卫氏和斯氏肺吸虫抗原对同源及异源肺吸虫病诊断价值的比较
作者：李调英 徐亮 曾明安
单位：李调英(四川省寄生虫病防治研究所， 四川 成都 610041)；徐亮(四川省寄生虫病防治研究所， 四川 成都 610041)；曾明安(四川省寄生虫病防治研究所， 四川 成都 610041)
关键词：
实用寄生虫病杂志000209 中图分类号：R383.2+3 文献标识码：A
文章编号：1005-2534(2000)02-0086-02
卫氏肺吸虫及斯氏肺吸虫，是我国的主要致病虫种。据现有资料报道，这两种肺吸虫病的血清学诊断，均是以同种抗原检测同源血清，而以异种抗原检测异源血清的效果，尚未见报道。我们用卫氏肺吸虫抗原(PWA)和斯氏肺吸虫抗原(PSA)分别包被于白色PVC孔底，以快速Dot-ELISA法同步交叉检测卫氏及斯氏肺吸虫病人血清抗体IgG，现将结果报告于后。
, 百拇医药
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 PWA和PSA的制备 从感染PW和PS的犬肺中获取成虫，以无菌生理盐水洗涤3次，无菌条件下干燥，按常规法研磨，去脂，加0.01%硫柳汞生理盐水冷浸，10 000r/min离心30min，上清即PWA，PSA。以考马斯亮兰法测蛋白含量为：PWA1.25mg/ml，PSA1.88mg/ml。
1.1.2 载体系作者研制的5×2孔白色PVC凹孔板载体[1]。
1.1.3 卫氏肺吸虫病人血清10份，由中国预防医科院寄生虫病研究所瞿靖琦教授惠赠；斯氏肺吸虫病人血清29份，采自重庆市开县确诊的治疗病人；血吸虫病人血清27份及华支睾吸虫病人血清17份，采自病原学确诊的病人；包虫病人血清16份，采自B超、影像学和ELISA证实的病人；健康人血清35份，系医院体检HBSAg阴性者。试验血清稀释度1∶10。
, 百拇医药
1.1.4 酶结合物 作者按文献[2]改良过碘酸钠法标记HRP—羊抗人IgG，工作浓度1∶600。
1.1.5 底物 4-氯-1-萘酚和H2O2。
1.2 方法
取预包被PWA和PSA的白色PVC板，加PBS100μl和待测血清10μl/孔，混匀，置37℃温育10min，以PBS洗涤1次，自来水快速洗5次，加酶结合物2滴/孔，如上温育、洗涤，加底物2滴/孔，如上温育5min，自来水冲洗终止反应，判读结果。凡PVC孔底无色或仅呈浅色环状为阴性，斑点呈浅灰至深紫色者均为阳性。按斑点浅灰色“+”，紫色为“++”，深紫色为“+++”记录反应强度。
2 结果
2.1 PWA和PSA检测同源及异源肺吸虫病人血清的敏感性及特异性
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试验结果显示，PWA和PSA检测同源及异源肺吸虫病人血清IgG，均有较好的敏感性及特异性，二者无显著差异(P>0.05)。表1。
表1.PWA和PSA检测同源及异源肺吸虫病人血清IgG结果 血清
检测
例数
PWA
PSA
阳性数
%
阳性数
%
卫氏肺吸虫病
, 百拇医药
10
10
100.0
10
100.0
斯氏肺吸虫病
29
28
96.6
29
100.0
血吸虫病
27
, 百拇医药
0
0
0
0
华支睾吸虫病
17
1
5.9
1
5.9
包虫病
16
1
6.3
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1
6.3
健康人
35
2
5.7
0
0
2.2 PWA和PSA检测同源及异源肺吸虫病人血清的反应强度
PWA检测卫氏肺吸虫病人血清，“+”占据10.0%(1/10)，“++”占90.0%(9/10)，检测斯氏肺吸虫病人血清，“-”占3.4%(1/29)，“+”占41.4%(12/29)，“++”占48.3%(14/29)，“+++”占6.9%(2/29)；PSA检测卫氏肺吸虫病人血清，“+”占70.0%(7/10)，“++”占30.0%(3/10)，检测斯氏肺吸虫病人血清，“+”占31.0%(9/29)，“++”占62.1%(18/29)，“+++”占6.9%(2/29)。
, 百拇医药
2.3 PWA和PSA检测同源及异源肺吸虫病人血清的重现性
于首次检测后相距15天和25天，分别由2人重复检测卫氏及斯氏肺吸虫病人血清各10份，健康人血清10份。重现率：PWA检测，卫氏血清第1次100%，第2次90%，斯氏血清第1、2次均为100%。PSA检测卫氏血清第1次100%，第2次90%，斯氏血清第1、2次均为100%。健康人血清用PWA和PSA检测1、2次重复均为阴性。斑点反应强度的一致性：两次重复基本一致。
2.4 PWA和PSA检测不同滴度的同源及异源肺吸虫病人血清的效果 (见表2)
分别检测斯氏和卫氏肺吸虫病人血清各5份，PWA和PSA无论是检测同源及异源肺吸虫病人血清，其检出率及斑点反应强度，均随血清稀释度升高而降低。表2 PWA和PSA检测不同滴度的同源及异源肺吸虫病人血清的效果 抗原
反应
, 百拇医药
强度
卫氏肺吸虫病人血清稀释度
斯氏肺吸虫病人血清稀释度
1∶10
1∶20
1∶40
1∶80
1∶160
1∶10
1∶20
1∶40
1∶80
1∶160
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PWA
—
3
4
5
1
1
3
4
+
3
1
1
2
, 百拇医药
3
3
2
1
5
2
1
3
1
1
检出率
5/5
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5/5
2/5
1/5
0/5
5/5
4/5
4/5
2/5
1/5
PSA
—
2
5
, 百拇医药 5
1
1
+
2
5
3
1
2
2
3
3
3
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3
3
2
1
2
1
检出率
5/5
5/5
3/5
0/5
0/5
5/5
, 百拇医药
5/5
5/5
4/5
4/5
3 讨论
PWA和PSA检测同源肺吸虫病人血清IgG的敏感性及特异性已肯定[3，4]。PWA和PSA对异源血清的检测效果又如何，一种抗原能否作为两种肺吸虫病的诊断抗原，为此，我们用白色PVS快速Dot-ELISA法进行了实验探索，结果证实，PWA对同源及异源肺吸虫病人血清IgG检测的敏感性为100%和96.6%，PSA检测的敏感性均为100%。健康人血清的特异性分别为94.3%和100.0%。PWA，PSA对血吸虫病人无交叉反应，对华支睾吸虫病人和包虫病人的交叉阳性率均分别为5.9%和6.3%(表1)，与文献报告用同种抗原检测同源血清的效果基本一致[3，4]，表明PWA和PSA无论是同源或异源肺吸虫病人血清反应，都有较好的敏感性、特异性。重复试验效果良好，仅有1份卫氏血清在用PWA和PWA第2次重复检测时为阴性，这份血清在首次检测及第1次重复检测时均是“+”偏弱，说明这份血清的特异活性抗体可能本来就较低，加之随着存放时间延长和试验中血清反复冻融而导致活性抗体再度下降[2]。不同滴度血清试验表明，PWA和PSA无论是与同源或异源肺吸虫病人血清反应，其检出率和反应强度均随血清稀释度升高而下降，所以，我们认为，无论是以PWA或是以PSA作诊断抗原，以每次温育10min的快速Dot-ELISA法作检测，被检血清的稀释度以1∶10最为适宜。尽管PWA和PSA都是与同源肺吸虫病人血清的反应强度优于异源血清，但由于健康人血清94.3%～100%的斑点均无颜色，所以，对被测血清的阳性判断不会因斑点反应强弱而受影响。PW和PS虽然是截然不同的两种肺吸虫，但我们的实验证实，PWA和PSA交叉检测卫氏及斯氏肺吸虫病人血清，均具有较高的敏感性及特异性，这说明PW和PS有很多共同的特异抗原组份，决定了它们能与异源肺吸虫病人血清IgG有效的特异结合，所以我们认为PWA和PSA作为异源肺吸虫病的诊断抗原也是有效的。
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参考文献：
[1] 曾明安，屈振麒，黄 杰，等.诊断华枝睾吸虫病的FAST-Dot-ELISA试剂盒的建立与应用[J].实用寄生虫病杂志，1993，1(4)：35.
[2] 蒋成淦.酶免疫测定法[M].北京：人民卫生出版社，1984.45.
[3] 何金戈，曾明安，李调英，等.白色PVC载体Dot-ELISA诊断肺吸虫病的进一步研究[J].实用寄生虫病杂志，1998，6(3)：127.
[4] 裘丽珠，薛海筹，朱霞霞，等.斑点-ELISA法在肺吸虫病诊断中的应用[J].中国人兽共患病杂志，1991，7(1)：60., 百拇医药
单位：李调英(四川省寄生虫病防治研究所， 四川 成都 610041)；徐亮(四川省寄生虫病防治研究所， 四川 成都 610041)；曾明安(四川省寄生虫病防治研究所， 四川 成都 610041)
关键词：
实用寄生虫病杂志000209 中图分类号：R383.2+3 文献标识码：A
文章编号：1005-2534(2000)02-0086-02
卫氏肺吸虫及斯氏肺吸虫，是我国的主要致病虫种。据现有资料报道，这两种肺吸虫病的血清学诊断，均是以同种抗原检测同源血清，而以异种抗原检测异源血清的效果，尚未见报道。我们用卫氏肺吸虫抗原(PWA)和斯氏肺吸虫抗原(PSA)分别包被于白色PVC孔底，以快速Dot-ELISA法同步交叉检测卫氏及斯氏肺吸虫病人血清抗体IgG，现将结果报告于后。
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1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 PWA和PSA的制备 从感染PW和PS的犬肺中获取成虫，以无菌生理盐水洗涤3次，无菌条件下干燥，按常规法研磨，去脂，加0.01%硫柳汞生理盐水冷浸，10 000r/min离心30min，上清即PWA，PSA。以考马斯亮兰法测蛋白含量为：PWA1.25mg/ml，PSA1.88mg/ml。
1.1.2 载体系作者研制的5×2孔白色PVC凹孔板载体[1]。
1.1.3 卫氏肺吸虫病人血清10份，由中国预防医科院寄生虫病研究所瞿靖琦教授惠赠；斯氏肺吸虫病人血清29份，采自重庆市开县确诊的治疗病人；血吸虫病人血清27份及华支睾吸虫病人血清17份，采自病原学确诊的病人；包虫病人血清16份，采自B超、影像学和ELISA证实的病人；健康人血清35份，系医院体检HBSAg阴性者。试验血清稀释度1∶10。
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1.1.4 酶结合物 作者按文献[2]改良过碘酸钠法标记HRP—羊抗人IgG，工作浓度1∶600。
1.1.5 底物 4-氯-1-萘酚和H2O2。
1.2 方法
取预包被PWA和PSA的白色PVC板，加PBS100μl和待测血清10μl/孔，混匀，置37℃温育10min，以PBS洗涤1次，自来水快速洗5次，加酶结合物2滴/孔，如上温育、洗涤，加底物2滴/孔，如上温育5min，自来水冲洗终止反应，判读结果。凡PVC孔底无色或仅呈浅色环状为阴性，斑点呈浅灰至深紫色者均为阳性。按斑点浅灰色“+”，紫色为“++”，深紫色为“+++”记录反应强度。
2 结果
2.1 PWA和PSA检测同源及异源肺吸虫病人血清的敏感性及特异性
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试验结果显示，PWA和PSA检测同源及异源肺吸虫病人血清IgG，均有较好的敏感性及特异性，二者无显著差异(P>0.05)。表1。
表1.PWA和PSA检测同源及异源肺吸虫病人血清IgG结果 血清
检测
例数
PWA
PSA
阳性数
%
阳性数
%
卫氏肺吸虫病
, 百拇医药
10
10
100.0
10
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斯氏肺吸虫病
29
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96.6
29
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血吸虫病
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0
0
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华支睾吸虫病
17
1
5.9
1
5.9
包虫病
16
1
6.3
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1
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健康人
35
2
5.7
0
0
2.2 PWA和PSA检测同源及异源肺吸虫病人血清的反应强度
PWA检测卫氏肺吸虫病人血清，“+”占据10.0%(1/10)，“++”占90.0%(9/10)，检测斯氏肺吸虫病人血清，“-”占3.4%(1/29)，“+”占41.4%(12/29)，“++”占48.3%(14/29)，“+++”占6.9%(2/29)；PSA检测卫氏肺吸虫病人血清，“+”占70.0%(7/10)，“++”占30.0%(3/10)，检测斯氏肺吸虫病人血清，“+”占31.0%(9/29)，“++”占62.1%(18/29)，“+++”占6.9%(2/29)。
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2.3 PWA和PSA检测同源及异源肺吸虫病人血清的重现性
于首次检测后相距15天和25天，分别由2人重复检测卫氏及斯氏肺吸虫病人血清各10份，健康人血清10份。重现率：PWA检测，卫氏血清第1次100%，第2次90%，斯氏血清第1、2次均为100%。PSA检测卫氏血清第1次100%，第2次90%，斯氏血清第1、2次均为100%。健康人血清用PWA和PSA检测1、2次重复均为阴性。斑点反应强度的一致性：两次重复基本一致。
2.4 PWA和PSA检测不同滴度的同源及异源肺吸虫病人血清的效果 (见表2)
分别检测斯氏和卫氏肺吸虫病人血清各5份，PWA和PSA无论是检测同源及异源肺吸虫病人血清，其检出率及斑点反应强度，均随血清稀释度升高而降低。表2 PWA和PSA检测不同滴度的同源及异源肺吸虫病人血清的效果 抗原
反应
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强度
卫氏肺吸虫病人血清稀释度
斯氏肺吸虫病人血清稀释度
1∶10
1∶20
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PWA
—
3
4
5
1
1
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4
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1
2
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5/5
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5/5
2/5
1/5
0/5
5/5
4/5
4/5
2/5
1/5
PSA
—
2
5
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1
1
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3 讨论
PWA和PSA检测同源肺吸虫病人血清IgG的敏感性及特异性已肯定[3，4]。PWA和PSA对异源血清的检测效果又如何，一种抗原能否作为两种肺吸虫病的诊断抗原，为此，我们用白色PVS快速Dot-ELISA法进行了实验探索，结果证实，PWA对同源及异源肺吸虫病人血清IgG检测的敏感性为100%和96.6%，PSA检测的敏感性均为100%。健康人血清的特异性分别为94.3%和100.0%。PWA，PSA对血吸虫病人无交叉反应，对华支睾吸虫病人和包虫病人的交叉阳性率均分别为5.9%和6.3%(表1)，与文献报告用同种抗原检测同源血清的效果基本一致[3，4]，表明PWA和PSA无论是同源或异源肺吸虫病人血清反应，都有较好的敏感性、特异性。重复试验效果良好，仅有1份卫氏血清在用PWA和PWA第2次重复检测时为阴性，这份血清在首次检测及第1次重复检测时均是“+”偏弱，说明这份血清的特异活性抗体可能本来就较低，加之随着存放时间延长和试验中血清反复冻融而导致活性抗体再度下降[2]。不同滴度血清试验表明，PWA和PSA无论是与同源或异源肺吸虫病人血清反应，其检出率和反应强度均随血清稀释度升高而下降，所以，我们认为，无论是以PWA或是以PSA作诊断抗原，以每次温育10min的快速Dot-ELISA法作检测，被检血清的稀释度以1∶10最为适宜。尽管PWA和PSA都是与同源肺吸虫病人血清的反应强度优于异源血清，但由于健康人血清94.3%～100%的斑点均无颜色，所以，对被测血清的阳性判断不会因斑点反应强弱而受影响。PW和PS虽然是截然不同的两种肺吸虫，但我们的实验证实，PWA和PSA交叉检测卫氏及斯氏肺吸虫病人血清，均具有较高的敏感性及特异性，这说明PW和PS有很多共同的特异抗原组份，决定了它们能与异源肺吸虫病人血清IgG有效的特异结合，所以我们认为PWA和PSA作为异源肺吸虫病的诊断抗原也是有效的。
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参考文献：
[1] 曾明安，屈振麒，黄 杰，等.诊断华枝睾吸虫病的FAST-Dot-ELISA试剂盒的建立与应用[J].实用寄生虫病杂志，1993，1(4)：35.
[2] 蒋成淦.酶免疫测定法[M].北京：人民卫生出版社，1984.45.
[3] 何金戈，曾明安，李调英，等.白色PVC载体Dot-ELISA诊断肺吸虫病的进一步研究[J].实用寄生虫病杂志，1998，6(3)：127.
[4] 裘丽珠，薛海筹，朱霞霞，等.斑点-ELISA法在肺吸虫病诊断中的应用[J].中国人兽共患病杂志，1991，7(1)：60., 百拇医药