猪睾丸切除对舌下腺表皮生长因子表达的影响
作者：程计林 宋胜利* 黄文胜** 牛正先*** 黄孝立*** 杜晓光*** 冯百芳
单位：程计林 宋胜利* 黄文胜** 牛正先*** 黄孝立*** 杜晓光*** 冯百芳 北京医科大学人民医院肝病研究所，北京 100044； *河南省焦作电厂职工医院，**河南省肉联生化制药厂；***河南医科大学第一附属医院
关键词：睾丸切除；舌下腺；表皮生长因子(EGF)
解剖学报990222 【摘要】 目的 观察睾丸切除后猪舌下腺表皮生长因子(EGF)的改变。 方法 应用免疫组织化学ABC方法。 结果 阉猪和未阉猪舌下腺组织EGF的免疫染色颗粒均存在于舌下腺纹状管上皮细胞，其阳性率、免疫组织化学染色强度及在腺体细胞的分布均无显著性差异(χ2=0,P=1)。 结论 睾丸缺失对舌下腺组织EGF表达无明显影响。
, 百拇医药
THE EFFECT OF ORCHIECTOMY ON THE EXPRESSION OF
EPIDERMAL GROWTH FACTOR IN PIG
Cheng Jilin△, Song Shengli*, Huang Wensheng**, Niu Zhengxian***，Huang Xiaoli***, Du Xiaoguang***, Feng Baifang
(Institution of Hepatology, The People's Hospital, of Beijing Medical University, Beijing; *The Worker's Hospital of ElectricFactory of Jiaozuo; **Biochemical Pharmaceutical Factory of Henan Zhengzhou meat union; ***Henan Medical University.)
, 百拇医药
【Abstract】 Objective To study the effect of orchiectomy on expression of epidermal growth factor(EGF) in sublingual gland of hog and pig. Method Using immunohistochemical ABC method. Results EGF-positive granule existed in cytoplasm of the epithelial cell of striated duct of sublingual gland in hog and pig, and there were no significative difference(χ2=0,P=1) of EGF immunostaining intensity and distribution between them. Conclusion The absence of testis do not exert an influence on EGF expression in sublingual gland of hog.
, 百拇医药
【Key words】 Orchiectomy; Sublingual gland; EGF
表皮生长因子(epidermal growth factor, EGF)主要来源于人或动物的颌下腺[1，2]，具有促进上皮细胞生长、抑制胃酸分泌和细胞保护等多种生物功能。1974年Cohen[3]发现雄激素可以促进鼠颌下腺EGF的合成和储存，Barkar[4]甚至把颌下腺EGF浓度作为测定雄激素生物活性的一个灵敏指标。为了探讨睾丸切除对猪舌下腺组织ECG的影响，我们应用免疫组织化学ABC方法对阉猪EGF的表达进行了研究。
材料和方法
1.实验标本的制备
阉猪42头，未阉雄猪28头。年龄1～1.5岁，体重100～150kg，均以混合饲料喂养。屠宰后，立即取出舌下腺，10%福尔马林固定，常规石蜡包埋、切片(厚3～5μm)，分别作HE染色和免疫组织化学染色。
, http://www.100md.com
2.免疫组织化学染色
采用免疫组织化学ABC法。所用抗体和稀释度如下：第1抗体为兔抗人EGF免疫血清(由中国医学科学院基础所生化室赠)，工作浓度为1：50，置湿盒中室温1h。第2抗体为生物素标记的羊抗兔抗血清，稀释度1：200，37℃温箱内孵育30min。ABC复合物(购于华美生物工程公司，Vector产品)，稀释度：1：200，37℃1h。反应后用H2O2-DAB显色，常规脱水、透明和封片。在Olympus IM型显微镜下观察并摄片。
3.对照
以PBS缓冲液替代第一抗体作为阴性对照，以不加任何试剂直接显色为空白对照，以男性成人颌下腺切片同时染色作为阳性对照。
结果和讨论
42头阉猪和28头未阉雄猪舌下腺组织中均见EGF表达，阴性对照和空白对照结果均为阴性，阳性对照显示颌下腺颗粒曲管细胞有明显的棕黄色阳性颗粒。阉猪和未阉雄猪2组间EGF阳性率和免疫染色强度无显著性差异(附表，χ2=0,P=1)。光镜下见舌下腺实质主要为粘液性腺泡，导管包括纹状管、小叶间导管和总导管。免疫组织化学染色显示：阉猪和未阉猪EGF阳性细胞均只见于舌下腺组织的纹状管上皮细胞。反应产物呈黄色和棕黄色颗粒，主要分布于细胞浆，在细胞边缘免疫染色较深；而细胞核阴性。腺泡细胞为阴性反应。
, 百拇医药
附表 阉猪和未阉雄猪舌下腺EGF的表达
Table Expression of EGF in sublingual gland
of hog and male pig 标本来源
specimen source
例数
cases
EGF阳性例
EGF-postive numbers
阉猪(hog)
42
, 百拇医药 42
未阉雄猪(male pig)
28
28
注：两组间比较 χ2=0,P=1
Notice:Compard two groups χ2=0,P=1
应用抗人EGF抗体检测出猪EGF的表达，提示猪和人EGF之间存在交叉抗原。与已发现的抗鼠EGF抗体与人EGF之间有交叉反应的免疫染色相似[4]。一般认为，人唾液EGF主要来源于颌下腺，与小鼠唾液EGF来源一致[5]。已有许多研究发现表皮生长因子与性激素之间存在相互影响的关系[3,4]。但是，芬兰学者Thesff[5]发现EGF在人腮腺唾液、全唾液、和颌下腺加舌下腺唾液中的平均浓度分别为2704ng/L、864ng/L和357ng/L，EGF的含量与性别无关。本研究也发现，睾丸切除对猪舌下腺EGF的表达无明显影响。这与小鼠唾液EGF对雄激素的依赖性不吻合，可能猪和鼠EGF在调节上存在差异。
, 百拇医药
图1 人颌下腺颗粒曲管细胞(▲)EGF阳性，阳性对照 ×400
Fig.1 Showing that the granular convoluted tubule cells of human submaxillary gland (▲) presented EGF positive, as the positive control. ×400
图2 阉猪舌下腺纹状管上皮细胞(▲)EGF阳性，腺泡细胞阴性(↑) ×400
Fig.2 Showing that the epithelial cells of striated duct of hog sublingual gland(▲) presented EGF positive, the acinar cells (↑) negative. ×400
, 百拇医药
图3 未阉猪舌下腺纹状管上皮细胞(▲)EGF阳性，腺泡细胞阴性(↑) ×400
Fig.3 Showing that the epithelial cells of striated duct of pig sublingual gland (▲) presented EGF positive, the acinar cells (↑) negative. ×400
收稿1998-01 修回1998-06 参考文献
[1]Gregory H. Isolation and structure of urogastrone and its relationship to epidermal growth factor. Nature, 1975, 257(5524):325
[2]Kirkegard P, Olsen PS, Nexo E, et al. Effect of vasoactive intestinal polypeptide and somatostatin on secretion of epidermal growth factor bicarbonate from Brunner gland. Gut, 1984,25(11):1225
, 百拇医药
[3]Cohen S, Savage CR Jr. Recent studies on the chemistry and biology of epidermal growth factor. Recent Prog Horm Res, 1974, 30(2):551
[4]Barka J. Biologically active polypeptides in submandibular glands. J Histochem Cytochem, 1980, 28(8):836
[5]Thesleff L, Viinikka L, Saxen E, et al. The parotid gland is the main source of human salivary epidermal growth factor (EGF). Life Sci, 1988, 43(1):13, 百拇医药
单位：程计林 宋胜利* 黄文胜** 牛正先*** 黄孝立*** 杜晓光*** 冯百芳 北京医科大学人民医院肝病研究所，北京 100044； *河南省焦作电厂职工医院，**河南省肉联生化制药厂；***河南医科大学第一附属医院
关键词：睾丸切除；舌下腺；表皮生长因子(EGF)
解剖学报990222 【摘要】 目的 观察睾丸切除后猪舌下腺表皮生长因子(EGF)的改变。 方法 应用免疫组织化学ABC方法。 结果 阉猪和未阉猪舌下腺组织EGF的免疫染色颗粒均存在于舌下腺纹状管上皮细胞，其阳性率、免疫组织化学染色强度及在腺体细胞的分布均无显著性差异(χ2=0,P=1)。 结论 睾丸缺失对舌下腺组织EGF表达无明显影响。
, 百拇医药
THE EFFECT OF ORCHIECTOMY ON THE EXPRESSION OF
EPIDERMAL GROWTH FACTOR IN PIG
Cheng Jilin△, Song Shengli*, Huang Wensheng**, Niu Zhengxian***，Huang Xiaoli***, Du Xiaoguang***, Feng Baifang
(Institution of Hepatology, The People's Hospital, of Beijing Medical University, Beijing; *The Worker's Hospital of ElectricFactory of Jiaozuo; **Biochemical Pharmaceutical Factory of Henan Zhengzhou meat union; ***Henan Medical University.)
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【Abstract】 Objective To study the effect of orchiectomy on expression of epidermal growth factor(EGF) in sublingual gland of hog and pig. Method Using immunohistochemical ABC method. Results EGF-positive granule existed in cytoplasm of the epithelial cell of striated duct of sublingual gland in hog and pig, and there were no significative difference(χ2=0,P=1) of EGF immunostaining intensity and distribution between them. Conclusion The absence of testis do not exert an influence on EGF expression in sublingual gland of hog.
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【Key words】 Orchiectomy; Sublingual gland; EGF
表皮生长因子(epidermal growth factor, EGF)主要来源于人或动物的颌下腺[1，2]，具有促进上皮细胞生长、抑制胃酸分泌和细胞保护等多种生物功能。1974年Cohen[3]发现雄激素可以促进鼠颌下腺EGF的合成和储存，Barkar[4]甚至把颌下腺EGF浓度作为测定雄激素生物活性的一个灵敏指标。为了探讨睾丸切除对猪舌下腺组织ECG的影响，我们应用免疫组织化学ABC方法对阉猪EGF的表达进行了研究。
材料和方法
1.实验标本的制备
阉猪42头，未阉雄猪28头。年龄1～1.5岁，体重100～150kg，均以混合饲料喂养。屠宰后，立即取出舌下腺，10%福尔马林固定，常规石蜡包埋、切片(厚3～5μm)，分别作HE染色和免疫组织化学染色。
, http://www.100md.com
2.免疫组织化学染色
采用免疫组织化学ABC法。所用抗体和稀释度如下：第1抗体为兔抗人EGF免疫血清(由中国医学科学院基础所生化室赠)，工作浓度为1：50，置湿盒中室温1h。第2抗体为生物素标记的羊抗兔抗血清，稀释度1：200，37℃温箱内孵育30min。ABC复合物(购于华美生物工程公司，Vector产品)，稀释度：1：200，37℃1h。反应后用H2O2-DAB显色，常规脱水、透明和封片。在Olympus IM型显微镜下观察并摄片。
3.对照
以PBS缓冲液替代第一抗体作为阴性对照，以不加任何试剂直接显色为空白对照，以男性成人颌下腺切片同时染色作为阳性对照。
结果和讨论
42头阉猪和28头未阉雄猪舌下腺组织中均见EGF表达，阴性对照和空白对照结果均为阴性，阳性对照显示颌下腺颗粒曲管细胞有明显的棕黄色阳性颗粒。阉猪和未阉雄猪2组间EGF阳性率和免疫染色强度无显著性差异(附表，χ2=0,P=1)。光镜下见舌下腺实质主要为粘液性腺泡，导管包括纹状管、小叶间导管和总导管。免疫组织化学染色显示：阉猪和未阉猪EGF阳性细胞均只见于舌下腺组织的纹状管上皮细胞。反应产物呈黄色和棕黄色颗粒，主要分布于细胞浆，在细胞边缘免疫染色较深；而细胞核阴性。腺泡细胞为阴性反应。
, 百拇医药
附表 阉猪和未阉雄猪舌下腺EGF的表达
Table Expression of EGF in sublingual gland
of hog and male pig 标本来源
specimen source
例数
cases
EGF阳性例
EGF-postive numbers
阉猪(hog)
42
, 百拇医药 42
未阉雄猪(male pig)
28
28
注：两组间比较 χ2=0,P=1
Notice:Compard two groups χ2=0,P=1
应用抗人EGF抗体检测出猪EGF的表达，提示猪和人EGF之间存在交叉抗原。与已发现的抗鼠EGF抗体与人EGF之间有交叉反应的免疫染色相似[4]。一般认为，人唾液EGF主要来源于颌下腺，与小鼠唾液EGF来源一致[5]。已有许多研究发现表皮生长因子与性激素之间存在相互影响的关系[3,4]。但是，芬兰学者Thesff[5]发现EGF在人腮腺唾液、全唾液、和颌下腺加舌下腺唾液中的平均浓度分别为2704ng/L、864ng/L和357ng/L，EGF的含量与性别无关。本研究也发现，睾丸切除对猪舌下腺EGF的表达无明显影响。这与小鼠唾液EGF对雄激素的依赖性不吻合，可能猪和鼠EGF在调节上存在差异。
, 百拇医药
图1 人颌下腺颗粒曲管细胞(▲)EGF阳性，阳性对照 ×400
Fig.1 Showing that the granular convoluted tubule cells of human submaxillary gland (▲) presented EGF positive, as the positive control. ×400
图2 阉猪舌下腺纹状管上皮细胞(▲)EGF阳性，腺泡细胞阴性(↑) ×400
Fig.2 Showing that the epithelial cells of striated duct of hog sublingual gland(▲) presented EGF positive, the acinar cells (↑) negative. ×400
, 百拇医药
图3 未阉猪舌下腺纹状管上皮细胞(▲)EGF阳性，腺泡细胞阴性(↑) ×400
Fig.3 Showing that the epithelial cells of striated duct of pig sublingual gland (▲) presented EGF positive, the acinar cells (↑) negative. ×400
收稿1998-01 修回1998-06 参考文献
[1]Gregory H. Isolation and structure of urogastrone and its relationship to epidermal growth factor. Nature, 1975, 257(5524):325
[2]Kirkegard P, Olsen PS, Nexo E, et al. Effect of vasoactive intestinal polypeptide and somatostatin on secretion of epidermal growth factor bicarbonate from Brunner gland. Gut, 1984,25(11):1225
, 百拇医药
[3]Cohen S, Savage CR Jr. Recent studies on the chemistry and biology of epidermal growth factor. Recent Prog Horm Res, 1974, 30(2):551
[4]Barka J. Biologically active polypeptides in submandibular glands. J Histochem Cytochem, 1980, 28(8):836
[5]Thesleff L, Viinikka L, Saxen E, et al. The parotid gland is the main source of human salivary epidermal growth factor (EGF). Life Sci, 1988, 43(1):13, 百拇医药