BXSB小鼠血清抗DNA抗体水平及其对淋巴细胞转化的影响
作者：梅林 汪静雪 邓鸿业 丁桂凤 范少光
单位：梅林(北京医科大学生理学系)；汪静雪(北京医科大学生理学系)；邓鸿业(北京医科大学免疫学系，北京100083)；丁桂凤(北京医科大学免疫学系，北京100083)；范少光(北京医科大学生理学系)
关键词：系统性红斑狼疮；抗DNA抗体；淋巴细胞转化
基础医学与临床000109
摘要：用酶联免疫吸附剂测定法(ELISA)和3H-胸腺嘧啶核苷掺入法，观察一种自发性系统性红斑狼疮(SLE)好发小鼠(BXSB小鼠)在不同月龄时，血中抗DNA抗体水平的变化，并观察该血清对正常LACA小鼠淋巴细胞转化的影响。结果显示，自3月龄起，BXSB雄性鼠血中的抗DNA抗体水平开始升高，4月龄上升至高峰，5月龄仍保持较高水平，各月龄BXSB血清与对照血清相比，P<0.05(ANOVA)。同时，该血清对正常LACA小鼠淋巴细胞转化也有抑制作用，以4月龄血清的抑制作用最大。如果将同一只小鼠血清抗DNA抗体水平的变化与该血清对淋巴细胞转化的影响做回归和相关分析，发现两者有明显的正相关关系(r=0.232，n=53， P<0.05)。提示雄性BXSB小鼠可能从3月龄开始表现SLE。发病后，血清中产生某种能够抑制淋巴细胞转化的物质，它的产生与抗DNA抗体有平行关系。
, http://www.100md.com
中图分类号：R331.1 文献标识码：A
文章编号：1001-6325(2000)01-0034-04
The level of the anti-DNA antibody in the serum of BXSB mouse and the effect on lymphocyte proliferation
MEI Lin，WANG Jing-xue
(Department of Physiology)
DENG Hong-ye
(Department of Immunology，Beijing Medical University，Beijing 100083， China)
, http://www.100md.com
Abstract:The level of the anti-DNA antibody in BXSB serum and the effect of BXSB serum on lymphocyte proliferation in normal mouse were observed by using enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA) and 3H -thymidine incorporation .The level of anti-DNA antibody in male BXSB serum rose from the age of 3 month and reached to the highest value at the age of 4 month.Although there were a little drop in the antibody level at the age of 5 month， it was still higher than the one of control group(P=0.032， BXSB serum vs control serum，ANOVA).The experiment also showed that there was a dramatic negative correlation between the level of anti-DNA antibody and the effect of the same portion of BXSB serum on normal lymphocyte proliferation(r=0.232， n=53， P<0.05).It was concluded that the male BXSB mouse may manifest SLE from the 3rd month after birth.There generated in the SLE serum some substances which not only showed the inhibitory effect on normal lymphocyte proliferation but also were parallel，in its effect，with the level of anti-DNA antibody.
, http://www.100md.com
Key words：systemic lupus erythematosus ；anti-DNA antibody ； lymphocyte proliferation
系统性红斑狼疮(SLE)是一种病因不明、多器官多系统受损且反复发作的自身免疫性疾病。病情大多进行性发展，目前尚无根治方法。在SLE的多种免疫学检查中，最有助于SLE确诊的指标是抗DNA抗体的检查。检测血中该抗体、尤其是抗双链DNA抗体，是有助于证实SLE临床诊断的相对特异性指标[1]，而且抗体滴度随病情的变化而变化，当疾病处于活动状态时，抗体滴度升高，疾病相对静止时，抗体滴度下降[1]。本实验选用一种具有遗传性、自发性SLE的BXSB小鼠，测定其不同月龄时血清中的抗DNA抗体水平，同时观察这种血清对正常淋巴细胞转化(简称淋转，以下同)的影响。
1 材料与方法
1.1 动物及试剂
, 百拇医药
BXSB雄性小鼠系本校第三临床医学院皮肤科陈学荣教授自美国Jackson实验室引进、免疫学系动物实验室繁殖饲养并提供；雄性LACA小鼠、雄性Balb/c小鼠，均购自本校实验动物中心。小牛胸腺DNA购自Sigma公司(美国)；辣根过氧化物酶标记的羊抗小鼠IgG(HRP-IgG)购自Jackson实验室(美国)；刀豆蛋白A(ConA)购自Sigma；RPMI 1640 培养购自Life Technologies Inc(美国)；3H-胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)购自中国原子能研究所。
1.2 小鼠血清制备
将小鼠用乙醚轻度麻醉，分别在两侧眼内眦静脉取血，每侧一次取血100mL。置4℃，4h，离心2 000r/min，4℃ ，10min。取上清，分别用于测定抗体和做淋转实验。
1.3血清抗DNA抗体的ELISA检测
, 百拇医药 按照文献[2，3]的方法并稍加改进。(1)将DNA用包被缓冲液稀释为4.0mg/100mL，在96孔酶标板(美国Costar)的每孔内加100mL，37℃ 温育3h。加洗涤液110mL/well，置3min后弃去，共3次。(2)将BXSB雄性小鼠血清用稀释液分别作1:100、1:400和1:1600稀释，在每孔内加100mL，37℃ 温育3h后，洗涤同上。(3)用稀释液将二抗(HRP-IgG)稀释为1:4000，每孔内加100mL，37℃温育3h，洗涤同上。(4)每孔内加邻苯二胺(OPD)底物溶液100mL，37℃ 置30min，用2N H2SO4(50mL/well)终止反应。(5)在酶标仪上测定492nm下的光密度(OD)值。每块培养板设置空白对照(不加DNA，不加血清，不加二抗)、已知阴性血清对照(正常Balb/c小鼠血清)、已知阳性血清对照(雄性BXSB 5月龄)和待测血清组(不同月龄BXSB 小鼠) 。每一例实验数据来自三复孔。以Balb/c小鼠血清OD值为对照(100%)，用“待测血清OD值是对照血清OD值的百分之几”作为抗体水平变化百分率，即：
, 百拇医药
1.4 淋巴细胞转化实验
取正常LACA雄性小鼠肠系膜淋巴结，置于盛有Hanks液的培养皿中，压碎研磨，经400目尼龙网过滤，离心(200 r/min ， 10min)弃上清。再用Hanks 液洗2次。以RPMI 1640 液制成细胞悬液(3×106/mL)。在96孔细胞培养板中加入不同稀释度(1:20、1:40、1:80)的Balb/c血清或待测血清(100mL/孔)，并加细胞悬液(100mL/well)和ConA(0.4mg/well)，置于CO2 孵育箱中(37℃，5% CO2)培养48h。收获前6h ，加3H-TdR 0.2mCi/孔(或7.4KBq)收集细胞于玻璃纤维滤纸上，烤干后置闪烁液中，用b-液闪仪测定cpm值。以Balb/c血清的淋转cpm值为对照(100%)，用“待测血清的淋转cpm值是对照血清的淋转cpm值的百分之几”作为淋转变化百分率，即：
, 百拇医药
将出生后满一个月的第一天(称为1月龄，以下类推)的BXSB小鼠，经内眦静脉取血，以后每月取血一次，测血清抗DNA抗体和做淋转实验。
1.5 统计学处理
实验结果以均值±标准误(x±Sx)表示。两组间数据比较采用t检验，多组间比较采用ANOVA。
2 结果
2.1 BXSB 雄性小鼠血清抗DNA抗体的ELISA测定
自3月龄起，血清抗体达到有显著性意义的水平(1月龄和2月龄无意义)，4月龄时，抗体水平升高的幅度最大，5月龄时，抗体仍持较高水平，尤以1:100的血清稀释度变化最明显。各月龄BXSB血清与对照组血清相比，P<0.05(ANOVA)。见表1。
2.2 BXSB 血清对正常淋巴细胞转化的影响
, 百拇医药
在测血清抗DNA抗体的同时，将同一份血清与正常LACA小鼠肠系膜淋巴结细胞共同培养，以ConA刺激淋巴细胞转化。结果表明：3、4、5月龄的BXSB血清对淋转有不同程度的抑制作用，其中以4月龄鼠血清的抑制作用最大，见表2。
2.3 血清抗DNA抗体水平与该血清对正常淋转影响之间的关系
如果以血清抗DNA抗体水平变化的百分率为自变量，以同一份血清对正常淋巴细胞转化影响的百分率为应变量作直线回归及相关分析，可得直线回归方程：y= 0.938-0.074x， r=0.232(n=53，P<0.05 ， 图1)。
表1 不同月龄BXSB小鼠三种稀释度血清抗DNA抗体水平的变化
Table 1 The change of anti-DNA antibody level in different serum dilution from BXSB
, 百拇医药
mouse of different month of age(x±Sx) month
n
1:100
n
1:400
n
1:1600
control
BXSB
control
BXSB
control
, http://www.100md.com
BXSB
3
5
100±5
124±11*
6
100±11
112±4
6
100±29
95±10
4
6
, 百拇医药
100±7
212±33***
6
100±9
176±30**
6
100±8
121±27
5
6
100±6
177±37△
, http://www.100md.com
6
100±4
149±39
6
100±4
164±39
*t=1.986，P<0.05； △t=2.053， P<0.05；**t=2.417， P<0.025， ***t=3.326，P<0.005 compared with control respectively.(n):the number of animal in each group.
3 讨论
本实验第一部分的结果表明，BXSB雄性小鼠出生后第1～2个月，血中可能没有抗DNA抗体(或含量很少)。从第3个月起，利用本实验建立的ELISA，已经能够测出血清抗体的升高，第4个月时，抗体水平升高到最大值，第5个月有所下降但仍高于3月龄数值(表1)。5个月之后抗体水平如何变化？因为动物相继死亡(平均存活5.5个月)无法继续观查。BXSB是SLE好发的小鼠品系。从文献看，它发病后有多种免疫学特征的改变，如抗核抗体阳性、血清IgG水平升高并在体内多部位沉积(如毛细血管壁和肠系膜)等[4]。邓鸿业等曾经用免疫荧光方法，测得BXSB雄性小鼠在1月龄时，抗核抗体就有明显升高[5]。抗核抗体试验虽然敏感但特异性差，许多相关甚至无关的疾病也可有抗核抗体阳性反应，因此只能作为一种筛选的方法[1]，以往强调确诊SLE的关键是从血清中找到红斑狼疮(LE)细胞，但LE细胞的形成需要一定的时间[6]。因为LE细胞的成分主要是抗核抗体(包括抗DNA抗体、抗组蛋白抗体[7])及中性粒细胞，所以如果在发现LE细胞之前，测出血中抗DNA抗体(特别是抗双链DNA抗体)，则能够较早地、也是较为特异性地提示SLE的发生[8]。关于抗DNA抗体的检测方法，常用的有放免[9]、荧光和ELISA[10]，其中，ELISA因操作简便易行，灵敏性不低于放免法且无放射性污染，已被广泛用于生物医学各领域，成为很有发展前途的免疫学诊断方法。本实验的结果提示：雄性BXSB小鼠可能从3月龄开始表现SLE， 4月龄前后病情达到最严重的程度，如果不经治疗，其平均生存期为5.5个月，这一观察与文献中关于BXSB小鼠生存期的报导是基本吻合的[4]。
, http://www.100md.com
本实验的另一个结果是，发病后的BXSB小鼠血清可抑制正常小鼠的淋巴细胞由ConA刺激的细胞转化，4月龄小鼠血清抑制作用最强(表2)。更为重要的是，血清对淋巴细胞转化的抑制作用与抗DNA抗体水平的升高有正相关关系(图 1)，提示BXSB小鼠发病后，血清中出现某种能够抑制T淋巴细胞转化的物质，这种物质产生的量或作用的强度与疾病的严重程度有关。这是一类什么性质的物质？与抗DNA抗体有什么因果关系？非常值得进一步探讨。
表2 不同月龄BXSB小鼠三种稀释度血清对正常淋巴细胞转化的影响
Table 2 The effect of BXSB serum of different month of age in different dilution on
the lymphocyte proliferation of normal mouse(x±Sx) month
, 百拇医药
n
1:20
n
1:40
n
1:80
control
BXSB
control
BXSB
control
BXSB
3
, 百拇医药
5
100±57
73±3
6
100±58
82±6
6
100±56
96±6
4
6
100±3
43±7****
, http://www.100md.com
6
100±8
74±11*
6
100±8
103±9
5
6
100±8
88±9
6
100±4
92±5
, 百拇医药
6
100±14
95±6
*t=1.912，P<0.05； **** t =7.484， P<0.0005； compared with control respectively.(n):the number of animal in each group.
图1 BXSB小鼠血清抗 DNA抗体水平的变化与该血清对正常小鼠淋巴细胞转化影响间的关系
Fig 1 Relationship between the change of anti-DNA antibody level in the serum of BXSB mouse and the change of lymphocyte proliferation of normal mouse induced by the serum of BXSB mouse
, 百拇医药
y=0.938-0.074x， r=0232， n=53， P<0.05
基金项目：卫生部基金(No.95-2-23)资助课题
[1]Hahn BH，In : Isselbacher KJ， Braunwold E，wilson，JD， et al.eds.Harrison's principles of internal medicine[M].13 th ed.New York:McGraw-Hilll，1994， 1643-1648.
[2] Pisetsky DS and Peters DV.A simple enzyme linked immunosorbent assay for antibodies to native DNA[J].J Immunological Methods，1981，41:187-200.
, http://www.100md.com
[3]蒋成淦主编.酶免疫测定法[M].第1版，北京：人民卫生出版社，1984，136-163.
[4] Berden JHM， Faaber P，Assmann KJM, et al.Effects of cyclosporin A on autoimmune disease in MRL/1 and BXSB mice[J].Scan J Immunol， 1986， 24:405-412.
[5]邓鸿业，邓玉兰，王桂琴，等.BXSB小鼠的免疫学及免疫病理学研究[J].中国免疫学杂志，1991，7：127-127.
[6]卢君健主编.实用结缔组织病学[M].第1版，北京：人民卫生出版社，1987，321-324.
[7]Massa，M.Debenedetti F，Pignatti P.et al.Anti-double stranded DNA ， anti-histone，and anti-nucleosome IgG reactivities in childnen with systemic lupus erythematosus[J].Clin Exp Rheumatol，1994，12:219-225.
, 百拇医药
[8]Zhang W and Reichlin M.IgM anti-A and D SnRNP proteins and IgM anti- dsDNA are closely associated in SLE sera[J].Clin Immunol Immunopathol，1995，74:70-76.
[9]Ter Borg EJ， Horst G，Limburg PC，et al.Changes in plasma levels of interleukin-2 receptor in relation to disease exacerbations and levels of anti-dsDNA and complement in systemic lupus erythematosus[J].Clin Exp Immunol，1990， 82:21-26.
[10]Ehrenstein M， Longhurst C and Isenberg D A.Production and analysis of IgG monoclonal anti-DNA antibodies from systemic lupus erythematosus(SLE) patients[J].Clin Exp Immunol，1993，92:39-45.
收稿日期：1998-10-02；修订日期：1998-12-25, http://www.100md.com
单位：梅林(北京医科大学生理学系)；汪静雪(北京医科大学生理学系)；邓鸿业(北京医科大学免疫学系，北京100083)；丁桂凤(北京医科大学免疫学系，北京100083)；范少光(北京医科大学生理学系)
关键词：系统性红斑狼疮；抗DNA抗体；淋巴细胞转化
基础医学与临床000109
摘要：用酶联免疫吸附剂测定法(ELISA)和3H-胸腺嘧啶核苷掺入法，观察一种自发性系统性红斑狼疮(SLE)好发小鼠(BXSB小鼠)在不同月龄时，血中抗DNA抗体水平的变化，并观察该血清对正常LACA小鼠淋巴细胞转化的影响。结果显示，自3月龄起，BXSB雄性鼠血中的抗DNA抗体水平开始升高，4月龄上升至高峰，5月龄仍保持较高水平，各月龄BXSB血清与对照血清相比，P<0.05(ANOVA)。同时，该血清对正常LACA小鼠淋巴细胞转化也有抑制作用，以4月龄血清的抑制作用最大。如果将同一只小鼠血清抗DNA抗体水平的变化与该血清对淋巴细胞转化的影响做回归和相关分析，发现两者有明显的正相关关系(r=0.232，n=53， P<0.05)。提示雄性BXSB小鼠可能从3月龄开始表现SLE。发病后，血清中产生某种能够抑制淋巴细胞转化的物质，它的产生与抗DNA抗体有平行关系。
, http://www.100md.com
中图分类号：R331.1 文献标识码：A
文章编号：1001-6325(2000)01-0034-04
The level of the anti-DNA antibody in the serum of BXSB mouse and the effect on lymphocyte proliferation
MEI Lin，WANG Jing-xue
(Department of Physiology)
DENG Hong-ye
(Department of Immunology，Beijing Medical University，Beijing 100083， China)
, http://www.100md.com
Abstract:The level of the anti-DNA antibody in BXSB serum and the effect of BXSB serum on lymphocyte proliferation in normal mouse were observed by using enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA) and 3H -thymidine incorporation .The level of anti-DNA antibody in male BXSB serum rose from the age of 3 month and reached to the highest value at the age of 4 month.Although there were a little drop in the antibody level at the age of 5 month， it was still higher than the one of control group(P=0.032， BXSB serum vs control serum，ANOVA).The experiment also showed that there was a dramatic negative correlation between the level of anti-DNA antibody and the effect of the same portion of BXSB serum on normal lymphocyte proliferation(r=0.232， n=53， P<0.05).It was concluded that the male BXSB mouse may manifest SLE from the 3rd month after birth.There generated in the SLE serum some substances which not only showed the inhibitory effect on normal lymphocyte proliferation but also were parallel，in its effect，with the level of anti-DNA antibody.
, http://www.100md.com
Key words：systemic lupus erythematosus ；anti-DNA antibody ； lymphocyte proliferation
系统性红斑狼疮(SLE)是一种病因不明、多器官多系统受损且反复发作的自身免疫性疾病。病情大多进行性发展，目前尚无根治方法。在SLE的多种免疫学检查中，最有助于SLE确诊的指标是抗DNA抗体的检查。检测血中该抗体、尤其是抗双链DNA抗体，是有助于证实SLE临床诊断的相对特异性指标[1]，而且抗体滴度随病情的变化而变化，当疾病处于活动状态时，抗体滴度升高，疾病相对静止时，抗体滴度下降[1]。本实验选用一种具有遗传性、自发性SLE的BXSB小鼠，测定其不同月龄时血清中的抗DNA抗体水平，同时观察这种血清对正常淋巴细胞转化(简称淋转，以下同)的影响。
1 材料与方法
1.1 动物及试剂
, 百拇医药
BXSB雄性小鼠系本校第三临床医学院皮肤科陈学荣教授自美国Jackson实验室引进、免疫学系动物实验室繁殖饲养并提供；雄性LACA小鼠、雄性Balb/c小鼠，均购自本校实验动物中心。小牛胸腺DNA购自Sigma公司(美国)；辣根过氧化物酶标记的羊抗小鼠IgG(HRP-IgG)购自Jackson实验室(美国)；刀豆蛋白A(ConA)购自Sigma；RPMI 1640 培养购自Life Technologies Inc(美国)；3H-胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)购自中国原子能研究所。
1.2 小鼠血清制备
将小鼠用乙醚轻度麻醉，分别在两侧眼内眦静脉取血，每侧一次取血100mL。置4℃，4h，离心2 000r/min，4℃ ，10min。取上清，分别用于测定抗体和做淋转实验。
1.3血清抗DNA抗体的ELISA检测
, 百拇医药 按照文献[2，3]的方法并稍加改进。(1)将DNA用包被缓冲液稀释为4.0mg/100mL，在96孔酶标板(美国Costar)的每孔内加100mL，37℃ 温育3h。加洗涤液110mL/well，置3min后弃去，共3次。(2)将BXSB雄性小鼠血清用稀释液分别作1:100、1:400和1:1600稀释，在每孔内加100mL，37℃ 温育3h后，洗涤同上。(3)用稀释液将二抗(HRP-IgG)稀释为1:4000，每孔内加100mL，37℃温育3h，洗涤同上。(4)每孔内加邻苯二胺(OPD)底物溶液100mL，37℃ 置30min，用2N H2SO4(50mL/well)终止反应。(5)在酶标仪上测定492nm下的光密度(OD)值。每块培养板设置空白对照(不加DNA，不加血清，不加二抗)、已知阴性血清对照(正常Balb/c小鼠血清)、已知阳性血清对照(雄性BXSB 5月龄)和待测血清组(不同月龄BXSB 小鼠) 。每一例实验数据来自三复孔。以Balb/c小鼠血清OD值为对照(100%)，用“待测血清OD值是对照血清OD值的百分之几”作为抗体水平变化百分率，即：
, 百拇医药
1.4 淋巴细胞转化实验
取正常LACA雄性小鼠肠系膜淋巴结，置于盛有Hanks液的培养皿中，压碎研磨，经400目尼龙网过滤，离心(200 r/min ， 10min)弃上清。再用Hanks 液洗2次。以RPMI 1640 液制成细胞悬液(3×106/mL)。在96孔细胞培养板中加入不同稀释度(1:20、1:40、1:80)的Balb/c血清或待测血清(100mL/孔)，并加细胞悬液(100mL/well)和ConA(0.4mg/well)，置于CO2 孵育箱中(37℃，5% CO2)培养48h。收获前6h ，加3H-TdR 0.2mCi/孔(或7.4KBq)收集细胞于玻璃纤维滤纸上，烤干后置闪烁液中，用b-液闪仪测定cpm值。以Balb/c血清的淋转cpm值为对照(100%)，用“待测血清的淋转cpm值是对照血清的淋转cpm值的百分之几”作为淋转变化百分率，即：
, 百拇医药
将出生后满一个月的第一天(称为1月龄，以下类推)的BXSB小鼠，经内眦静脉取血，以后每月取血一次，测血清抗DNA抗体和做淋转实验。
1.5 统计学处理
实验结果以均值±标准误(x±Sx)表示。两组间数据比较采用t检验，多组间比较采用ANOVA。
2 结果
2.1 BXSB 雄性小鼠血清抗DNA抗体的ELISA测定
自3月龄起，血清抗体达到有显著性意义的水平(1月龄和2月龄无意义)，4月龄时，抗体水平升高的幅度最大，5月龄时，抗体仍持较高水平，尤以1:100的血清稀释度变化最明显。各月龄BXSB血清与对照组血清相比，P<0.05(ANOVA)。见表1。
2.2 BXSB 血清对正常淋巴细胞转化的影响
, 百拇医药
在测血清抗DNA抗体的同时，将同一份血清与正常LACA小鼠肠系膜淋巴结细胞共同培养，以ConA刺激淋巴细胞转化。结果表明：3、4、5月龄的BXSB血清对淋转有不同程度的抑制作用，其中以4月龄鼠血清的抑制作用最大，见表2。
2.3 血清抗DNA抗体水平与该血清对正常淋转影响之间的关系
如果以血清抗DNA抗体水平变化的百分率为自变量，以同一份血清对正常淋巴细胞转化影响的百分率为应变量作直线回归及相关分析，可得直线回归方程：y= 0.938-0.074x， r=0.232(n=53，P<0.05 ， 图1)。
表1 不同月龄BXSB小鼠三种稀释度血清抗DNA抗体水平的变化
Table 1 The change of anti-DNA antibody level in different serum dilution from BXSB
, 百拇医药
mouse of different month of age(x±Sx) month
n
1:100
n
1:400
n
1:1600
control
BXSB
control
BXSB
control
, http://www.100md.com
BXSB
3
5
100±5
124±11*
6
100±11
112±4
6
100±29
95±10
4
6
, 百拇医药
100±7
212±33***
6
100±9
176±30**
6
100±8
121±27
5
6
100±6
177±37△
, http://www.100md.com
6
100±4
149±39
6
100±4
164±39
*t=1.986，P<0.05； △t=2.053， P<0.05；**t=2.417， P<0.025， ***t=3.326，P<0.005 compared with control respectively.(n):the number of animal in each group.
3 讨论
本实验第一部分的结果表明，BXSB雄性小鼠出生后第1～2个月，血中可能没有抗DNA抗体(或含量很少)。从第3个月起，利用本实验建立的ELISA，已经能够测出血清抗体的升高，第4个月时，抗体水平升高到最大值，第5个月有所下降但仍高于3月龄数值(表1)。5个月之后抗体水平如何变化？因为动物相继死亡(平均存活5.5个月)无法继续观查。BXSB是SLE好发的小鼠品系。从文献看，它发病后有多种免疫学特征的改变，如抗核抗体阳性、血清IgG水平升高并在体内多部位沉积(如毛细血管壁和肠系膜)等[4]。邓鸿业等曾经用免疫荧光方法，测得BXSB雄性小鼠在1月龄时，抗核抗体就有明显升高[5]。抗核抗体试验虽然敏感但特异性差，许多相关甚至无关的疾病也可有抗核抗体阳性反应，因此只能作为一种筛选的方法[1]，以往强调确诊SLE的关键是从血清中找到红斑狼疮(LE)细胞，但LE细胞的形成需要一定的时间[6]。因为LE细胞的成分主要是抗核抗体(包括抗DNA抗体、抗组蛋白抗体[7])及中性粒细胞，所以如果在发现LE细胞之前，测出血中抗DNA抗体(特别是抗双链DNA抗体)，则能够较早地、也是较为特异性地提示SLE的发生[8]。关于抗DNA抗体的检测方法，常用的有放免[9]、荧光和ELISA[10]，其中，ELISA因操作简便易行，灵敏性不低于放免法且无放射性污染，已被广泛用于生物医学各领域，成为很有发展前途的免疫学诊断方法。本实验的结果提示：雄性BXSB小鼠可能从3月龄开始表现SLE， 4月龄前后病情达到最严重的程度，如果不经治疗，其平均生存期为5.5个月，这一观察与文献中关于BXSB小鼠生存期的报导是基本吻合的[4]。
, http://www.100md.com
本实验的另一个结果是，发病后的BXSB小鼠血清可抑制正常小鼠的淋巴细胞由ConA刺激的细胞转化，4月龄小鼠血清抑制作用最强(表2)。更为重要的是，血清对淋巴细胞转化的抑制作用与抗DNA抗体水平的升高有正相关关系(图 1)，提示BXSB小鼠发病后，血清中出现某种能够抑制T淋巴细胞转化的物质，这种物质产生的量或作用的强度与疾病的严重程度有关。这是一类什么性质的物质？与抗DNA抗体有什么因果关系？非常值得进一步探讨。
表2 不同月龄BXSB小鼠三种稀释度血清对正常淋巴细胞转化的影响
Table 2 The effect of BXSB serum of different month of age in different dilution on
the lymphocyte proliferation of normal mouse(x±Sx) month
, 百拇医药
n
1:20
n
1:40
n
1:80
control
BXSB
control
BXSB
control
BXSB
3
, 百拇医药
5
100±57
73±3
6
100±58
82±6
6
100±56
96±6
4
6
100±3
43±7****
, http://www.100md.com
6
100±8
74±11*
6
100±8
103±9
5
6
100±8
88±9
6
100±4
92±5
, 百拇医药
6
100±14
95±6
*t=1.912，P<0.05； **** t =7.484， P<0.0005； compared with control respectively.(n):the number of animal in each group.
图1 BXSB小鼠血清抗 DNA抗体水平的变化与该血清对正常小鼠淋巴细胞转化影响间的关系
Fig 1 Relationship between the change of anti-DNA antibody level in the serum of BXSB mouse and the change of lymphocyte proliferation of normal mouse induced by the serum of BXSB mouse
, 百拇医药
y=0.938-0.074x， r=0232， n=53， P<0.05
基金项目：卫生部基金(No.95-2-23)资助课题
[1]Hahn BH，In : Isselbacher KJ， Braunwold E，wilson，JD， et al.eds.Harrison's principles of internal medicine[M].13 th ed.New York:McGraw-Hilll，1994， 1643-1648.
[2] Pisetsky DS and Peters DV.A simple enzyme linked immunosorbent assay for antibodies to native DNA[J].J Immunological Methods，1981，41:187-200.
, http://www.100md.com
[3]蒋成淦主编.酶免疫测定法[M].第1版，北京：人民卫生出版社，1984，136-163.
[4] Berden JHM， Faaber P，Assmann KJM, et al.Effects of cyclosporin A on autoimmune disease in MRL/1 and BXSB mice[J].Scan J Immunol， 1986， 24:405-412.
[5]邓鸿业，邓玉兰，王桂琴，等.BXSB小鼠的免疫学及免疫病理学研究[J].中国免疫学杂志，1991，7：127-127.
[6]卢君健主编.实用结缔组织病学[M].第1版，北京：人民卫生出版社，1987，321-324.
[7]Massa，M.Debenedetti F，Pignatti P.et al.Anti-double stranded DNA ， anti-histone，and anti-nucleosome IgG reactivities in childnen with systemic lupus erythematosus[J].Clin Exp Rheumatol，1994，12:219-225.
, 百拇医药
[8]Zhang W and Reichlin M.IgM anti-A and D SnRNP proteins and IgM anti- dsDNA are closely associated in SLE sera[J].Clin Immunol Immunopathol，1995，74:70-76.
[9]Ter Borg EJ， Horst G，Limburg PC，et al.Changes in plasma levels of interleukin-2 receptor in relation to disease exacerbations and levels of anti-dsDNA and complement in systemic lupus erythematosus[J].Clin Exp Immunol，1990， 82:21-26.
[10]Ehrenstein M， Longhurst C and Isenberg D A.Production and analysis of IgG monoclonal anti-DNA antibodies from systemic lupus erythematosus(SLE) patients[J].Clin Exp Immunol，1993，92:39-45.
收稿日期：1998-10-02；修订日期：1998-12-25, http://www.100md.com