脑囊虫病患者血清NO和TNFα水平
作者：陈传 魏泉德 朱家勇
单位：陈传(广东医学院寄生虫学教研室，湛江 524023)；魏泉德(广东医学院寄生虫学教研室，湛江 524023)；朱家勇(广东医学院寄生虫学教研室，湛江 524023)
关键词：脑囊虫病；TNFα；一氧化氮(NO)；免疫
实用寄生虫病杂志000105 摘要 目的：观察脑囊虫病患者血清一氧化氮(NO)和TNFα的水平并探讨其临床意义。方法：用比色法和双抗夹心ELISA检测了30例脑囊虫病患者血清的一氧化氮(NO)和肿瘤坏死因子α(TNFα)水平。结果：患者血清TNFα含量为(0.66±0.12)×10-3ng/L，与正常对照组的(0.118±0.051)×10-3ng/L比较有极显著性差异(P<0.01)；血清NO水平为(27.77±3.77)μmol/L，明显低于正常对照组的(50.04±6.23)μmol/L(P<0.01)。结论：脑囊虫病患者机体免疫功能受抑制，免疫功能低下。
, http://www.100md.com
中图分类号：R532.33 文献标识码：B
文章编号：1005-2534(2000)01-0015-02
LEVEL OF NITRIC OXIDE AND TNFα IN SERA OF PATIENT WITH
CEREBRAL CYSTICERCOSIS
Chen Chuan
(Department of Parasitology, Guangdong Medical College, Zhanjiang 524023)
Wei Quande
(Department of Parasitology, Guangdong Medical College, Zhanjiang 524023)
, 百拇医药
Zhu Jiayong
(Department of Parasitology, Guangdong Medical College, Zhanjiang 524023)
ABSTRACT Aim: To observe the level of nitric oxide (NO) and TNFα in sera of patient with cerebral cysticercosis. Method: Sandwich-ELISA and colorimetry were employed to detect the level of TNFα and NO in sera of 30 patients with cerebral cysticercosis. Results: The level of TNFα in patients and normal individuals was (0.66±0.12)×10-3 ng/L and (0.118±0.051)×10-3 ng/L(P<0.01), while the level of NO in patients and normal indivivuals was (27.77±3.77)μmol/L and (50.04±6.23) μmol/L (P<0.01). Conclusion: The immune response of patients with cerebral cysticercosis was suppressed and their immune function was lower than that of normal individual.
, 百拇医药
Key words: cerebral cysticercosis; TNFα; nitric oxide; immunity
一氧化氮(NO)是一种重要的免疫介质，在抗寄生虫感染中发挥着重要的杀虫作用。自80年代内源性NO被发现以来，其生物学作用日益受到重视。而肿瘤坏死因子α(TNFα)是重要的免疫反应介质，TNFα可作用于巨噬细胞(Mψ)等诱导NO的产生并参与脑囊虫病肉芽肿的炎症反应及免疫反应。猪带绦虫囊尾蚴寄生可导致宿主的免疫应答受抑制，包括细胞免疫和体液免疫应答[1]，使宿主免疫功能受损害。为了了解脑囊虫病患者血清NO和TNFα水平，我们检测了30例脑囊虫病患者血清中TNFα和NO水平。
1 材料和方法
1.1 研究对象
30例临床诊断为脑囊虫病患者均为本院附属医院传染科住院病人，年龄14～67岁，男性19例，女性11例。均行CT或MRI检查，单纯脑囊虫病12例，脑型合并皮肌型18例。全部病人均无自身免疫性疾病和严重感染。于治疗前采血，收集血清保存于-20℃待检。健康对照组40份血清采自本院健康体检者。
, 百拇医药
1.2 血清TNFα测定(双抗夹心ELISA)
TNFα酶联免疫检测试剂盒由军事医学科学院提供。按说明书操作，用DG3022型酶标仪(华东电子管厂生产)在492nm波长下测OD值。以标准品绘制标准曲线查出待检样品的含量。
1.3 NO测定(比色法)
试剂盒由军事医学科学院提供。取血清0.1ml加0.15%硫酸锌0.6ml混匀；加双蒸水0.4ml，加4.4%氢氧化钠0.1ml混匀，冰上孵育60min,12 000r/min离心2min;取上清0.6ml加双蒸水0.4ml及0.3%璜胺0.1ml混匀，冰上孵育15min,加6mmol/L萘乙烯二胺盐酸盐0.1ml，室温放置1h；用VIS-723型分光光度计(上海第三分析仪器厂产品)，545nm比色，读OD值。用亚硝酸钠为标准品，绘制标准曲线，根据样品OD值，按标准曲线计算NO含量。
, 百拇医药
1.4 统计分析
样本均值的比较用t检验
2 结果
2.1 TNFα测定结果
30例脑囊虫病患者血清TNFα含量平均为(0.66±0.12)×10-3ng/L，极显著高于正常对照组的(0.118±0.051)×10-3ng/L(P<0.01)，见附表。
2.2 NO测定结果
脑囊虫病患者组血清中NO的含量平均为(27.77±3.77)μmol/L，显著低于正常对照组(50.04±6.23)μmol/L(P<0.01)。见附表。
附表 30例脑囊虫病患者血清TNFα和NO水平(
±s) 组别
, 百拇医药
例数
TNFα
(10-3ng/L)
NO
(μmol/L)
患者组
30
0.66±0.12*
27.77±3.77*
对照组
40
0.118±0.051
, 百拇医药
50.04±6.23
*与对照组比较，P<0.01.
3 讨论
NO是一种重要的防御性介质，对多种原虫和蠕虫具较强的抑制和杀伤作用，其抑制和杀伤效应主要依赖其细胞毒作用以及在对寄生虫的生化代谢和信息传导通路的障碍作用[2]。NO主要由Mψ和中性粒细胞产生，细胞因子中IFN-r,TNFα和IL-1等可作用于Mψ等细胞，通过增加其诱导型NO合成酶(induceble Nitric Oxide Synthase,iNOS)mRNA的表达而增加NO的产生[3]，故宿主血清的NO水平与其细胞因子水平及细胞免疫功能密切相关。猪带绦虫中绦期可产生一种RNA多肽，称中绦因子(metacestode factor,MF)，可抑制各种细胞因子的产生，使宿主IL-2、TNFα等分泌减少[4，5]。但迄今为止对囊虫病患者血清NO水平的研究甚少。本文检测了30例脑囊虫病病人的NO，发现其水平显著低于正常对照组的NO水平，说明囊尾蚴可抑制免疫效应细胞的活性，使效应介质NO产生减少，从而使其能逃避宿主免疫系统的杀灭。
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TNFα主要由Mψ产生，参与囊虫病的免疫病理反应。猪带绦虫囊尾蚴可直接诱导单核-Mψ细胞产生TNFα，亦可由病灶周围浸润的单核-Mψ产生，在囊虫病免疫病理过程中起着重要作用。在鼠脑囊虫病检测其脑脊液TNFα与正常无异[6]。本研究结果表明，囊虫病患者虽然TNFα高于正常组，但却不能使机体产生足量的NO，这有别于其它寄生虫感染[7]，可能由于囊虫病患者SIL-2R水平异常增高，抑制免疫应答有关[5]，其机理尚待进一步研究。
综上所述，脑囊虫病患者机体免疫功能低下，机体不能有效杀灭囊尾蚴。而囊尾蚴寄生可导致宿主中枢神经系统器质性损害，引起癫痫等严重后果，故对囊虫病应早期发现，早期药物治疗以避免引起严重损害。
参考文献
1，李允鹤.蠕虫病免疫及免疫诊断〔M〕.第1版.江苏科技出版社，1991：279
, 百拇医药
2，Radi R,Beckman JS,Bush KM,et al.Peroxynitrite oxidation of sulfhydryls:The cytotoxic potential of superoxide and nitric oxide〔J〕.J Biol Chem,1991；288∶481
3，Seguin R,Mann BJ,Keller K,et al.The tumor necrosis factor alpha-stimulating region of galactose-inhibitable lectin of Entamoeba histolytica activates gamma interferon-primed macrophages for amebicidal activity mediated by nitric oxide〔J〕.Infect Immun,1997；65∶2522
4，Arechavaleta F,Molinari JL,Tato PA.Taenia solium metacestode factor nonspecifically inhibits cytokine production〔J〕.Parasitol Res,1998；84∶117
, 百拇医药
5，张唯哲，徐之杰，赵育莹，等.囊虫病患者IL-2及sIL-2R测定〔J〕.中国寄生虫病防治杂志，1997；10(2)∶97
6，Ostrosky ZL,Garcia ME,Rios C,et al.Humoral and cellular immune response within the subarachnoid space of patients with neurocysticercosis〔J〕.Arch Med Res,1996；27∶513
7，Lin JY,Chadee K.Macrophage cytotoxicity against Entamoeba histolytica trophozoites is mediated by nitric oxide from L-arginine〔J〕.J Immunol,1992；148∶3999, 百拇医药
单位：陈传(广东医学院寄生虫学教研室，湛江 524023)；魏泉德(广东医学院寄生虫学教研室，湛江 524023)；朱家勇(广东医学院寄生虫学教研室，湛江 524023)
关键词：脑囊虫病；TNFα；一氧化氮(NO)；免疫
实用寄生虫病杂志000105 摘要 目的：观察脑囊虫病患者血清一氧化氮(NO)和TNFα的水平并探讨其临床意义。方法：用比色法和双抗夹心ELISA检测了30例脑囊虫病患者血清的一氧化氮(NO)和肿瘤坏死因子α(TNFα)水平。结果：患者血清TNFα含量为(0.66±0.12)×10-3ng/L，与正常对照组的(0.118±0.051)×10-3ng/L比较有极显著性差异(P<0.01)；血清NO水平为(27.77±3.77)μmol/L，明显低于正常对照组的(50.04±6.23)μmol/L(P<0.01)。结论：脑囊虫病患者机体免疫功能受抑制，免疫功能低下。
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中图分类号：R532.33 文献标识码：B
文章编号：1005-2534(2000)01-0015-02
LEVEL OF NITRIC OXIDE AND TNFα IN SERA OF PATIENT WITH
CEREBRAL CYSTICERCOSIS
Chen Chuan
(Department of Parasitology, Guangdong Medical College, Zhanjiang 524023)
Wei Quande
(Department of Parasitology, Guangdong Medical College, Zhanjiang 524023)
, 百拇医药
Zhu Jiayong
(Department of Parasitology, Guangdong Medical College, Zhanjiang 524023)
ABSTRACT Aim: To observe the level of nitric oxide (NO) and TNFα in sera of patient with cerebral cysticercosis. Method: Sandwich-ELISA and colorimetry were employed to detect the level of TNFα and NO in sera of 30 patients with cerebral cysticercosis. Results: The level of TNFα in patients and normal individuals was (0.66±0.12)×10-3 ng/L and (0.118±0.051)×10-3 ng/L(P<0.01), while the level of NO in patients and normal indivivuals was (27.77±3.77)μmol/L and (50.04±6.23) μmol/L (P<0.01). Conclusion: The immune response of patients with cerebral cysticercosis was suppressed and their immune function was lower than that of normal individual.
, 百拇医药
Key words: cerebral cysticercosis; TNFα; nitric oxide; immunity
一氧化氮(NO)是一种重要的免疫介质，在抗寄生虫感染中发挥着重要的杀虫作用。自80年代内源性NO被发现以来，其生物学作用日益受到重视。而肿瘤坏死因子α(TNFα)是重要的免疫反应介质，TNFα可作用于巨噬细胞(Mψ)等诱导NO的产生并参与脑囊虫病肉芽肿的炎症反应及免疫反应。猪带绦虫囊尾蚴寄生可导致宿主的免疫应答受抑制，包括细胞免疫和体液免疫应答[1]，使宿主免疫功能受损害。为了了解脑囊虫病患者血清NO和TNFα水平，我们检测了30例脑囊虫病患者血清中TNFα和NO水平。
1 材料和方法
1.1 研究对象
30例临床诊断为脑囊虫病患者均为本院附属医院传染科住院病人，年龄14～67岁，男性19例，女性11例。均行CT或MRI检查，单纯脑囊虫病12例，脑型合并皮肌型18例。全部病人均无自身免疫性疾病和严重感染。于治疗前采血，收集血清保存于-20℃待检。健康对照组40份血清采自本院健康体检者。
, 百拇医药
1.2 血清TNFα测定(双抗夹心ELISA)
TNFα酶联免疫检测试剂盒由军事医学科学院提供。按说明书操作，用DG3022型酶标仪(华东电子管厂生产)在492nm波长下测OD值。以标准品绘制标准曲线查出待检样品的含量。
1.3 NO测定(比色法)
试剂盒由军事医学科学院提供。取血清0.1ml加0.15%硫酸锌0.6ml混匀；加双蒸水0.4ml，加4.4%氢氧化钠0.1ml混匀，冰上孵育60min,12 000r/min离心2min;取上清0.6ml加双蒸水0.4ml及0.3%璜胺0.1ml混匀，冰上孵育15min,加6mmol/L萘乙烯二胺盐酸盐0.1ml，室温放置1h；用VIS-723型分光光度计(上海第三分析仪器厂产品)，545nm比色，读OD值。用亚硝酸钠为标准品，绘制标准曲线，根据样品OD值，按标准曲线计算NO含量。
, 百拇医药
1.4 统计分析
样本均值的比较用t检验
2 结果
2.1 TNFα测定结果
30例脑囊虫病患者血清TNFα含量平均为(0.66±0.12)×10-3ng/L，极显著高于正常对照组的(0.118±0.051)×10-3ng/L(P<0.01)，见附表。
2.2 NO测定结果
脑囊虫病患者组血清中NO的含量平均为(27.77±3.77)μmol/L，显著低于正常对照组(50.04±6.23)μmol/L(P<0.01)。见附表。
附表 30例脑囊虫病患者血清TNFα和NO水平(
±s) 组别, 百拇医药
例数
TNFα
(10-3ng/L)
NO
(μmol/L)
患者组
30
0.66±0.12*
27.77±3.77*
对照组
40
0.118±0.051
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50.04±6.23
*与对照组比较，P<0.01.
3 讨论
NO是一种重要的防御性介质，对多种原虫和蠕虫具较强的抑制和杀伤作用，其抑制和杀伤效应主要依赖其细胞毒作用以及在对寄生虫的生化代谢和信息传导通路的障碍作用[2]。NO主要由Mψ和中性粒细胞产生，细胞因子中IFN-r,TNFα和IL-1等可作用于Mψ等细胞，通过增加其诱导型NO合成酶(induceble Nitric Oxide Synthase,iNOS)mRNA的表达而增加NO的产生[3]，故宿主血清的NO水平与其细胞因子水平及细胞免疫功能密切相关。猪带绦虫中绦期可产生一种RNA多肽，称中绦因子(metacestode factor,MF)，可抑制各种细胞因子的产生，使宿主IL-2、TNFα等分泌减少[4，5]。但迄今为止对囊虫病患者血清NO水平的研究甚少。本文检测了30例脑囊虫病病人的NO，发现其水平显著低于正常对照组的NO水平，说明囊尾蚴可抑制免疫效应细胞的活性，使效应介质NO产生减少，从而使其能逃避宿主免疫系统的杀灭。
, http://www.100md.com
TNFα主要由Mψ产生，参与囊虫病的免疫病理反应。猪带绦虫囊尾蚴可直接诱导单核-Mψ细胞产生TNFα，亦可由病灶周围浸润的单核-Mψ产生，在囊虫病免疫病理过程中起着重要作用。在鼠脑囊虫病检测其脑脊液TNFα与正常无异[6]。本研究结果表明，囊虫病患者虽然TNFα高于正常组，但却不能使机体产生足量的NO，这有别于其它寄生虫感染[7]，可能由于囊虫病患者SIL-2R水平异常增高，抑制免疫应答有关[5]，其机理尚待进一步研究。
综上所述，脑囊虫病患者机体免疫功能低下，机体不能有效杀灭囊尾蚴。而囊尾蚴寄生可导致宿主中枢神经系统器质性损害，引起癫痫等严重后果，故对囊虫病应早期发现，早期药物治疗以避免引起严重损害。
参考文献
1，李允鹤.蠕虫病免疫及免疫诊断〔M〕.第1版.江苏科技出版社，1991：279
, 百拇医药
2，Radi R,Beckman JS,Bush KM,et al.Peroxynitrite oxidation of sulfhydryls:The cytotoxic potential of superoxide and nitric oxide〔J〕.J Biol Chem,1991；288∶481
3，Seguin R,Mann BJ,Keller K,et al.The tumor necrosis factor alpha-stimulating region of galactose-inhibitable lectin of Entamoeba histolytica activates gamma interferon-primed macrophages for amebicidal activity mediated by nitric oxide〔J〕.Infect Immun,1997；65∶2522
4，Arechavaleta F,Molinari JL,Tato PA.Taenia solium metacestode factor nonspecifically inhibits cytokine production〔J〕.Parasitol Res,1998；84∶117
, 百拇医药
5，张唯哲，徐之杰，赵育莹，等.囊虫病患者IL-2及sIL-2R测定〔J〕.中国寄生虫病防治杂志，1997；10(2)∶97
6，Ostrosky ZL,Garcia ME,Rios C,et al.Humoral and cellular immune response within the subarachnoid space of patients with neurocysticercosis〔J〕.Arch Med Res,1996；27∶513
7，Lin JY,Chadee K.Macrophage cytotoxicity against Entamoeba histolytica trophozoites is mediated by nitric oxide from L-arginine〔J〕.J Immunol,1992；148∶3999, 百拇医药