAHARA A， KOBAYASHI T， NAGATA S. Inhibition of Fas-induced apoptosis by bcl-2[J]. Oncogene， 1998，17(20)：2 549-2 554./fu, 百拇医药
[2] MITSIADES N， POULAKI V， KOTOULA V， et al. Fas/fas ligand up-regulation and bcl-2 down-regulation may be significant in the pathogenesis of Hashimoto’s thyroiditis [J]. J Clin Endocrinol Metab， 1998，83(6)：2 199-2 203./fu, 百拇医药
[3] SASAKI Y， AHMED H， TAKEUCHI T， et al. Immunohistochemical study of Fas， Fas-ligand and interleukin-1 beta converting enzyme expression in human prostatic cancer[J]. Br J Urol， 1998，81(6)：852-855./fu, 百拇医药
[4] THOMAS SG， THOMAS B， SHARON M， et al. Fas ligand-induced apoptosis as a mechanism of immune privilege[J]. Science， 1995，270(17)：1 189-1 192./fu, 百拇医药
[收稿日期] 2000-01-07； [修回日期] 2000-04-17(孔令非 刘正国 赵耀武 银平章)